【文章內容簡介】 搜尋所需要的產(chǎn)酶微生物；從菌種保藏中心篩選；從基因庫篩選6. 微生物發(fā)酵產(chǎn)酶的培養(yǎng)方式有哪些？固體發(fā)酵的培養(yǎng)：以麩皮、米糠為主要原料，加入其他必要的營養(yǎng)成分，制成固體或半固體的麩曲后，進行發(fā)酵產(chǎn)酶。液體深層發(fā)酵：采用液體培養(yǎng)基，經(jīng)滅菌、冷卻后接種產(chǎn)酶菌，在一定條件下發(fā)酵產(chǎn)酶。固定化細胞發(fā)酵：將細胞固定在水不溶性的載體上，在一定的空間范圍內進行生命活動而產(chǎn)酶。固定化原生質體發(fā)酵：利于胞內物質透過細胞膜分泌到細胞外。7. 分析提高微生物產(chǎn)酶量的方法有哪些？（1）針對性地打破生物細胞內酶蛋白的合成機制，可從兩方面入手：條件控制：發(fā)酵條件優(yōu)化：控制溫度、PH，優(yōu)化培養(yǎng)基，根據(jù)需求供給無菌空氣，掌控發(fā)酵周期，確定放罐時間，避免自溶。采用添加誘導物、解除阻遏物、流加等技術提高產(chǎn)酶量。（2）遺傳控制：包括基因突變和基因重組。8. 什么是基因重組？構建基因工程菌的一般流程是什么？根據(jù)人們預先設想，利用酶學的方法，將目的基因重組到一個適宜的載體上，組成重組子，將重組子轉化到適當受體細胞中進行擴增表達，以達到改造生物細胞目的的技術。流程：目的基因片段的產(chǎn)生和分離；目的基因片段共價連接到載體上，即體外重組；體外重組的雜合分子轉入合適的宿主；篩選和檢測。9. 設計一個實驗方案從自然環(huán)境中篩選獲得一株產(chǎn)α淀粉酶的微生物，并獲取其編碼α淀粉酶的基因。簡述該實驗方案的基本原理，并描述實驗流程。PCR擴增后測序獲得基因序列第6章 酶的分離純化1. 酶提取、分離純化的一般技術路線。2. 細胞破碎的方法及其原理。填空機械破碎——通過機械運動產(chǎn)生的剪切力，使組織、細胞破碎?！獡v碎法、研磨法、勻漿法；物理破碎——通過各種物理因素的作用，使組織、細胞的外層結構破壞，而使細胞破碎?！獪囟炔钇扑榉?、壓力差破碎法、超聲波破碎法；化學破碎——通過各種化學試劑對細胞膜的作用，而使細胞破碎?！袡C溶劑：甲苯、丙酮、丁醇、氯仿，表面活性劑：Triton、Tween；酶促破碎——通過細胞本身的酶系或外加酶制劑的催化作用，使細胞外層結構受到破壞，而達到細胞破碎。——自溶法、外加酶制劑法。3. 什么是鹽溶？什么是鹽析？鹽溶現(xiàn)象：大多數(shù)蛋白類酶都溶于水，而且在低濃度的鹽存在的條件下，酶的溶解度隨鹽濃度的升高而增加，稱為鹽溶現(xiàn)象。鹽析：在鹽濃度達到某一界限后，酶的溶解度隨鹽濃度升高而降低，這稱為鹽析現(xiàn)象。4. 酶沉淀分離的方法有哪些？鹽析沉淀、等電點沉淀、有機溶劑沉淀的原理。大題鹽析沉淀法、等電點沉淀法、有機溶劑沉淀法、復合沉淀法、選擇性變性沉淀法。鹽析沉淀原理：利用不同蛋白質在不同的鹽濃度條件下溶解度不同的特性，通過在酶液中添加一定濃度的中性鹽，使酶或雜質從溶液中析出沉淀，從而使酶與雜質分離。等電點沉淀法原理：利用兩性電解質在等電點時溶解度最低，以及不同的兩性電解質有不同的等電點這一特性，通過調節(jié)溶液的pH值，使酶或雜質沉淀析出，從而使酶與雜質分離。有機溶劑沉淀原理：利用酶與其他雜質在有機溶劑中的溶解度不同，通過添加一定量的某種有機溶劑，使酶或雜質沉淀析出，從而使酶與雜質分離。5. 什么是膜分離？膜分離的基本類型和截留的主要物質。膜分離：借助于一定孔徑的高分子薄膜，將不同大小、不同形狀和不同特性的物質顆?；蚍肿舆M行分離的技術稱為膜分離技術。基本類型：（1）加壓膜分離：微濾、超濾、反滲透；，超濾截留物質為分子量在500以上的高分子，反滲透截留物質為小分子物質。