對二氯苯對濕地土壤細菌群落多樣性的影響畢業(yè)論文(編輯修改稿)
2025-07-15 08:03 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 上進行。反應結(jié)束后取５ μｌ反應液在１％的瓊脂糖凝膠上進行電泳檢測。用于１６ｓ ｒｄｎａ的ｐｃｒ擴增反應的引物序列為：３３８ｆ（ｃｃｔａｃｇｇｇａｇｇｃａｇｃａｇ）和５１８ｒ（ａｔｔａｃｃｇｃｇｇｃｔｇｃｔｇｇ）。１．５ 變性梯度凝膠電泳和染色ｐｃｒ產(chǎn)物加入到８％（ｍ／ｖ）聚丙烯酰胺凝膠中，凝膠的變性范圍為４０％～６０％。利用ｄｇｇｅ－１ｂ型電泳系統(tǒng)，在６０ ℃、１５０ ｖ、１ｔａｅ ｂｕｆｆｅｒ下電泳３３０ ｍｉｎ。電泳結(jié)束后，用固定液（１０％冰醋酸）固定凝膠２０ ｍｉｎ，用去離子洗滌凝膠3次，每次２ ｍｉｎ，取出凝膠板豎起控水１５ ｓ，將洗后的凝膠浸泡在染色液（含０．１５％硝酸銀和１５０ μｌ甲醛的混合液）中２０ ｍｉｎ，然后取出凝膠，在去離子水中浸洗１０ ｓ，立即浸泡在顯影液（含２．５％無水碳酸鈉和２５ μｌ甲醛的混合液）中，緩慢地搖晃至條帶完全顯現(xiàn)。將凝膠置于中止液（０．５ ｍｏｌ／ｌ ｅｄｔａ－ｎａ２）中浸泡１０ ｍｉｎ，再用去離子水浸洗凝膠３次，取出凝膠豎起控水［９］。１．６ 指紋圖譜生物信息學分析采用ｗａｒｄ法計算各樣品間的相似指數(shù)，ｄｇｇｅ指紋圖譜分析借助于ｂｉｏ－ｒａｄ公司的凝膠成像系統(tǒng)進行條帶判讀，以配套軟件ｑｕａｎｔｉｔｙ ｏｎｅ進行遷移率、強度、面積計算，并計算樣品間的相似指數(shù)、繪制泳道間遺傳圖。２ 結(jié)果與分析２．１ 對二氯苯處理４ ｄ后濕地土壤細菌群落總ｄｎａ的ｄｇｇｅ分析圖１為不同濃度對二氯苯處理土壤４ ｄ后土壤細菌群落ｄｇｇｅ分析結(jié)果。由圖1可知，試驗初期，不同濃度對二氯苯脅迫下濕地土壤細菌群落的基因條帶出現(xiàn)較明顯的差別。與對照相比，低濃度對二氯苯脅迫下條帶變化不大，但其中條帶ａ、ｂ亮度變暗消失，條帶ｃ、ｄ亮度增加。表明濕地土壤中大多數(shù)細菌群落對低濃度對二氯苯有一定的耐受性，基本不受影響，甚至對某類微生物具有一定的刺激作用，產(chǎn)生新條帶，如條帶ｅ。而３６０ ｍｇ／ｋｇ時，某些微生物對較高對二氯苯脅迫較為敏感，數(shù)量大大降低，達到ｄｇｇｅ分辨率下限。電泳圖譜泳道間的遺傳簇關(guān)系（圖２）同樣印證了上述結(jié)果，在圖２中，對二氯苯濃度為１２０ ｍｇ／ｋｇ時與對照最為接近，第３、第４和第５泳道則與對照的相似性為５７．８％～７５．０％，較處理初期時明顯降低。隨著土壤中對二氯苯濃度的增加，土壤中細菌群落基因多樣性受到的影響也逐漸增強，到土壤對二氯苯濃度為２４０ ｍｇ／ｋｇ時，整個泳道條帶出現(xiàn)明顯差別。值得注意的是，在土壤處理４ ｄ時，２４０ ｍｇ／ｋｇ對二氯苯濃度下，出現(xiàn)一條新增條帶，而對照及其他濃度下土壤都沒有，說明土壤中可能有在對二氯苯較高濃度下良好生長的微生物種。２．２ 對二氯苯處理１８ ｄ土壤細菌群落總ｄｎａ的ｄｇｇｅ分析圖３為不同濃度對二氯苯處理１８ ｄ土壤中細菌群落ｄｇｇｅ分析結(jié)果。由圖3可知，在處理１８ ｄ時，與對照相比，１２０ ｍｇ／ｋｇ對二氯苯脅迫與對照土壤的細菌群落有７７．４％的相似性，再次說明濕地土壤中大多數(shù)細菌對對二氯苯有耐受性，另一些細菌則受到了抑制，表現(xiàn)出條帶亮度變暗，如圖３中的條帶ａ、ｂ。第３和第４泳道上出現(xiàn)的條帶ｃ則表明在２４０ ｍ
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