【文章內(nèi)容簡介】 信息 項(xiàng)目編號、分析方法編號、分析方法類型、分析方法確證進(jìn)行簡化的理由、以及相應(yīng)的項(xiàng)目計(jì)劃編號、標(biāo)題等。 （二）實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與操作 1. 交叉設(shè)計(jì) 交叉設(shè)計(jì)是目前應(yīng)用最多最廣的方法，因?yàn)槎鄶?shù)藥物吸收和清除在個體之間均存在很大變異，個體間的變異系數(shù)遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于個體內(nèi)變異系數(shù)，因此生物等效性研究一般要求按自身 交叉對照的方法設(shè)計(jì)。把受試對象隨機(jī)分為幾組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。兩順序間應(yīng)有足夠長的間隔時間，為清洗期（ Washout Period）。這樣，對每位受試者都連續(xù)接受兩次或更多次的處理，相當(dāng)于自身對照，可以將制劑因素對藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開來，減少了不同試驗(yàn)周期和個體間差異對試驗(yàn)結(jié)果的影響。 根據(jù)試驗(yàn)制劑數(shù)量不同一般采用 22交叉、 33交叉等設(shè)計(jì)。如果是兩種制劑比較，雙處理、雙周期，兩序列的交叉設(shè)計(jì)是較好的選擇。如試 驗(yàn)包括 3個制劑（受試制劑 2個和參比制劑 1個）時，宜采用 3制劑 3周期二重 33拉丁方試驗(yàn)設(shè)計(jì)。各周期間也應(yīng)有足夠的清洗期。 設(shè)定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。清洗期一般不應(yīng)短于 7個消除半衰期。 但有些藥物或其活性代謝物半衰期很長時則難以按此方法設(shè)計(jì)實(shí)施，在此情況下可能需要考慮按平行組設(shè)計(jì)進(jìn)行，但樣本量可能要增加。 而對于某些高變異性藥物（ Highly Variable Drug），根據(jù)具體情況，除 采用增加例數(shù)的辦法外， 可采用重復(fù)交叉設(shè) 計(jì) ,對同一受試者兩次接受同 一制劑時可能存在的個體內(nèi)差異進(jìn)行測定。 2. 受試者的選擇 受試者入選條件： 受試者的選擇應(yīng)當(dāng)盡量使個體間差異減到最小，以便能檢測出制劑間的差 異。試驗(yàn)方案中應(yīng)明確入選和剔除條件。 一般情況應(yīng)選擇男性健康受試者。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)受試者。選擇健康女性受試者應(yīng)避免懷孕的可能性。如待測藥物存在已知的不良反應(yīng)，可能帶來安全性擔(dān)憂，也可考慮選擇患者作為受試者。 年齡 :一般 18～ 40 周歲，同一批受試者年齡不宜相差 10 歲以上。 體重：正常受試者的體重一般不應(yīng)低于 50kg。按體質(zhì)指數(shù) (Body Mass Index , BMI)＝體重（ kg）／身高 2（ m2）計(jì)算，一般應(yīng)在標(biāo)準(zhǔn)體重范圍內(nèi)。同一批受試者體重（ kg）不宜懸殊過大，因?yàn)槭茉囌叻玫乃幬飫┝渴窍嗤摹? 受試者應(yīng)經(jīng)過全面體檢，身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常，避免藥物體內(nèi)過程受到疾病干擾。根據(jù)藥物類別和安全性情況，還應(yīng)在試驗(yàn)前、試驗(yàn)期間、試驗(yàn)后進(jìn)行特殊項(xiàng)目檢查，如降糖藥應(yīng)檢查血糖水平。 為避免其他藥物干擾，試驗(yàn)前兩周內(nèi)及試驗(yàn)期間禁服任何其 他藥物。實(shí)驗(yàn)期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，或某些可能影響代謝的果汁等，以免干擾藥物體內(nèi)代謝。受試者應(yīng)無煙、酒嗜好。如有吸煙史，在討論結(jié)果時應(yīng)考慮可能的影響。 如已知藥物存在遺傳多態(tài)性導(dǎo)致代謝差異，應(yīng)考慮受試者由于慢代謝可能出現(xiàn)的安全性等問題。 受試者例數(shù) 受試者例數(shù)應(yīng)當(dāng)符合統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，對于目前的統(tǒng)計(jì)方法 ,1824 例可滿足大多數(shù)藥物對樣本量的要求，但對某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加例數(shù)。 