【正文】 ； P藥差異無統(tǒng)計意義，但 P。此外 ,統(tǒng)計中數(shù)據(jù)對比宜用比值法而不用差值法 ,通過對數(shù)轉(zhuǎn)換 ,可實現(xiàn)將均值之比置信區(qū)間轉(zhuǎn)換為對數(shù)形式的均值之差的計算。當受試制劑與參比制劑劑量相等時， F值按下式計算： F＝ AUCss T／ AUCss R100％（式中 AUCss T和 AUCss R分別 為 T和 R穩(wěn)態(tài)條件下的 AUC） 3. 統(tǒng)計分析 對數(shù)轉(zhuǎn)換 評價 BE的藥代動力學參數(shù) AUC0→t 和 Cmax在進行等效性檢驗前必須作對數(shù)轉(zhuǎn)換。 AUC0→t 以梯形法計算； AUC0→∞ 按公式計算： AUC0→∞ ＝ AUC0→t ＋ Ct/λz（ t 為最后一次可實測血藥濃度的采樣時間； Ct為末次可測定樣本藥物濃度； λz系對數(shù)濃度 時間曲線末端直線部份求得的末端消除速率常數(shù)，可用對數(shù)濃度 時間曲線末端直線部分的斜率求得； t1/2 用公式t1/2＝ ／ λz計算。 2. 藥代動力學參數(shù) 單次給藥的 BA和 BE 研究，提供所有受試者服用受試制劑和參比制劑的 AUC0→t ， AUC0→∞ 、 Cmax、 Tmax、 t1/ CL、 Vd、 F等參數(shù)及其平均值和標準差。不能隨意剔除任何數(shù)據(jù)。受試期間發(fā)生的任何不良反應，均應及時處理和記錄，必要時停止試驗。試驗工作應在 I期臨床試驗觀察室進行。AUC0→t 以梯形法計算，故受數(shù)據(jù)處理程序影響不大。研究者可根據(jù)具體情況選擇使用，但所用軟件必須經(jīng) 確證并應在研究報告中注明所用軟件。 6. 藥代動力學參數(shù)計算 一般用非房室數(shù)學模型分析方法來估算藥代動力學參數(shù)。但該方法不能反映藥物吸收速度，誤差因素較多，一般不提倡采用。試驗藥品和試驗方 案應當符合生物利用度測定要求。多次給藥研究中，對于一些已知生物利用度受晝夜節(jié)律影響的藥物，則應該連續(xù) 24 小時取樣。采樣持續(xù)到受試 藥原形或其活性代謝物 3～ 5 個半衰期時，或至血藥濃度為Cmax的 1／ 10～ 1／ 20,AUC0t/AUC0∞通常應當大于 80%。一般在吸收相部分取 23個點，峰濃度附近至少需要 3個點，消除相取 35個點。在藥物濃度 — 時間曲線各時相及預計達峰時間前后應有足夠采樣點，使?jié)舛?— 時間曲線能全面反應藥物在體內(nèi)處置的全過程。通常應有預試驗或參考國內(nèi)外的藥代文獻，為合理設計采樣點提供依據(jù)。進行多次給藥研究應按臨床推薦的給藥方案給藥，至少連續(xù) 3次測定谷濃度確定血藥濃度達穩(wěn)態(tài)后選擇一個給藥間隔取樣進行測定，并據(jù)此計算生物利用度。受試制劑和參比制劑一般應服用相等劑量，需要使用不相等劑量時，應說明理由并提供所用劑量范圍內(nèi)的線性藥代動力學特征依據(jù)，結(jié)果可以劑量校正方式計算生物利用度。 試驗結(jié)束后受試制劑和參比制劑應保留足夠長時間直到產(chǎn)品批準上市以備查。個別藥物尚需提供多晶型及光學異構體的資料。 對于受試制劑，應為符合臨床應用質(zhì)量 標準的中試 /生產(chǎn)規(guī)模的產(chǎn)品。若為完成特定研究目的，可選用相同藥物的其它藥劑學性質(zhì)相近的上市劑型作為參比制劑，這類參比制劑亦應該是已上市的且質(zhì)量合格的產(chǎn)品。 3. 受試制劑和參比制劑 (Test Product and Reference Product ,T and R ) 參比制劑的質(zhì)量直接影響生物等效性試驗結(jié)果的可靠性，一般應選擇國內(nèi)已經(jīng)批準上市相同劑型藥物中的原創(chuàng)藥。