蛋白質(zhì)工程在醫(yī)藥工業(yè)中的應(yīng)用(編輯修改稿)
2025-02-02 08:52 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 DR替換并不能保證抗體具有好的親和力，因此在構(gòu)建時還必需包括 對影響抗原結(jié)合位點的空間結(jié)構(gòu)的框架序列 進行操作。 小分子抗體包括 Fab、 Fv或 ScFv、單域抗體及最小識別單位 等幾種。 小分子抗體有很多優(yōu)點 : 可以用細菌發(fā)酵生產(chǎn)，成本低 。 分子小，穿透力強 。 不含 Fc，沒有 Fc帶來的效應(yīng) 。 在體內(nèi)循環(huán)的半衰期短，易清除，利于解毒排出 。 易于與毒素或酶基因連接，便于直接獲得免疫毒素或酶標抗體等。 3 小分子抗體 Fv ScFv 單區(qū)抗體 最小識別單位 Fab 由完整的 輕鏈和 Fd組成，大小為完整分子的 1/3。 把 Fab與細菌的前導(dǎo)肽相連，在前導(dǎo)肽的作用下Fab進入質(zhì)周腔，裝配折疊后，它具有結(jié)合抗原的活性。 (1)Fab Fv、 ScFv的大小約為全分子的 1/6。 (2)Fv 或 ScFv Fv ScFv 連接肽 Fv由 VH與 VL構(gòu)成，由于其結(jié)合是非共價結(jié)合，故Fv不穩(wěn)定。 在 VH與 VL之間加上一段連接肽，把 VH與 VL連成一條單鏈，得到 ScFv，即單鏈抗體 。 連接肽 的長度在 1015個氨基酸左右，不宜太長或太短，它應(yīng)具有柔軟性，側(cè)鏈少，抗原性弱等特點。常用的連接肽是 (GGGGS)3。 單鏈抗體 的構(gòu)建在已知親本 DNA序列時可用完全人工合成法 。 在具備親本單抗可變區(qū)的 cDNA克隆時，可用 定點突變法 在其兩端造成適當?shù)膬?nèi)切酶位點，與人工合成的連接肽編碼序列連接，組裝到表達載體中 。 如果從雜交瘤細胞系構(gòu)建單鏈抗體，可用 PCR方法 擴增可變區(qū)基因，再組裝到適當?shù)谋磉_載體上。 單鏈抗體 最常用的 表達體系是 大腸桿菌， 有 2種方式 : 一是表達為 包涵或非包涵體的不溶蛋白 。產(chǎn)量高，可達細菌蛋白總量的 5%20%，但需進行變性復(fù)性，使其形成正確的立體結(jié)構(gòu)，恢復(fù)抗體活性 。 二是 分泌型表達 ，將細菌的信號肽序列與單鏈抗體的氨基端相連，單鏈抗體分子就可分泌到質(zhì)周腔和細菌體外，進行折疊后成為有活性的
教學(xué)課件相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1