【正文】 atin and siwvastatin in spiked human plasma[J ]. Zagazig J Pharm Sci,1993,2 (1) : 1 10.[30]MabroukMokhtarM, determination of the two antilipemic drugs lovastatin and siwvvastatin in spiked human plasma and in dosage forms[J ].Bull Fac Pharm,1998,36 (1) :59 65.[31]文鏡,劉迪,2003,17(3)：7074.[32]韓梅,[J].微生物學(xué)通報,1994,21(5):279.[33]高嘉安, K的檢測[J] .吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,1998,5：277.[34]俞進,[J].觀察首都醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,1998,19(1):19.[35]王立新,[J].中國抗生素雜志,1999,24(2)：96.[36]劉永華,徐文生,82(4):43.[37]李春雨,蔡吉光，李繼紅,李秀敏. 含莫納可林K紅曲降低雞蛋膽固醇效果的研究. 中國獸藥雜志,2006,40(8):2830.[38]于海,方慧英,諸葛健,秦肪,陶冠軍. ,2003,12(9):2324.[39]王普善. 新藥研究開發(fā)推動著現(xiàn)代制藥企業(yè)的發(fā)展. 中國新藥雜志,1994,3(3):23.[40]童振宇,周立平, purpureus WX液態(tài)發(fā)酵產(chǎn) Monacolin K 工藝條件. 浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報,2007,30(1):4345.[41],1995,(5):12.[42]劉皋林. ,2002,23(10):911.[43]沈士秀. 紅曲的研究、生產(chǎn)及應(yīng)用. 食品工業(yè)科技,2001,22(1):6567.[44]李慧,王異靜,程曉. 紅曲Monacolin K與培養(yǎng)基關(guān)系的研究. 食品與發(fā)酵工業(yè),2006,23(4):1224.[45]孫偉,劉愛英, ,2004,23(1):168170.[46]楊允,張佐倫,胡堅莉,孫建民,王大川,王松剛,、BMP和礦化的實驗研究. 中國組織化學(xué)與細胞化學(xué)雜志,2004,13(1):7577.[47]林曉波，李浩明. 洛伐他汀產(chǎn)生菌的原生質(zhì)體制備、滅活及融合條件研究. 廣東藥學(xué)院學(xué)報,2007,23(1):4345.[48]李慧,2005,12(1):160162.[49]趙樹欣,陳云, Monacolin K的產(chǎn)生. 食品與發(fā)酵工業(yè)2007,29(5):1114.[50]李浩然,馮雅麗,伍軍. 降脂紅曲研究進展. 北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報,2001,16(3):8082.[51]夏書華,劉穎. 有關(guān)紅曲色素的提取及提高其色價的研究. ,14(1):4445.[52]熊曉輝,張李陽,韋策, , 2001,22(1):6567.附：英文文獻翻譯Biotechnological production and applications of statinsAbstract Statins are a group of extremely successful drugs that lower cholesterol levels in blood。通過初篩復(fù)篩選出了一株高產(chǎn)Lovastatin菌株A. terreus UV1503， ug/mL，較原始出發(fā)菌株A. terreus 。但傳統(tǒng)的物理化學(xué)誘變方法，因其具有簡單、快速、有效等優(yōu)點，至今仍被廣泛使用。而產(chǎn)Lovastatin的野生菌株一般產(chǎn)量都很低，因此運用誘變育種的方法來獲得優(yōu)良菌株的研究越來越受到重視，并取得了一定的研究結(jié)果。 A. terreus Z157和A. terreus UV1503的產(chǎn)物曲線4. 結(jié)論已經(jīng)研究的產(chǎn)Lovastatin絲狀真菌有Monascus、Aspergillus 和Penicillium 等，其中以Monascus ruber、Monascus pilosus(Miyake)、Aspergillus terreus、Aspergillus flavipes(Valera)等廣泛用于研究和生產(chǎn)。發(fā)酵結(jié)束后，菌株A. terreus UV1503的Lovastatin產(chǎn)量明顯高于菌株A. terreus Z159。 