另外，當一個生物利用度試驗完成后，可以根據(jù) θ、 CV%和把握度等參數(shù)來求 N值，并與試驗所選擇例數(shù)進行對比，檢驗試驗所采用例數(shù)是否合適。 一個臨床試驗的例數(shù)多少是由三個基本因素決定的：（ 1）顯著性水平：即 α值的大小，通常取 5%；（ 2）把握度：即 1β值的大小，一般定為不小于 80%，其中 β是犯第 Ⅱ 類錯誤的概率，也就是把實際有效誤判為無效的概率；（ 3）變異性（ CV%）和差別（ θ）：兩藥等效性檢驗中檢測指標的變異性和差別越大所需例數(shù)越多。 如已知藥物存在遺傳多態(tài)性導致代謝差異，應考慮受試者由于慢代謝可能出現(xiàn)的安全性等問題。受試者應無煙、酒嗜好。 為避免其他藥物干擾，試驗前兩周內(nèi)及試驗期間禁服任何其 他藥物。 受試者應經(jīng)過全面體檢，身體健康，無心、肝、腎、消化道、神經(jīng)系統(tǒng)、精神異常及代謝異常等病史；體格檢查示血壓、心率、心電圖、呼吸狀況、肝、腎功能和血象無異常，避免藥物體內(nèi)過程受到疾病干擾。按體質(zhì)指數(shù) (Body Mass Index , BMI)＝體重（ kg）／身高 2（ m2）計算，一般應在標準體重范圍內(nèi)。 年齡 :一般 18～ 40 周歲，同一批受試者年齡不宜相差 10 歲以上。選擇健康女性受試者應避免懷孕的可能性。 一般情況應選擇男性健康受試者。 2. 受試者的選擇 受試者入選條件： 受試者的選擇應當盡量使個體間差異減到最小，以便能檢測出制劑間的差 異。 但有些藥物或其活性代謝物半衰期很長時則難以按此方法設計實施，在此情況下可能需要考慮按平行組設計進行，但樣本量可能要增加。 設定清洗期是為了消除兩制劑的互相干擾，避免上個周期內(nèi)的處理影響到隨后一周期的處理中。如試 驗包括 3個制劑（受試制劑 2個和參比制劑 1個）時，宜采用 3制劑 3周期二重 33拉丁方試驗設計。 根據(jù)試驗制劑數(shù)量不同一般采用 22交叉、 33交叉等設計。兩順序間應有足夠長的間隔時間，為清洗期（ Washout Period）。 （二）實驗設計與操作 1. 交叉設計 交叉設計是目前應用最多最廣的方法，因為多數(shù)藥物吸收和清除在個體之間均存在很大變異，個體間的變異系數(shù)遠遠大于個體內(nèi)變異系數(shù)，因此生物等效性研究一般要求按自身 交叉對照的方法設計。對舍棄任何分析數(shù)據(jù)和選擇所報告的數(shù)據(jù)說明理由。 提供 20%受試者樣品測試的色譜圖復印件，包括相應分析批的標準曲線和質(zhì)控樣品的色譜圖復印件。 至少應當提供的數(shù)據(jù)包 括： 方法建立的數(shù)據(jù) 分析方法的詳細描述；儀器設備、分析條件；該方法所用對照品（被測藥物、代謝物、內(nèi)標物）的純度和來源；描述測定特異性、準確度、精密度、回收率、定量限、標準曲線的實驗并給出獲得的主要數(shù)據(jù)列表；列出批內(nèi)批間精密度和準確度的詳細結(jié)果；描述穩(wěn)定性考察及相關數(shù)據(jù)；根據(jù)具體情況提供代表性的色譜圖或質(zhì)譜圖并加以說明。建立一般性和特殊性標準操作規(guī)程、保存完整的實驗記錄是分析方法有效性的基本要素。 4 分析數(shù)據(jù)的記錄與保存 分析方法的有效性應通過實驗證明。 濃度高于定量上限的樣品，應采用相應的空白介質(zhì)稀釋后重新測定。質(zhì)控樣品測定結(jié)果的偏差一般應小于 15%，低濃度點偏差一般應小于 20%，最多允許 1/3的質(zhì)控樣品結(jié)果超過上述限度，但不能出現(xiàn)在同一濃度質(zhì)控樣品中。每個濃度至少雙樣本，并應均勻分布在未知樣品測試順序中。生物等效性試驗中，來自同一個體的生物樣品最好在同一批中測定。推薦由獨立的人員配制不同濃度的質(zhì)控樣品對分析方法進行考核。 