一個臨床試驗(yàn)的例數(shù)多少是由三個基本因素決定的：（ 1）顯著性水平：即 α值的大小，通常取 5%；（ 2）把握度：即 1β值的大小，一般定為不小于 80%，其中 β是犯第 Ⅱ 類錯誤的概率，也就是把實(shí)際有效誤判為無效的概率；（ 3）變異性（ CV%）和差別（ θ）：兩藥等效性檢驗(yàn)中檢測指標(biāo)的變異性和差別越大所需例數(shù)越多。在試驗(yàn)前并不知道 θ和 CV%，只能根據(jù)已有的參比制劑的上述參數(shù)來估算或進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。另外，當(dāng)一個生物利用度試驗(yàn)完成后，可以根據(jù) θ、 CV%和把握度等參數(shù)來求 N值，并與試驗(yàn)所選擇例數(shù)進(jìn)行對比，檢驗(yàn)試驗(yàn)所采用例數(shù)是否合適。 受試者分組 必須采用隨機(jī)方法分組，各組間應(yīng)具有可比性。 3. 受試制劑和參比制劑 (Test Product and Reference Product ,T and R ) 參比制劑的質(zhì)量直接影響生物等效性試驗(yàn)結(jié)果的可靠性，一般應(yīng)選擇國內(nèi)已經(jīng)批準(zhǔn)上市相同劑型藥物中的原創(chuàng)藥。在無法獲得原創(chuàng)藥時，可考慮選用上市主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑，但須提供相關(guān)質(zhì)量證明（如含量、溶出度等檢查結(jié)果）及選擇理由。若為完成特定研究目的，可選用相同藥物的其它藥劑學(xué)性質(zhì)相近的上市劑型作為參比制劑，這類參比制劑亦應(yīng)該是已上市的且質(zhì)量合格的產(chǎn)品。 參比制劑和受試制劑含量差別不能超過 5%。 對于受試制劑，應(yīng)為符合臨床應(yīng)用質(zhì)量 標(biāo)準(zhǔn)的中試 /生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)品。應(yīng)提供該制劑的體外溶出度、穩(wěn)定性、含量或效價測定、批間一致性報(bào)告等，供試驗(yàn)單位參考。個別藥物尚需提供多晶型及光學(xué)異構(gòu)體的資料。 參比制劑和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號、規(guī)格、保存條件、有效期。 試驗(yàn)結(jié)束后受試制劑和參比制劑應(yīng)保留足夠長時間直到產(chǎn)品批準(zhǔn)上市以備查。 4. 給藥劑量 進(jìn)行藥物制劑生物利用度和生物等效性研究時，給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安全劑量。受試制劑和參比制劑一般應(yīng)服用相等劑量，需要使用不相等劑量時，應(yīng)說明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動力學(xué)特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計(jì)算生物利用度。 一般情況下普通制劑僅進(jìn)行單劑量給藥研究即可 ,但在某些情況下可能需要考慮進(jìn)行多次給藥研究，如：（ 1）受試藥單次服用后原形藥或活性代謝物濃度很低，難以用相應(yīng)分析方法精密測定血藥濃度時；（ 2）受試藥的生物利用度有較大個體差異；（ 3）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（ 4）緩控釋制劑。進(jìn)行多次給藥研究應(yīng)按臨床推薦的給藥方案給藥，至少連續(xù) 3次測定谷濃度確定血藥濃度達(dá)穩(wěn)態(tài)后選擇一個給藥間隔取樣進(jìn)行測定，并據(jù)此計(jì)算生物利用度。 5. 取樣 取樣點(diǎn)的設(shè)計(jì)對保證試驗(yàn)結(jié)果可靠性及藥代動力學(xué)參數(shù)計(jì)算的合理性，均有十分重要的意義。通常應(yīng)有預(yù)試驗(yàn)或參考國內(nèi)外的藥代文獻(xiàn)，為合理設(shè)計(jì)采樣點(diǎn)提供依據(jù)。應(yīng)用血藥濃度測定法時，一般應(yīng)兼顧到吸收相、平衡相（峰濃度）和消除相。在藥物濃度 — 時間曲線各時相及預(yù)計(jì)達(dá)峰時間前后應(yīng)有足夠采樣點(diǎn)，使?jié)舛?— 時間曲線能全面反應(yīng)藥物在體內(nèi)處置的全過程。服藥前應(yīng)先取空白血樣。一般在吸收相部分取 23個點(diǎn)，峰濃度附近至少需要 3個點(diǎn)，消除相取 35個點(diǎn)。盡量避免第一個點(diǎn)即為 Cmax，預(yù)試驗(yàn)將有助于避免這個問題。