【正文】
戴手套清洗粉,剪下一塊膜大小的凝膠。標(biāo)記右下角以便方向。濕膜轉(zhuǎn)移緩沖液為 2到 5 分鐘。 4. sandwich blotter paper – membrane gel blotter paper make sure no air bubbles are trapped The membrane must therefore be positioned correctly the first time. Do not try to adjust. 三明治 吸墨紙紙 –膜凝膠 記事簿紙 確保沒(méi)有氣泡被困 膜因此必須正確定位第一時(shí)間。不要試圖調(diào)整。 5. Hold the cover level and slide it gently down onto the stack. 持有的封面和滑動(dòng)它輕輕地放到堆棧 6. weigh down the lid in order to ensure even contact with the ,以確保即使接觸堆棧。 7. Connect the unit to a suitable power supply. Turn the power supply to zero before turning on. Turn on the power supply and set to approximately mA/cm2 of gel. Larger gels must be limited to mA/cm2 to avoid excessive heat build up. 。 連接到一個(gè)合適的電源供應(yīng)裝置。 打開(kāi)電源供應(yīng)零之前打開(kāi)。打開(kāi)電源并設(shè)定約 / 厘米 ~ 2凝膠。 較大的凝膠必須被限制在 /厘米 ~ 2避免過(guò)度生熱。 8 mm x 7 mm minigels at 100 mA. Molecular Weight Transfer Period 20,000 15 minutes 20,00080,0000 30 minutes 80,000 45 minutes Problem: 蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)移效率低? (轉(zhuǎn)移后對(duì)凝膠或膜染色進(jìn)行觀察) 1. transfer buffer中加入 20%甲醇或加入終濃度為%SDS, 可增加膜結(jié)合蛋白質(zhì)的能力; 2. 使用小孔徑的硝酸纖維素膜 3. 轉(zhuǎn)移后的膜在含 %戊二醛的 TBS中浸泡 45min。 麗春紅 S, 染色后可繼續(xù)進(jìn)行免疫檢測(cè) 靈敏度低 氨基黑 印度墨水 生物素 增強(qiáng)膠體金 膜總蛋白質(zhì)染色 1- 2泳道進(jìn)行膜總蛋白質(zhì)染色檢測(cè)轉(zhuǎn)移效率 免疫檢測(cè) 靈敏度 辣根過(guò)氧化物酶: 10- 20pg 堿性磷酸酶: 10- 50pg 免疫金: 1- 25pg 125I: 50- 100pg 放射自顯影術(shù):將含放射性同位素置 X感光膠片上感光,隨后經(jīng)顯影,定影,即可呈現(xiàn)出斑點(diǎn)或譜帶