質(zhì)粒dna的酶切鑒定(編輯修改稿)
2025-06-22 18:28 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 ? 用一個(gè)字母代表菌株或型 ， 如流感嗜血菌Rd菌株用 d， 即 Hind。 ? 如果一種特殊的寄主菌株 ， 具有幾個(gè)不同的限制與修飾體 ， 則以羅馬數(shù)字表示 ， 如HindⅠ , HindⅡ ， HindⅢ 等 。 5) 影響核酸限制性內(nèi)切酶活性的因素 (1) DNA的純度； (2) DNA的甲基化程度； (3) 酶切消化反應(yīng)的溫度； (4) DNA的分子結(jié)構(gòu)； (5) 溶液中離子濃度及種類； (6) 緩沖液的 pH值 。 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖凝膠電泳是利用瓊脂糖溶化再凝固后能形成帶有一定孔隙的固體基質(zhì)的特性，其密度取決于瓊脂糖的濃度。在電場(chǎng)的作用下及中性 pH的緩沖條件下帶負(fù)電的核酸分子就可以向陽(yáng)極遷移。 影響 DNA在瓊脂糖中遷移率的因素： DNA分子的大小、 DNA的構(gòu)象、電壓、電場(chǎng)方向、堿基組成、嵌入的燃料以及電泳緩沖液的組成。 瓊脂糖凝的濃度影響給定大小的線狀 DNA的遷移率 ， 因此采用不同濃度的凝膠可以分離不同大小范圍的 DNA片段 。 %的瓊脂糖凝膠能很好地分辨 125kb的片段； % 的瓊脂糖凝膠用于分辨較大片段的 DNA (20100kb） ；對(duì)于小片段的 DNA() 可用%或更高濃度的凝膠進(jìn)行分離 。 不過(guò) ， 以上這些并不是絕對(duì)的 ， 因?yàn)橛袝r(shí)我們需要同時(shí)分離多種分子量相差較大的片段 ， 因此所用瓊脂糖凝膠的濃度要視情況而定 。 EB：即 3,8二氨基 5乙基 6苯基菲錠溴鹽, (Ethidium Bromide)。 它能夠插入 DNA分子中的堿基對(duì)之間而與 DNA結(jié)合。由于 EB分子 的插入，在紫外光的照射下，凝膠電泳中的 DNA條帶呈現(xiàn)出 紅色熒光，易于檢測(cè)?？梢詸z測(cè) 10ng 的 DNA。 注意： EB是一種誘變劑，操作時(shí)一定要注意安全操作，必須戴塑料或乳膠手套 !!! 3. 實(shí)驗(yàn)材料與儀器 ? 質(zhì)粒 pCMVMycT10 ? NEB 標(biāo)準(zhǔn)分子量片段 (1kb DNA Ladder) ? EcoRI 和 XhoI 核酸內(nèi)切酶（ Takara） ? EcoRI和 XhoI酶解緩沖液 (10 H buffer) ? 瓊脂糖 ? TBE或 TAE緩沖液 (10 ) ? 溴化乙啶染色液 (10mg/ml) ? 上樣液 (6 )： % 溴酚蘭， 40％ (W/V)蔗糖 水溶液或 30％的甘油。 Insert EcoRI XhoI 質(zhì)粒 1 kb DNA Ladder不能對(duì) DNA質(zhì)量進(jìn)行精確定量分析，但可以通過(guò)與相近的條
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1