蛋白質工程制藥(編輯修改稿)
2025-01-16 07:57 本頁面
【文章內容簡介】 延長治療組小鼠的存活時間對健康小鼠超劑量使用時，沒有毒副作用的產生三個基本條件蛋白質 分子設計的分類蛋白質從頭設計蛋白質分子設計策略順式思維理性化設計 —— 合理化設計基于各種功能篩選平臺的非理性逆向改造策略 —— 非理性的體外進化兩種策略的結合蛋白質分子設計的策略蛋白質分子設計三個基本條件蛋白質 分子設計的分類蛋白質從頭設計蛋白質分子設計策略 順式思維理性化設計 ——合理化設計基于現(xiàn)有知識信息：蛋白質的結構與功能；因此，受到已有認識水平的制約。蛋白質從頭設計蛋白質分子設計的策略蛋白質分子設計三個基本條件蛋白質 分子設計的分類蛋白質從頭設計蛋白質分子設計策略 基于各種功能篩選平臺的非理性逆向改造策略 ——非理性的體外進化1）構建包含眾多突變蛋白的文庫： 隨機突變、 DNA改組等2）篩選文庫： 從功能入手進行篩選所需要的蛋白3）進行蛋白質基本結構、序列信息的分析蛋白質分子設計的策略蛋白質分子設計三個基本條件蛋白質 分子設計的分類蛋白質從頭設計蛋白質分子設計策略兩種策略的結合非理性的體外進化： 彌補合理性化設計應用中的局限性，并且迅速得到大量有功能的目標分子，通過分析積累所需的蛋白質結構與功能相關信息合理化設計： 對非理性篩選出的候選分子進行合理化的分子修正，使之進一步符合實際需求蛋白質分子設計的策略蛋白質分子設計三個基本條件蛋白質 分子設計的分類蛋白質從頭設計蛋白質分子設計策略S2 蛋白質工程的基本技術n 定點突變技術 n 隨機突變技術寡核苷酸引物介導 的定點突變 PCR介導的定點突變盒式突變易錯 PCR DNA改組技術易錯 PCRn 連續(xù)易錯 PCR（ sequential error prone PCR）：經以上一次 PCR突變的基因很難獲得滿意的結果，于是將前一輪 PCR擴增得到的有用突變基因作為下一輪 PCR的模板，每次獲得的突變累積起來，產生重要的有益突變?？蛇z傳的變化只發(fā)生在單一分子內部，屬于 無性進化 （ asexual evolution）n 易錯 PCR（ errorprone PCR）：利用缺乏修復功能的 Taq酶，并設置容易引起出錯的 PCR反應條件，在擴增目的基因的同時引入堿基錯配，導致目的基因隨機突變 —— 完全隨機化易錯 PCRn 優(yōu)點： 簡便易行167。 不足： 突變文庫規(guī)模有限，有益突變少，后續(xù)篩選工作費力、耗時，只適用于較小的基因片段（ 800bp）DNA改組技術n DNA改組 （ DNA shuffling） ，又叫有性 PCR（ sexualPCR） 等，將單一基因 隨機片段
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