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2025-10-10 04:45本頁面
【正文】 非離子型洗滌劑既含疏水基團，也含親水基團，使蛋白質(zhì)回復到水溶液狀態(tài)，從而脫離固相載體。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 顯色 顯色是酶催化無色的底物生成有色產(chǎn)物的溫育反應。反應的溫度和時間仍是影響顯色的因素。在一定時間內(nèi)，陰性孔可保持無色，而陽性孔則隨時間的延長而呈色加強。適當提高溫度有助于加速顯色進行。 TMB受光照的影響不大，可在室溫中置于操作臺上，邊反應觀察結(jié)果。但為保證實驗結(jié)果的穩(wěn)定性，宜在規(guī)定的適當時間閱讀結(jié)果。 TMB經(jīng) HRP作用后，約 40分鐘顯色達頂峰，隨即逐漸減弱，至 2小時后即可完全消退至無色。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 比色 拭干板底附著的液體，然后將板正確放入酶標比色儀中。 以蒸餾水校零點，測讀底物孔（未經(jīng)任何反應僅加底物液的孔）和空白孔（以生理鹽水或稀釋液代替標本作全過程的孔），以記錄本次試驗的試劑狀況。其后可用空白孔以蒸餾水校零點，以上各孔的吸光度需減去空白孔的吸光度，然后進行計算。 結(jié)果以光密度（ oplical density， OD），現(xiàn)按規(guī)定用吸光度（ absorbence， A），兩者含義相同。通常的表示方法是，將吸收波長寫于 A字母的右下角，如 OPD的吸收波長為492nm，表示方法為 A492nm或 OD492nm。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 酶標比色儀 酶標比色儀簡稱酶標儀，通常指測讀 ELISA光度計。針對固相載體形式的不同，各有特制的適用于板、珠和小試管的設計。酶標儀的主要性能指標有：測讀速度、讀數(shù)的準確性、重復性、精確度和可測范圍、線性等等。優(yōu)良的酶標儀的讀數(shù)一般可精確到 ，準確性為 177。 1%，重復性達 %。 操作時室溫宜在 1530℃ ，使用前先預熱儀器 1530分鐘，測讀結(jié)果更穩(wěn)定。測讀 A值時，要選用產(chǎn)物的敏感吸收峰，如OPD用 492nm波長。有的酶標儀可用雙波長式測讀。 各種酶標儀性能有所不同，使用中應詳細閱讀說明書。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 6 結(jié)果判斷 定性測定 定性測定的結(jié)果判斷作出 “ 有 ” 或 “ 無 ” 的回答，分別用 “陽性 ” 、 “ 陰性 ” 表示。在這種半定量測定中，將標本作一系列稀釋后進行試驗，呈陽性反應的最高稀釋度即為滴度。根據(jù)滴度的高低，可以判斷標本反應性的強弱，這比觀察不稀釋標本呈色的深淺判斷為強陽性、弱陽性更具定量意義。 在間接法和夾心法 ELSIA中，陽性孔呈色深于陰性孔。在競爭法 ELISA中則相反，陰性孔呈色深于陽性孔。兩類反應的結(jié)果判斷方法不同，分述于下。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 ： （ cutoff value） 一般為陰性對照 A值加上一個特定的常數(shù) ()，以此作為判斷結(jié)果陽性或陰性的標準。 /陰性對照比值：在實驗條件（包括試劑）較難保證恒定的情況下，這種判斷法較為合適。在得出標本（ S）和陰性對照（ N）的 A值后，計算 S/N值。 間接法和夾心法 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 （ 2）競爭法 因肉眼很難辨別弱陽性反應與陰性對照的顯色差異，一般均用比色計測定，讀出 S、 P和 N的吸光值。 a. 陽性判定值法 陰性判定值 = NCX+ PCX 陽性 A≤ 陽性判定值 陰性 A＞陽性判定值 b. 抑制率法 抑制率（ %） = （陰性對照 A值 標本 A值） 100%/陰性對照 陽性 抑制率 ≥ 50%為 陰性 ＜ 50% 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 定量測定 ELSIA操作步驟復雜，影響反應因素較多，特別是固相載體的包被難達到各個體之間的一致，因此在定量測定中，每批測試均須用一系列不同濃度的參考標準品在相同的條件下制作標準曲線。 測定大分子量物質(zhì)的夾心法 ELISA，標準曲線的范圍一般較寬，曲線的值逐點連接，所得曲線一般呈 S形，其頭、尾部曲線趨于平坦，中央較呈直線的部分是最理想的檢測區(qū)域。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果 4. ELISA的操作要點 嚴謹?shù)脑O計，優(yōu)質(zhì)的試劑，正確的操作和良好的儀器是保證 ELISA必要條件。 嚴格遵照規(guī)定操作，必能得出準確的結(jié)果。 原理 類型 試劑準備 對照 標本 結(jié)果
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