【正文】 指導原則是對申請人和審查人員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用 ，但是需要提供詳細的研究資料和驗證資料。應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制訂的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善、科學技術的不斷發(fā)展，其相關內容也將進行適時的調整。 二、適用范圍 本指導原則適用于核酸擴增法檢測試劑的注冊技術審查，其他類核酸檢測試劑可參照相關內容。 三、基本要求 （一）基本原則 《醫(yī)療器械生產(chǎn)許可證》。研制、生產(chǎn)用的各種原料、輔料等應制定其相應的質量標準，并應符合有關法規(guī)的要求。 2．試劑生產(chǎn)企業(yè)應具有與其技術要求相適應的人員、廠房、設施和 — 23— 儀器設備以及適宜的生產(chǎn)環(huán)境，配備滿足核酸提取和擴增檢測以及操作人員防護所需的設備。建立專用實驗室，實驗室應當嚴格分區(qū)，人員和物品應當單向流動，以最大限度地防止實驗過程中樣品之間的污染和避免擴增產(chǎn)物的污染。生產(chǎn)用于病原微生物核酸檢測的生產(chǎn)企業(yè)應建立符合生物安全要求的設施和措施。 《體外診斷試劑生產(chǎn)實施細則（試行）》的要求，建立相應的質量管理體系，并應通過《體外診斷試劑生產(chǎn)企業(yè)質量管理體系考核評定標準（試行）》的考核。 ，擴增體系應設定合理的內標和外標，試劑需設置抗污染的特定措施，擴增產(chǎn)物須進行確證研究。 ，應提供與通行原材料比對研究結果及相關資料。使用未列入上述標準的化學試劑，應不低于分析純。 （二）原材料 應提供主要原材料如引物、探針、企業(yè)參考品或標準品等的選擇與來源、制備過程、質量分析和質量標準等的相關研究資料。若主要原材料為企業(yè)自己生產(chǎn)，其生產(chǎn)工藝必須相對穩(wěn)定；如主要原材料來自市場（從其他單位購買），應提供的資料包括：對物料供應商審核的相關資料、購買合同、供貨方提供的質量標準、出廠檢定報告，以及該原材料到貨后的質量檢驗資料。主要原材料（包括生產(chǎn)工藝）或其供應商發(fā)生變更，應依據(jù)國家相關法規(guī)的要求進行變更申請。 核酸類檢測試劑的包裝材料和耗材應無脫氧核糖核酸酶（ DNase）和核糖核酸酶（ RNase）污染。 （ dNTP） 核酸的組成成分，包括： dATP、 dUTP、 dGTP、 dCTP和 dTTP。應為高效液相色譜（ HPLC）純、 PCR 級，無 DNase 和 RNase污染。 — 20℃保存。 — 24— 由一定數(shù)量的 dNTP 構成的特定序列，通常采用脫氧核糖核酸（ DNA）合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化。 凍干粉，序列正確，合成量應達到試劑生產(chǎn)要求。純度應達到電泳級（ PAGE）或 HPLC級，不含雜帶。應提供合成機構出具的合成產(chǎn)物的質 檢證明，如 PAGE電泳結果或 HPLC分析圖譜。 應作 HPLC 分析和紫外光吸收分析。以紫外分光光度計測定OD260nm/OD280nm的比值在 — 之間，可視為合格引物。 20℃保存。 是指特定的帶有示蹤物（標記物）的已知核酸片段（寡聚核苷酸片段），能與互補核酸序列退火雜交，用于特定核酸序列的探測。通常采用 DNA 合成儀人工合成，合成后經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳或其他適宜方法純化，在 539。端 (和 /或 339。端 )進行標記，如熒光素報告基團或其他發(fā)光標記物，在 339。端標記熒光素淬滅 基團，并經(jīng) HPLC 或其他適宜方法純化。 凍干粉，純度應達到 HPLC 純。應提供合成機構出具的合成產(chǎn)物的質檢證明，如 HPLC 分析圖譜；應對探針的核酸序列及標記的熒光素或化學發(fā)光物進行核實，并作 HPLC 分析。應以可見 — 紫外分光光度計進行 200— 800nm 掃描，在 260nm 處應有吸收峰。另外，根據(jù)標記熒光素的不同，還應該在熒光素的激發(fā)波長處有吸收峰，如 FAM熒光素在 494nm、TET 熒光素在 521nm、 TAMRA 熒光素在 560nm 處有特異的吸收峰，雜交探針在 493nm、 625nm、 685nm 處有特異的吸收峰 ，檢定合格后入庫。避光、 20℃保存。 如 TaqDNA 聚合酶。