【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 存?zhèn)溆?。用接種環(huán)將初篩得到的菌株分別從試管斜面上挑取一環(huán)接入20mL液體種子培養(yǎng)基中，30℃搖瓶培養(yǎng)24h，再以10%的接種量分別接入50mL液體發(fā)酵培養(yǎng)基中，30℃、150r/min搖瓶培養(yǎng)15d。發(fā)酵液提取后，對(duì)lovastatin進(jìn)行定性定量檢測(cè)，以原始菌株為對(duì)照，選出洛伐他汀產(chǎn)量較高的突變株進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。Lovastatin易溶于 75％ 乙醇，可用其作為從紅曲中提取Lovastatin的溶劑。采用超聲提取的方法以提高 Lovastatin的提取效率。超聲提取后離心分離除去不溶雜質(zhì)。Lovastatin和色素等可溶性雜質(zhì)混于上清液中，色素等可溶性雜質(zhì)會(huì)干擾 Lovastatin比色測(cè)定，需要用吸附柱層析吸附色素和雜質(zhì)。一定條件下 lovastatin不被吸附而隨著洗脫 液流出。 由于 Lovastatin在 246nm、254nm兩波長(zhǎng)下其吸光度之差（A246—A254）與其濃度的關(guān)系符合比爾定律。而紅曲色素在此波長(zhǎng)下△A極小，因此采用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法能夠排除色素干擾，完成對(duì)樣品中Lovastatin含量的定量測(cè)定。 在提取得到的Lovastatin中加入75％ 乙醇，使其充分溶解。將所得溶液再用75%乙醇稀釋一定倍數(shù)，然后將其置于紫外分光光度計(jì)下測(cè)定吸光度，計(jì)算246nm、254nm處的吸光度之差。，隨著紫外照射時(shí)間的延長(zhǎng)，菌株A. terreus Z159的致死率不斷增大，照射時(shí)間在100s180s范圍內(nèi)，A. terreus Z159的致死率都大于80%。所以紫外線對(duì)土曲霉孢子的有效致死時(shí)間是100s。 紫外照射對(duì)孢子生活力的影響 ，從圖中可以看出3誘變株的洛伐他汀的產(chǎn)量高于A. terreus Z159，分別是A. terreus UV150A. terreus UV150A. terreus UV1504其中，A. terreus UV1503菌株的洛伐他汀產(chǎn)量最高， ug/mL是A. terreus Z159菌株(935 ug/mL)，是原始出發(fā)菌株()，因此，將A. terreus Z159為最終菌株進(jìn)行進(jìn)一步研究。 紫外誘變后19株菌株的洛伐他汀產(chǎn)量. terreus UV1503的遺傳穩(wěn)定性試驗(yàn)為了考察誘變菌株的遺傳穩(wěn)定性，對(duì)菌株A. terreus UV1503連續(xù)傳代培養(yǎng)5代，每代進(jìn)行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng)，以產(chǎn)量良好的第一株菌株為對(duì)照，測(cè)定Lovastatin的產(chǎn)量及生物量。，A. terreus UV1503產(chǎn)Lovastatin的性能均比較穩(wěn)定，生物量也比較穩(wěn)定。這表明菌株A. terreus UV1503有望作為工業(yè)生產(chǎn)的菌株來發(fā)酵生產(chǎn)Lovastatin。表1：A. terreus UV1503產(chǎn)Lovastatin穩(wěn)定性試驗(yàn)Table 1 The stable experiment of Lovastatin productionA. terreusUV1503Subculture12345 Lovaststin production(ug/mL)177。177。177。177。177。Biomass(gdw)177。177。177。177。177。 將誘變株A. terreus Z159和菌株A. terreus UV1503接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，每隔12h測(cè)定其生物量，誘變前后菌株的生長(zhǎng)趨勢(shì)沒有什么變化，84h后均進(jìn)入穩(wěn)定期，菌株A. terreus UV1503的在前60h生長(zhǎng)較快，后略低于菌株A. terreus Z159。. A. terreus Z159和A. terreus UV1503的生長(zhǎng)曲線將誘變株A. terreus Z159和A. terreus UV1503接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，每隔3d用雙波長(zhǎng)紫外分光光度法測(cè)定其Lovastatin產(chǎn)量。