將誘變株A. terreus Z159和菌株A. terreus UV1503接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，每隔12h測定其生物量，誘變前后菌株的生長趨勢沒有什么變化，84h后均進入穩(wěn)定期，菌株A. terreus UV1503的在前60h生長較快，后略低于菌株A. terreus Z159。177。177。177。177。表1：A. terreus UV1503產(chǎn)Lovastatin穩(wěn)定性試驗Table 1 The stable experiment of Lovastatin productionA. terreusUV1503Subculture12345 Lovaststin production(ug/mL)177。A. terreus UV1503產(chǎn)Lovastatin的性能均比較穩(wěn)定，生物量也比較穩(wěn)定。 紫外照射對孢子生活力的影響 ，從圖中可以看出3誘變株的洛伐他汀的產(chǎn)量高于A. terreus Z159，分別是A. terreus UV150A. terreus UV150A. terreus UV1504其中，A. terreus UV1503菌株的洛伐他汀產(chǎn)量最高， ug/mL是A. terreus Z159菌株(935 ug/mL)，是原始出發(fā)菌株()，因此，將A. terreus Z159為最終菌株進行進一步研究。，隨著紫外照射時間的延長，菌株A. terreus Z159的致死率不斷增大，照射時間在100s180s范圍內(nèi)，A. terreus Z159的致死率都大于80%。 在提取得到的Lovastatin中加入75％ 乙醇，使其充分溶解。 由于 Lovastatin在 246nm、254nm兩波長下其吸光度之差（A246—A254）與其濃度的關(guān)系符合比爾定律。Lovastatin和色素等可溶性雜質(zhì)混于上清液中，色素等可溶性雜質(zhì)會干擾 Lovastatin比色測定，需要用吸附柱層析吸附色素和雜質(zhì)。采用超聲提取的方法以提高 Lovastatin的提取效率。發(fā)酵液提取后，對lovastatin進行定性定量檢測，以原始菌株為對照，選出洛伐他汀產(chǎn)量較高的突變株進行后續(xù)實驗。將經(jīng)過輻照處理的孢子懸液稀釋至10104，吸取100μl涂布在固體平板培養(yǎng)基上，每個稀釋度涂布3個平皿，在30℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)34d，挑取生長較快的單菌落接入試管斜面培養(yǎng)基保存?zhèn)溆谩Ｔ跓o菌超凈工作臺中吸取孢子懸浮液5ml于帶磁力攪拌子的平皿中，打開皿蓋，至于磁力攪拌器上，15 W 紫外燈垂直距離15cm處，磁力攪拌作用下，照射時間分別為60、90、1150、180s。 土曲霉(Aspergillus terreus Z159)，購自中國農(nóng)業(yè)大學(xué)微生物生理研究室。目前，各國正在對該類藥物的臨床掀起一股研究開發(fā)熱潮，其主要研究領(lǐng)域有：骨質(zhì)疏松癥治療、老年癡呆癥治療、心絞病治療、器官移植、中風(fēng)治療、糖尿病治療。這都為我們提供了寶貴的經(jīng)驗，值得我們學(xué)習(xí)和借鑒。并發(fā)現(xiàn)了紅曲的降壓作用和紅曲中所含Monacolin K等生理活性物質(zhì)，能降低膽督醇和血糖，以及含有紅曲的食品都具有促進恢復(fù)疲勞和增強體力的作用。由于普伐他汀與洛伐他汀結(jié)構(gòu)上僅相差一個羥基，提取工藝上有值得相互借鑒之處。華北制藥集團公司新藥研究開發(fā)中心于 1996年立項開發(fā)他汀類藥物，當年走通工藝，拿到生產(chǎn)文號，及時投放市場，滿足了廣大人民群眾的用藥需求。我國出口洛伐他汀無論在質(zhì)量或報價上均比其他國家稍占優(yōu)勢。我國的其他洛伐他汀生產(chǎn)公司也積極進軍國際市場，大多以原料藥形式出口。使血脂康一“出世”，就具有有效成分明確、療效顯著、主要作用機理明確、產(chǎn)品有嚴格質(zhì)控標準、質(zhì)量穩(wěn)定、制劑工藝先進等鮮明特色。值得一提的是，北大維信生物科技有限公司采用高科技生物技術(shù)從特制紅曲中提煉精制而成的血脂調(diào)節(jié)劑血脂康。國內(nèi)的報道以制劑研究居多，黑龍江肇東華富藥業(yè)有限責任公司以洛伐他汀為主藥，選用新型輔料，進行洛伐他汀膠囊的生產(chǎn)。無錫輕工大學(xué)生物工程學(xué)院曾報道其洛伐他汀發(fā)酵產(chǎn)量 ≥10 g/ L177。1996 年我國由四川抗生素研究所開發(fā)的洛伐他汀搶仿成功并逐漸實現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化，首次獲準生產(chǎn)洛伐他汀原料藥、片劑；1997年首次獲準生產(chǎn)洛伐他汀膠囊。1998年，俞進等[34]選用產(chǎn)紅色素量大的紫紅曲菌產(chǎn)生洛伐他汀 。高嘉安等[33]從收集到的42株紅曲菌中發(fā)現(xiàn)有16株含有l(wèi)ovastatin，分屬M．purpureus、M．ruber、M．rubigerus、M．pilosus和M．