【正文】 ? 血清中加硫酸銨至 50％飽和度，則 球蛋白 先沉淀析出， 加硫酸銨至飽和，則 清蛋白 沉淀析出 加有機溶劑 ? 有：乙醇、丙酮等 ? 原理：由于這些溶劑對水的親和力強于蛋白質分子而破壞了蛋白質周圍的水化膜，使蛋白質沉淀 ? 在蛋白質的 pI時，加入這些溶劑則沉淀效果更好 加重金屬鹽 ? 有：硝酸銀、醋酸鉛及氯化高汞等 ? 原理：這是因為蛋白質在 pHpI的溶液中帶負電荷，可與這些重金屬正離子結合成不溶性的蛋白鹽而沉淀。 變性作用的實際意義 ? 一是 防止蛋白質激素、酶、抗體、疫苗等活性蛋白質在生產(chǎn)和保存過程中變性，以保持其生物活性 ? 二是變性原理可用于滅菌等 鄧健 制作 張魯雁 審校 76 （四）蛋白質的沉淀 調節(jié)蛋白質溶液的 pH值至等電點 , 再加入適當?shù)拿撍畡┏サ鞍踪|分子表面的水化膜 , 可使蛋白質分子聚集而從溶液中沉淀析出。 如血紅蛋白失去運輸氧的功能 ， 胰島素失去調節(jié)血糖的功能 ， 酶失去催化能力等 ?其次是 各種理化性質的改變 。 ? 三級結構的形成和穩(wěn)定主要靠側鏈 R基團的相互作用 ， 作用力有以下幾種： ? （ 1）氫鍵 ? （ 2）鹽鍵 ? （ 3）疏水作用力 ? （ 4） Van der Waals力 ? （ 5）二硫鍵 四級結構（ quaternary structure） ? 四級結構：由 兩條或兩條 以上具有 三級結構的多肽 鏈通過疏水作用力、鹽鍵等次級鍵相互締合而成。 ? 動物體內控制和調節(jié)代謝的激素（ hormone）、腦內的神經(jīng)遞質（ neurotransmitter）、微生物中的一些抗菌素（ antibiotic）等都是肽類。 C HH NR 1C N HOC HR 2C N HOC HR 3C OO羧 肽 酶 斷 裂 位 點羧肽酶 A水解斷裂那些不是 Arg（精） 和 Lys（賴） 的 C端氨基酸 羧肽酶 B只水解斷裂 C端為 Arg或 Lys的氨基酸 ③ 多肽鏈的選擇性水解 (酶法和化學法 ) 化學法 — 溴化氰水解法，選擇性切割甲硫氨酸的羧基所形成的肽鍵。 ? （ 2） 肽鍵具有局部雙鍵性質 。 ? C末端 (Nterminal end) : 保留有 αCO2H 的一端， 也叫 羧基末端 , 通常寫在肽鏈的右邊。 肽也以 兩性離子 的形式存在。 N H 3+C O OC H+R C H C O O H C HN H 2R RN H 3C O OO HH+H+O H陽離子 兩性離子 陰離子 L o w p H H i g h p H等電點 (Isoelectric Point ， pI) 定義：在某一 pH 值下 ， 氨基酸所帶正電荷的數(shù)目與負電荷的數(shù)目正好相等 ， 即 凈電荷為零 ，該 pH 值為該氨基酸的 等電點 （ pI） 。 修飾氨基酸的結構 L胱氨酸 L羥脯氨酸 L羥賴氨酸 L甲賴氨酸 H 2 N + C H 2 C H 2 C H 2 C H 2 C HN H 2C O 2 C H 3H 3 N + C H 2 C H C H 2 C H 2 C H C O O O H N H 2C O O C+ N H 3C H 2HS S C H 2CC O O H+ N H 3 N +H OC O O H H非蛋白質氨基酸 ? 定義：不參與構成蛋白質但卻以各種形式分布于植物 、 細菌和動物體內的這些氨基酸 。 ? 形式存在：以 游離 或 結合形式 存在的氨基酸 。 ? amino acids 幾乎全部以兩性離子 I 的形式存在（并伴以極少量的陽性離子 和陰性離子 ） ? 氨基酸的溶解度最小 等電點時 （ 1） 氨基酸結構的影響 氨基酸 pI 酸性氨基酸 ＜ 中性氨基酸 ~ 堿性氨基酸 ＞ （ 2） 溶液酸堿度的影響 N H 3+C O OC H+R C H C O O H C HN H 2R RN H 3C O OO HH+H+O H pKa COOH : pKb : pKa NH3+ : pKb : pHPI pH=PI pHPI 陽離子 兩性離子 陰離子 氨基酸的電泳示意圖 PH 精氨酸 丙氨酸 天冬氨酸 2 7 正電荷 /負級 正電荷 /負級 正電荷 /負級 正電荷 /負級 負電荷 /正級 負電荷 /正級 正電荷 /負級 負電荷 /正級 負電荷 /正級 脫羧反應 (decarboxylation) R C H C O O N H 3 +R C H 2 N H 2 C O 2O HN N HC H 2 C H C O 2 N H 3 +脫 羧 酶N N HC H 2 C H 2 C O2N H 2H 3 N C H 2 C H 2 C H 2 C H 2 C C O O+HN H 3 +酶H 2 N C H 2 C H 2 C H 2 C H 2 C H 2 N H 2 + C O 2組胺 尸胺 γ 氨基丁酸（ GABA） ?γ 氨基丁酸 ?是由谷氨酸中 ?羧基脫羧后轉變而成 ?是腦內存在的重要神經(jīng)遞質 L谷氨酸 γ 氨基丁酸 與 HNO2反應 ? 根據(jù)放氮的體積 ， 可測定氨基酸 和多肽的 的含量 。 鄧健 制作 張魯雁 審校 33 二肽分子的兩端仍存在著游離的 NH3+ 和 COO, 因此它可以再與另一分子氨基酸脫水縮合形成 三肽 。 ? 肽鏈骨架 : 所有鏈狀多肽都有一個共同的骨架 一、肽的結構和命名 上頁 下頁 首頁 ? 三肽 (tripeptide)。 ? （ 3） 肽鍵呈反式構型 與 CN鍵相連的 O與 H或兩個 C?原子之間一般呈較穩(wěn)定的反式構型 。 C HH NC H2CC H2N HOSH3CC HRCO