elisa檢測(cè)技術(shù)ppt課件-資料下載頁(yè)
2024-10-16 23:35本頁(yè)面
【正文】 膜覆蓋板孔。 顯色和比色 顯色是 ELISA中的最后一步溫育反應(yīng)，此時(shí)酶催化無(wú)色的底物生成有色的產(chǎn)物。 在定量測(cè)定中，加入底物后的反應(yīng)溫度和時(shí)間應(yīng)按規(guī)定力求準(zhǔn)確。定性測(cè)定的顯色時(shí)間一般不需要嚴(yán)格控制及時(shí)判斷。 比色使用酶標(biāo)比色儀在 405nm波長(zhǎng)讀數(shù)。 若要終止反應(yīng)，以防反應(yīng)過(guò)度，常用的堿性磷酸酶反應(yīng)終止液為 1M NaOH,每孔100ul。 標(biāo)準(zhǔn)曲線建立 樣品 10μl+990μlPBS Bradford法測(cè)定樣品中可溶性蛋白濃度 100μl混合液 +1000μlG250 紫外分光光度計(jì)、 595nm依標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定 測(cè)定值 *100＝樣品總蛋白濃度 用牛血清白蛋白 （ BSA） 建立 。 分別配制 1 50、 80、 100、 140（ μ g?ml1） 的標(biāo)準(zhǔn)蛋白溶液 （ 用 PBS配制 ） 系列 。 ELISA測(cè)定數(shù)據(jù)的處理 ① 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn) Bt蛋白的量和其所對(duì)應(yīng)的 OD值計(jì)算出其回歸方程。 ②將所測(cè)定樣品的 OD值代入回歸方程計(jì)算出相應(yīng)的 Bt的量。 ③根據(jù)樣品中 Bt的量和可溶性蛋白的濃度計(jì)算 Bt占可溶性蛋白的相對(duì)比例。 Thank you！ Any questions?
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