，發(fā)酵結(jié)束后，菌株A. terreus UV1503的Lovastatin產(chǎn)量明顯高于菌株A. terreus Z159。文獻(xiàn)報(bào)道中，土曲霉發(fā)酵產(chǎn)Lovastatin的最佳發(fā)酵時(shí)間在10天左右，而本實(shí)驗(yàn)中發(fā)酵15天后，Lovastatin產(chǎn)量還有增加的趨勢(shì)，這有待進(jìn)一步研究。 A. terreus Z157和A. terreus UV1503的產(chǎn)物曲線4. 結(jié)論已經(jīng)研究的產(chǎn)Lovastatin絲狀真菌有Monascus、Aspergillus 和Penicillium 等，其中以Monascus ruber、Monascus pilosus(Miyake)、Aspergillus terreus、Aspergillus flavipes(Valera)等廣泛用于研究和生產(chǎn)。由于這些菌株的代謝途徑多樣性，發(fā)現(xiàn)同一個(gè)種的不同菌株產(chǎn)Lovastatin的能力差別很大，多數(shù)菌株往往不能合成Lovastatin。而產(chǎn)Lovastatin的野生菌株一般產(chǎn)量都很低，因此運(yùn)用誘變育種的方法來獲得優(yōu)良菌株的研究越來越受到重視，并取得了一定的研究結(jié)果。近年來，基因工程技術(shù)的應(yīng)用，大大提高了微生物菌種的選育的效率，如利用基因工程技術(shù)將Lovastatin生物合成中調(diào)節(jié)其合成過程的編碼基因LovE復(fù)制到一株野生型菌株中，使Lovastatin產(chǎn)量提高了57倍。但傳統(tǒng)的物理化學(xué)誘變方法，因其具有簡(jiǎn)單、快速、有效等優(yōu)點(diǎn)，至今仍被廣泛使用。 本研究首次采用紫外線誘變的方法誘變了土曲霉菌株，以A. terreus Z159作為出發(fā)菌株，將其置于15 W 紫外燈下，垂直距離15cm處，以不同的照射時(shí)間進(jìn)行誘變，得出紫外線對(duì)土曲霉孢子的有效致死時(shí)間是100s，誘變前后菌落形態(tài)落形態(tài)與原始出發(fā)菌株相比基本沒明顯區(qū)別，菌落顏色也無明顯差別。通過初篩復(fù)篩選出了一株高產(chǎn)Lovastatin菌株A. terreus UV1503， ug/mL，較原始出發(fā)菌株A. terreus 。而后，對(duì)菌株A. terreus UV1503連續(xù)傳代培養(yǎng)5代，以考察菌株遺傳穩(wěn)定性，結(jié)果顯示，A. terreus UV1503產(chǎn)Lovastatin的性能均比較穩(wěn)定，生物量也比較穩(wěn)定穩(wěn)定性試驗(yàn)表明該菌株的遺傳穩(wěn)定性良好。參考文獻(xiàn)：[1]余志立, K的質(zhì)譜研究[J].質(zhì)譜學(xué)報(bào),2000,21(1):6871.[2][J]．阜陽師范學(xué)院學(xué)報(bào),2007,24(2)：2629.[3]李傳茂,黃國林,劉峙嶸,康文,俞自由．降血脂藥物新伐他汀的合成新工藝．2005,28(2):163165.[4]田潔,喬明武,左秀鳳,史燕強(qiáng)．紅曲發(fā)酵谷物麩糠提取 Lovastatin 的研究．現(xiàn)代食品科技,2006,89(3):111113.[5]毛寧,洪智勇. 紅曲霉固態(tài)發(fā)酵產(chǎn)生降脂物質(zhì)的研究. 福建師范大學(xué)學(xué)報(bào),2003,19(3):5860.[6]姚菁華,王玨, 2008,36(24):1052410526.[7] 產(chǎn)生菌生物合成能力的研究[J].生物學(xué)雜志,2004,2(5):3839.[8]劉愛英, K含量的研究[J] .貴州農(nóng)業(yè)科學(xué),2007,35(6):57.[9]趙興秀,[J] .中國釀造,2010, (3):6669.[10]李仁民,王菊芳,. 原子核物理評(píng)論,2007,24(3):234235.[11]賈志華,張小里,. 化學(xué)工程,2008,36(5):5155.[12]蔡晶晶, [J].微生物學(xué)雜志,2000 ,20 (4) :14.[13]田歌,林永彬,2005,22(4):310312.[14]Kimura K,Komagata D,Murakawa of monacolins [J]. 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In recent years,