3. 方法學質(zhì)控 只有在生物樣本分析方法確證完成之后才能開始測定未知樣品。微生物學或免疫學分析的標準曲線本質(zhì)上 是非線性的，所以應盡可能采用比化學分析更多的濃度點來建立標準曲線。應考察高、中、低 3個濃度的提取回收率，其結(jié)果應當精密和可重現(xiàn)。 提取回收率 從生物樣本基質(zhì)中回收得到分析物質(zhì)的響應值除以純標準品產(chǎn)生的響應值即為分析物的提取回收率。 樣品穩(wěn)定性 (Stability) 根據(jù)具體情況，對含藥生物樣品在室溫、冰凍或凍融條件下以及不同存放時間進行穩(wěn)定性考察，以確定生物樣品的存放條件和時間。在測定批內(nèi)精密度時，每一濃度至少制備并測定 5個樣品。 一般要求選擇高、中、低 3個濃度的質(zhì)控樣品同時進行方法的精密度和準確度考察。 準確度是指在確定的分析條件下，測得的生物樣品濃度與真實濃度的接近程度 (即質(zhì)控樣品的實測濃度與真實濃度的偏差 )，重復測定已知濃度分析物樣品可獲得準確度。通常用質(zhì)控樣品的批內(nèi)和批間 RSD來考察方法的精確度。應至少由 5個標 準樣品測試結(jié)果證明。 LLOQ應能滿足測定 3～ 5個消除半衰期時樣品中的藥物濃度或能檢測出 Cmax的 1／ 10～ 1／ 20時的藥物濃度。 當線性范圍較寬的時候，推薦采用加權的方法對標準曲線進行計算，以使低濃度點計算得比較準確。15%以內(nèi)。可接受范圍一般規(guī)定為最低濃度點的偏差在 177。建立標準曲線時應隨行空白生物樣品，但計算時不包括該點，僅用于評價干擾。必須至少用 6個濃度建立標準曲 線，對于非線性相關可能需要更多濃度點。標準曲線高低濃度范圍為定量范圍，在定量范圍內(nèi)濃度測定結(jié)果應達到試驗要求的精密度和準確度。 標準曲線和定量范圍（ Calibration Curve） 標準曲線反映了所測定物質(zhì)濃度與儀器響應值之間的關系，一般用回歸分析方法（如用加權最小二乘法）所得的回歸方程來評價。對于色譜法至少要考察 6個不同個體空白生物樣品色譜圖、空白生物樣品外加對照物質(zhì)色譜圖（注明濃度）及用藥后的生物樣品色 譜圖反映分析方法的特異性。必須提供證明所測定物質(zhì)是受試藥品的原形藥物或特定活性代謝物，生物樣品所含內(nèi)源性物質(zhì)和相應代謝物、降解產(chǎn)物不得干擾對樣品的測定，如果有幾個分析物，應保證每一個分析物都不被干擾。 2. 方法學確證（ Method Validation） 建立可靠的和可重現(xiàn)的定量分析方法是進行生物等效性研究的關鍵之一。 1. 常用分析方法 目前常用的幾 種分析方法有： （ 1）色譜法：氣相色譜法 (GC)高效液相色譜法 (HPLC)色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法（ LC－ MS、 LCMSMS、 GCMS、 GCMSMS）等，可用于大多數(shù)藥物的檢測；（ 2）免疫學方法：放射免疫分析法、酶免疫分析法、熒光免疫分析法等，多用于蛋白質(zhì)多肽類物質(zhì)檢測；（ 3）微生物學方法，可用于抗生素藥物的測定。一個完整的生物等效性研究包括生物樣本分析、實驗設計、統(tǒng)計分析、結(jié)果評價四個方面內(nèi)容。對于難溶性但高滲透性的藥物，如已建立良好的體內(nèi)外相關 關系，也可用體外溶出的研究來替代體內(nèi)研究。 體外研究 一般不提倡用體外的方法來確定生物等效性，因為體外并不能完全代替體內(nèi)行為，但在某些情況下，如能提供充分依據(jù)，也可以采用體外的方法來證實生物等效性。然而，作為生物等效研究方法，對照的臨床試驗可能因為樣本量不足或檢測 指標不靈敏而缺乏足夠的把握度去檢驗差異，故建議盡量采用藥代動力學研究方法。 藥效動力學研究 在無可行的藥代動力學研究方法建立生物等效