采樣持續(xù)到受試 藥原形或其活性代謝物 3～ 5 個半衰期時，或至血藥濃度為Cmax的 1／ 10～ 1／ 20,AUC0t/AUC0∞通常應(yīng)當(dāng)大于 80%。對于長半衰期藥物，應(yīng)盡可能取樣持續(xù)到足夠比較完整的吸收過程，因?yàn)槟┒讼?xiàng)對該類制劑吸 收過程的評價影響不大。多次給藥研究中，對于一些已知生物利用度受晝夜節(jié)律影響的藥物，則應(yīng)該連續(xù) 24 小時取樣。 當(dāng)受試藥不能用血藥濃度測定方法進(jìn)行生物利用度檢測時，若該藥原形或活性代謝物主要由尿排泄（大于給藥劑量的 70%），可以考慮尿藥法測定，以尿樣中藥物的累積排泄量來反映藥物攝入量。試驗(yàn)藥品和試驗(yàn)方 案應(yīng)當(dāng)符合生物利用度測定要求。尿樣的收集采用分段收集法 ,其采集頻度、間隔時間應(yīng)滿足估算受試藥原形藥或活性代謝物經(jīng)尿的排泄程度。但該方法不能反映藥物吸收速度，誤差因素較多，一般不提倡采用。 某些藥物在體內(nèi)迅速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗(yàn)。 6. 藥代動力學(xué)參數(shù)計(jì)算 一般用非房室數(shù)學(xué)模型分析方法來估算藥代動力學(xué)參數(shù)。用房室模型方法估算藥代參數(shù)時，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。研究者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng) 確證并應(yīng)在研究報(bào)告中注明所用軟件。在生物等效性研究中，其主要測量參數(shù) Cmax 和 Tmax 均以實(shí)測值表示。AUC0→t 以梯形法計(jì)算，故受數(shù)據(jù)處理程序影響不大。 7. 研究過程標(biāo)準(zhǔn)化 整個研究過程應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使得除制劑因素外，其他各種因素導(dǎo)致的體內(nèi)藥物釋放吸收差異減少到最小，包括受試者的飲食、活動都應(yīng)控制。試驗(yàn)工作應(yīng)在 I期臨床試驗(yàn)觀察室進(jìn)行。受試者應(yīng)得到醫(yī)護(hù)人員的監(jiān)護(hù)。受試期間發(fā)生的任何不良反應(yīng)，均應(yīng)及時處理和記錄，必要時停止試驗(yàn)。 （三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)分析 1. 數(shù)據(jù)表達(dá) BA 和 BE 研究必須提供所有受試者 各個時間點(diǎn)受試制劑和參比制劑的藥物濃度測定數(shù)據(jù)、每一時間點(diǎn)的平均濃度（ Mean）及其標(biāo)準(zhǔn)差（ SD）和相對標(biāo)準(zhǔn)差（ RSD），提供每個受試者的濃度 — 時間曲線（ CT曲線）和平均 CT曲線以及 CT曲線各個時間點(diǎn)的標(biāo)準(zhǔn)差。不能隨意剔除任何數(shù)據(jù)。脫落者的數(shù)據(jù)一般不可用其他數(shù)據(jù)替代。 2. 藥代動力學(xué)參數(shù) 單次給藥的 BA和 BE 研究，提供所有受試者服用受試制劑和參比制劑的 AUC0→t ， AUC0→∞ 、 Cmax、 Tmax、 t1/ CL、 Vd、 F等參數(shù)及其平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。 Cmax和 Tmax均以實(shí)測值表示。 AUC0→t 以梯形法計(jì)算； AUC0→∞ 按公式計(jì)算： AUC0→∞ ＝ AUC0→t ＋ Ct/λz（ t 為最后一次可實(shí)測血藥濃度的采樣時間； Ct為末次可測定樣本藥物濃度； λz系對數(shù)濃度 時間曲線末端直線部份求得的末端消除速率常數(shù)，可用對數(shù)濃度 時間曲線末端直線部分的斜率求得； t1/2 用公式t1/2＝ ／ λz計(jì)算。 以各個受試者受試制劑（ T）和參比制劑（ R）的 AUC0→t 按下式分別計(jì)算其相對生物利用度（ F）值： 當(dāng)受試制劑和參比制劑劑量相同時： F＝ AUCT／ AUCR100％ 受試制劑和參比制劑劑量不同時，若受試藥 物具備線性藥代動力學(xué)特征，可按下式以劑量予以校正： F＝【 AUCTD R／ AUCRD T】 100％（ AUCT、 AUCR分別為 T和 R的 AUC； DR、 DT分別為 T和 R的劑量） . 對于多次給藥的 BA和 BE研究，提供受試制劑和參比制劑的三次谷濃度數(shù)據(jù)（ Cmin），達(dá)穩(wěn)態(tài)后的 AUCss Cssmax、 Cssmin 、 T ssmax、 t1/2 、 F、 DF等參數(shù)。當(dāng)受