（2）電場膜分離：電滲析、離子交換膜電滲析；陽膜截留陰離子，陰膜截留陽離子。（3）擴散膜分離：透析。截留物質為大分子溶質。6. 什么是吸附層析？分配層析？離子交換層析？凝膠層析？親和層析？層析聚焦？各自的分離依據(jù)？吸附層析：利用吸附劑對不同物質的吸附力不同而使混合物中各組分分離。分配層析：利用各組分在兩相中的分配系數(shù)不同，而使各組分分離的方法。離子交換層析：利用離子交換劑上的可解離基團（活性基團）對各種離子的親和力不同而達到物質分離。凝膠層析：以各種多空凝膠為固定相，利用流動相中所含各組分的相對分子質量不同而達到物質分離。親和層析：利用生物分子與配基之間所具有的專一而又可逆的親和力，是生物分子分離純化。層析聚焦：將酶等兩性物質的等電點特性與離子交換層析的特性結合在一起，實現(xiàn)組分分離。7. 對于某種酶制劑，如α淀粉酶，如何檢查其是否達到預期純化的精度要求？計算酶活力和比活力、回收率、提純倍數(shù)?；厥章剩禾峒兦芭c提純后酶的總活力之比，表示提純過程中酶損失程度大小?；厥章试礁邠p失越小提純倍數(shù)：提純前后比活力之比，這是表示提純過程中純度提高的倍數(shù)。提純倍數(shù)越大，表示該方法純化效果越好。第7章 固定化酶和細胞1. 酶固定化是為了克服游離酶應用過程中的哪些缺點？（1） 酶的穩(wěn)定性較差：除了某些耐高溫的酶，以及胃蛋白酶等可以耐受較低的pH條件以外，大多數(shù)的酶在高溫、強酸、強堿和重金屬離子等外界因素影響下，都容易變性失活。（2） 酶的一次性使用：酶一般都是在溶液中與底物反應，酶在反應系統(tǒng)中與底物和產(chǎn)物混在一起，反應結束后，即使酶仍有很高的活力，也難于回收利用。這種一次性使用酶的方式，不僅使生產(chǎn)成本提高，而且難于連續(xù)化生產(chǎn)。（3） 產(chǎn)物的分離純化較困難：酶反應后成為雜質與產(chǎn)物混合在一起，無疑給產(chǎn)物的進一步分離純化帶來一定的困難。2. 什么是固定化酶？固定化酶的優(yōu)點和缺點？ 固定化酶：在一定空間內呈閉鎖狀態(tài)的酶，能連續(xù)的進行反應，反應后的酶可以回收重復利用。優(yōu)點：（1）不溶于水，易于與產(chǎn)物分離；（2）可反復使用；（3）可連續(xù)化生產(chǎn)；（4）穩(wěn)定性好。缺點：（1）固定化過程中往往會引起酶的失活；（2）首次制備成本較高；（3）適用于可溶性底物，尤其可溶性小分子底物，對大分子不適宜。3. 酶固定化有哪些方法，優(yōu)缺點？（1）非化學結合法：物理吸附法：利用各種固體吸附劑將酶或含酶菌體吸附在其表面上，而使酶固定化的方法。優(yōu)點是操作簡便，條件溫和，不會引起酶變性失活，載體廉價易得，而且可以反復使用。缺點是由于靠非化學吸附作用，結合力較弱，酶與載體結合不牢固而容易脫落，所以使用受到一定的限制。離子結合法：通過離子鍵使酶與載體結合的固定化方法。優(yōu)點是條件溫和，操作簡單，制備過程中，活力損失較少。缺點是離子鍵結合力較弱，結合力不牢固，在pH和離子強度等條件改變時，酶容易脫落。（2）化學結合法：交聯(lián)法：借助雙功能試劑使酶分子之間發(fā)生交聯(lián)作用，制成網(wǎng)狀結構的固定化酶的方法稱為交聯(lián)法。優(yōu)點是結合牢固，可長時間使用。缺點是交聯(lián)反應條件較劇烈，酶分子多個基團被交聯(lián)，酶活力損失較大；顆粒較小，使用不便。共價結合法：通過共價鍵將酶蛋白分子上的反應集團與載體表面反應基團結合，從而使酶固定化的方法。優(yōu)點是結合牢固，固定化酶的穩(wěn)定性好，利于連續(xù)使用，不會因