應具有 DNA 聚合酶活性，無核酸內切酶活性；具熱穩(wěn)定性， 94℃保溫 1小時后仍保持 50%活性。 20℃保存。 （ UNG） 具有尿嘧啶糖基化酶活性，無核酸外切酶及核酸內切酶活性，IUUNG — 25— 在 37℃處理 3分鐘后， 103拷貝以下含 U模板應完全降解，不能產(chǎn)生擴增產(chǎn)物。 20℃保存。 具逆轉錄酶活性，無核酸內切酶活性。 — 20℃保存。 （三 ）生產(chǎn)工藝 核酸擴增類檢測試劑的基本生產(chǎn)工藝通常包括：配制工作液、半成品檢定、分裝和包裝。配制工作液的各種原材料及其配比應符合要求，原材料應混合均勻，配制過程應對電導率 pH、等關鍵參數(shù)進行有效控制。 工藝研究的資料應能對反應體系涉及到的基本內容，如樣本類型、樣本用量、試劑用量、反應條件、校準方法、質控方法、臨界值的確定、穩(wěn)定性和有效期，提供確切的依據(jù)。 （四）質量控制 （ 1）按批號抽取規(guī)定數(shù)量的半成品。 （ 2）以參考品 /對照品進行半成品質量控制。如果產(chǎn)品具有國家標準品或參考品，應以其進行檢定。如果產(chǎn)品不具有國家標準品或參考品，應根據(jù)規(guī)定制備相應的企業(yè)參考品，企業(yè)參考品的制備應有規(guī)范的質量控制程序，以保證產(chǎn)品的安全性、有效性及質量可控，其質量應不低于國家食品藥品監(jiān)督管理局已經(jīng)批準的同類產(chǎn)品的質量。 （ 3）半成品檢定內容包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度。檢測結果應符合質量標準的要求。 （ 4）半成品檢定合格后，按試劑盒組成及時進行分裝和包裝。 2.成品質量控制 （ 1）每一批核酸擴增法檢測試劑的試生產(chǎn)量應滿足工藝研究、分析性能驗證、穩(wěn)定性研究、臨床試驗、自測及注冊檢驗等各階段所需樣品量的要求。 — 26— （ 2）產(chǎn)品完成包裝后，應根據(jù)生產(chǎn)量進行抽樣和生產(chǎn)記錄審核。（ 3）以參考品 /對照品進行成品質量檢驗。結果應符合要求。（ 4）成品檢驗的內容應包括：陰 /陽性參考品符合率、靈敏度、特異性、精密度、線性范圍（定量產(chǎn)品）和穩(wěn)定性。 5．試劑批放行前，應對需要進行穩(wěn)定性考核的試劑成分，在特定溫度或條件下進行穩(wěn)定性試驗。穩(wěn)定性試驗可采用加速破壞試驗。 四、名詞解釋 核酸擴增法檢測試劑：核酸擴增技術泛指以擴增脫氧核糖核酸（ DNA）或核糖核酸（ RNA）為手段，檢測特定核酸序列或篩查特定基因的檢測技術，如聚合酶鏈反應（ PCR）、連接酶鏈反應（ LCR）、轉錄依賴的擴增反應（ TMA）等。核酸擴增法檢測試劑是基于核酸擴增檢測技術的體外診斷試劑，目前已經(jīng)用于病原體檢測、特定疾病的早期診斷和體內物質的型別鑒定等不同領域。 五、參考文獻 1.《中國生物制品規(guī)程》（ 2021年版），化學工業(yè)出版社 — 27— 第四篇：抗人球蛋白檢測試劑注冊技術審查指導原則（ 2021 年） 附件 3 抗人球蛋白檢測試劑注冊技術審查指導原則 本指導原則旨在指導注冊申請人對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術審評部門對注冊申報資料的技術審評提供參考。 本指導原則是對抗人球蛋白檢測試劑的一般要求，申請人應依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內容進行充實和細化。如申請人認為有必要增加本指導原則不包含的研究內容，可自行補充。 本指導原則是對申請人和審查人 員的指導性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，亦不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究資料和驗證資料，相關人員應在遵循相關法規(guī)的前提下使用本指導原則。 本指導原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善，以及科學技術的不斷發(fā)展，本指導原則相關內容也將適時進行調整。 一、范圍 抗人球蛋白檢測試劑可進行直接抗人球蛋白試驗和間接抗人球蛋白試驗，主要用于不規(guī)則抗體篩查、交叉配血、抗體致敏紅細胞的檢測等。 本指導原則適用于抗人球蛋白檢測試劑，同時適用于不同的檢測方法，如試管法、柱凝集法等，但不適用于血源篩查用抗人球蛋白檢測試劑。 本指導原則僅包括對抗人球蛋白檢測試劑注冊申報資料中部分項目的要求，適用于進行產(chǎn)品注冊和相關許可事項變更的產(chǎn)品。