抗體效價(jià)的elisa測(cè)定(已修改)
2025-05-25 22:49 本頁(yè)面
【正文】 實(shí)驗(yàn)五 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 BSA抗體效價(jià) (1)學(xué)習(xí)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 的基本 原理 。 (2)掌握酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定技術(shù)，抗體的效價(jià)測(cè)定及酶聯(lián)免疫測(cè)定儀的使用。 免疫酶技術(shù) :酶標(biāo) Ab/Ag,酶結(jié)合物的酶在免疫反應(yīng)后 ，作用于厎物后顯色 ， 根據(jù)顏色的有無(wú)和深淺 ， 定量測(cè)定Ab/Ag。 免疫反應(yīng)：一次或數(shù)次 具 Ag,Ab特異的免疫學(xué)反應(yīng) 酶促反應(yīng)：只進(jìn)行一次 顯示出生物放大作用 ， 靈敏度 ng,pg 60年代初期， Averameas amp。 Ram等 建立了免疫酶技術(shù) (immunoenzymatic techniques) 利用特殊的交聯(lián)劑研制出辣根過(guò)氧化物酶 人血清白蛋白及酸性磷酸酯酶 抗體，統(tǒng)稱為酶標(biāo)記物或酶結(jié)合物，用于抗原或抗體的示蹤、定位或定量測(cè)定 酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定 (enzymelinked immunosorbent assay簡(jiǎn)稱為 Elisa)是在免疫酶技術(shù) (immunoenzymatic techniques)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的一種新型的免疫測(cè)定技術(shù)。本法兼有靈敏度高和特異性強(qiáng)兩方面的優(yōu)點(diǎn)。 1974年 Voller等 用聚苯乙烯微量反應(yīng)板作為免疫吸附劑吸附抗體 (抗原 )， 再與相應(yīng)的酶標(biāo)記物結(jié)合 操作更方便 ， 易重復(fù) 靈敏度可高達(dá) ng（ 109g） 至 pg(1012g)， (EnzymeLinked Immunosorbent Assay) 免疫標(biāo)記技術(shù) 應(yīng)用各種液相和固相免疫分析方法，對(duì)體液中的半抗原、抗原或抗體進(jìn)行定性和定量測(cè)定 標(biāo)記抗體或抗原 熒光素、放射性同位素、酶、鐵蛋白、膠體金及化學(xué) (或生物 )發(fā)光劑 鏡檢觀察或進(jìn)行自動(dòng)化測(cè)定 熒光顯微鏡，射線測(cè)量?jī)x，酶標(biāo)檢測(cè)儀，電子顯微鏡和發(fā)光免疫測(cè)定儀等 直接在細(xì)胞、亞細(xì)胞、超微結(jié)構(gòu)及分子水平上 ,對(duì)抗原抗體反應(yīng)進(jìn)行定性和定位研究 酶 性能穩(wěn)定 、 經(jīng)濟(jì)易得 、 底物無(wú)色 、 產(chǎn)物顯色 ，便于檢測(cè) 常用的酶 :堿性磷酸酯酶 、 辣根過(guò)氧化物酶 (horserad peroxidase簡(jiǎn)稱 HRP)、 葡萄糖氧化酶 、 半乳糖苷酶等 。 酶標(biāo)技術(shù) 戊二醛法， 過(guò)碘酸氧化法 將酶與 Ab交聯(lián)在一起 AgAb抗 AbHRP TMB+H2O2 產(chǎn)物（黃色， OD450)+H2O 圖一 直接型 Elisa 圖二 間接型 Elisa 圖三 雙抗體夾心型 ELISA 圖四 固相抗體競(jìng)爭(zhēng)型 ELISA 未知抗原量 =A（ 1） A（ 2） 每次反應(yīng)后都要反復(fù)洗滌？ 1. 保證反應(yīng)的定量反應(yīng) 2. 防止重疊反應(yīng)，引起非特異現(xiàn)象。 Partially purified, inactivated HIV antigens antigens precoated onto an ELISA plate 部分純化，滅活病毒抗原 抗原涂到酶標(biāo)板 Patient serum which contains antibodies. If the patient is HIV+, then this serum will contain antibodies to HIV, and those antibodie
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