vitreus。龔炳勇等從真菌 SIPI 8915 中分離得到 ML 236B。隨著分析儀器的推陳出新，今后洛伐他汀的檢測方法必將繼續(xù)朝著快速、靈敏、簡便、可靠的方向發(fā)展，并且一定會涌現(xiàn)出更加完善的檢測方法[31]。發(fā)展至今日，高效液相色譜法的色譜條件已較為穩(wěn)定，色譜柱根據(jù)需要不同一般采用 C8 與 C18 兩種(C18 柱最常見) ，流速從 ～2 mL/min 不等，紫外檢測器檢測波長為238 nm，流動相一般為乙腈水或甲醇水系統(tǒng)。紫外分光光度法對樣品測定有簡便、準確、快捷、經(jīng)濟的優(yōu)點，但紅曲或其他發(fā)酵品中成分復(fù)雜，用紫外分光光度法必需要對樣品進行預(yù)處理，否則只能測出Monacolin 類化合物的總量。熒光光度法的檢測靈敏度很高，精密度也比較好，但是萃取液多為復(fù)雜的有機混合液，不容易測定其酸式結(jié)構(gòu)。 現(xiàn)在比較常用的方法有：HPLC 法(包括聯(lián)接各種檢測器，如紫外檢測器及電化學(xué)檢測器等)、紫外分光光度法，熒光光度法、氣相色譜法及薄層層析法等。1998年，MaboukMokhtarM 等人用該法對人血中的洛伐他汀進行了測定?！厥章蕿? %。結(jié)果表明該方法的最低檢測下限為 2 pg[28] 。1989 年，WangIversonDavid 等就用氣相色譜聯(lián)用質(zhì)譜對人血清中酸式洛伐他汀進行了測定。若洛伐他汀在血(尿)中的析出率在 %～ %之間時，該方法在 015 ～10μg/L內(nèi)線性關(guān)系良好，r 01999，最低檢測下限為015μg/L，該方法的相對標準偏差(Sr) 和相對誤差分別小于 %和 %[27] 。1998 年韓國的 ChoiHyeJin 等用 HPLC 法測定了人血中和尿中的洛伐他汀。他們認為樣品液中存在3種洛伐他汀形式，即內(nèi)酯型，酸式及甲酯產(chǎn)物，其中酸式結(jié)構(gòu)在 HPLC 中的保留時間最短，所以他們將提取液用011 mol/L NaOH在50 ℃下轉(zhuǎn)化1 h，用1 mol/L HCl調(diào)pH ，再分別用濾紙和過濾器過濾，這樣得到的除雜樣品液中的洛伐他汀為酸式結(jié)構(gòu)。他們用 pH ，并在30 ℃，200 r/min 震振器中震振1 h。國外對洛伐他汀的研究比我國要早，對洛伐他汀的測定方法也比較豐富，除了最經(jīng)典的 HPLC 法和紫外法還有紫外熒光光度法、氣相色譜法等。 ( n = 8，變異系數(shù)為 %)，在 ～10 mg/L 范圍內(nèi)洛伐他汀(酸式) 與吸光度有良好的線性關(guān)系， mg/L 。在前處理中，由于中性氧化鋁對酸式洛伐他汀有很強的吸附作用，故采用硅膠吸附層析，用不同 pH 值的 NaOH 進行洗脫，取得了良好的結(jié)果。2001 年文鏡等建立了對酸式洛伐他汀測定的雙波長紫外法。他們將樣品溶于60 %乙醇1 %亞硫酸氫鈉溶液(100∶1) 的混合溶劑中(加入亞硫酸氫鈉，增強洛伐他汀在溶劑中的穩(wěn)定性)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，輔料對測定無影響。雖然檢測精度和檢測下限沒有 HPLC 法好，但是它操作簡單、快速，成本也比較低。1997 年宋洪濤、郭濤等用該法對血脂平膠囊中洛伐他汀進行了測定，結(jié)果在檢測范圍內(nèi)線性關(guān)系良好， r = 019997， %，s r 為 %( n = 5) [23]。薄層掃描法是較早的一種測定方法，主要是采用雙波長薄層進行掃描測定樣品中的洛伐他汀含量。在 實驗中他們發(fā)現(xiàn)過低 pH值會影響色譜柱壽命，故將pH 。該方法的線性范圍為 5～500 g/L，最低檢測濃度為 5μg/L，10，100，500μg/L 3 種濃度的平均回收率為( 177。色譜柱采用 NovaPakC18柱(4μm，319 mm150 mm)，柱溫控制在50 ℃，流動相為乙腈—磷酸銨緩沖液 ( mol/mL ，pH = ，φ為45:55) ，檢測波長為238 nm。由于該流動相在紫外區(qū)無吸收，所以極易用歸一法測定各雜質(zhì)含量[21] 。在對樣品中雜質(zhì)測定的實驗中，發(fā)現(xiàn)除洛伐他汀峰和溶劑峰外，還有4個雜峰，經(jīng)加熱或光照后其中有兩個雜質(zhì)峰明顯增加，說明溶液中有降解物且對熱和光較敏感，所以在處理樣品時要避免長時間加熱及盡量避光在實驗中選用了甲醇—水系統(tǒng)，在內(nèi)標定量時甲醇—水系統(tǒng)設(shè)為80∶15，特點為快速準確，且不易受雜質(zhì)干擾。該方法線性關(guān)系良好r = 019998。1996 年，張哲峰等用RPHPLCUV分離測定了洛伐他汀及其雜質(zhì)。 %（n=3），精密度Sr (相對標準偏差) = % ( n = 5)，重現(xiàn)性Sr= 1163 % ( n = 5)，樣品回收率在 98/04 %～ %之間( n = 6) 。洗脫劑用甲醇，用量(總用量) 20～25mL。對于提取時間，用75 %乙醇為溶劑，分別以不同時間進行超聲處理，發(fā)現(xiàn)處理20 mi