其他未盡事宜，應當符合《體外診斷試劑注冊管理辦法》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局令第 5 號）（以下簡稱《辦法》）等相關法規(guī)要求。 二、注冊申報資料要求 （一）綜述資料 綜述資料的撰寫應符合《關于公布體外診斷試劑注冊申報資料要求和批準證明文件格 式的公告》（國家食品藥品監(jiān)督管理總局公告 2021年第 44 號）（以下簡稱“ 44 號公告”）的相關要求。內容主要包括產(chǎn)品預期用途、產(chǎn)品描述、有關生物安全性的說明、有關產(chǎn)品主要研究結果的總結和評價以及同類產(chǎn)品在國內外批準上市的情況介紹等內容，其中同類產(chǎn)品上市情況介紹部分應著重從靈敏度、特異性、效價、重復性等方面寫明擬申報產(chǎn)品與目前市場上已獲批準的同類產(chǎn)品之間的異同。 （二）主要原材料研究資料 主要原材料研究資料應包括主要組成成分（抗體、凝膠、玻璃珠等）的選擇、制備及其質量標準的研究資料。 明確抗體的來源，如為單克隆抗體應明確細胞株、克隆號等內容。提供抗體靈敏度、特異性、效價等基本性能的驗證資料。 抗體如為自行生產(chǎn)，提供抗體的詳細生產(chǎn)及鑒定過程。 靈敏度：已知抗體效價的臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種血型抗體（ IgG）的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于 1+。 特異性：臨床有意義的已知血型系統(tǒng)至少 7 種，每種選 1 個抗體（ IgG），與對應的抗原陽性細胞均應檢測陽性。 與不規(guī)則抗體陰性樣本檢測結果應為陰性。 效價：如采用倍比稀釋的方法驗證抗人球蛋白試劑的效價，分別采用 IgG和 /或 C3d致敏的細胞或根據(jù)廠家確立的研究方法進行驗證。 2. 填充物的選擇：說明填充物如凝膠、玻璃珠的特性，如組成、粒徑及其質量控制要求。應提交選擇比較過程，提交驗證試驗資料。 ：應說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標及功能性進行研究驗證。 ：應說明組成成分，并對外觀、性狀、 pH 值等物理指標及功能性進行研究驗證。 （三）主要生產(chǎn)工藝及反應體系的研 究資料 ，可用流程圖方式表示，并簡要說明主要生產(chǎn)工藝的確定依據(jù)。 。 、每一步生產(chǎn)工藝的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。如抗體濃度的選擇確定過程、凝膠溶脹條件的確定、填充量及填充過程的研究資料，填充應確保均勻無氣泡，以及質量控制的要求。 、每一步反應體系的確認資料及試驗數(shù)據(jù)。 反應體系的設置應符合《全國臨床檢驗操作規(guī)程》等公認標準操作規(guī)范、指南或標準的要求。如紅細胞懸液制備要求及紅 細胞濃度的確定、用量的要求、孵育時間等；應提交離心條件的研究資料，建議以離心力或固定離心機型號固定轉數(shù)和時間的方式設置離心條件。 （四）分析性能評估資料 申請人應提交在產(chǎn)品研制或成品驗證階段對試劑進行的所有性能驗證的研究資料，對于每項分析性能的評價都應包括具體研究目的、實驗設計、研究方法、可接受標準、實驗數(shù)據(jù)、統(tǒng)計方法等詳細資料。有關分析性能驗證的背景信息也應在申報資料中有所體現(xiàn)，包括實驗地點（實驗室）、適用儀器、試劑規(guī)格、批號、臨床樣本來源等。分析性能評估的實驗方法可以參考國內或國際有關體 外診斷產(chǎn)品性能評估的指導原則進行。 產(chǎn)品性能研究所采用的各種儀器、試劑或其他物品如可能均應采用境內或境外已批準上市的產(chǎn)品，如抗體篩查紅細胞、血型抗體等。 分析性能評估試驗中應明確所有試驗每種試劑的用量、試劑紅細胞的濃度、采用的試驗方法（試管法、柱凝集法、微孔板法等）。所有試驗方法應符合配合使用的血型試劑的具體操作要求。 對于抗人球蛋白檢測試劑建議著重對以下分析性能進行研究： ： 提供臨床有意義的血型系統(tǒng)至少 7 種不規(guī)則抗體（ IgG）檢測靈敏度和特異 性的驗證資料，明確所檢出抗體的抗體效價的具體要求，可參照以下要求進行實驗。 靈敏度 與已知抗體效價的血型抗體的最高稀釋倍數(shù)的凝集強度不小于 1+，并且抗體效價不低于試管間接抗人球蛋白法測定結果。 C3d 凝集強度≥ 2+。 特異性 與已知抗體類型的血型抗體對應的 O 型相應抗原陽性紅細胞的反應為陽性。 與已知抗體類型的血型抗體對應的 O 型相應抗原陰性紅細胞的反應為陰性。