【正文】 應注意的是不同的測試條件所得到的測試結(jié)果亦可能有所差異。 絡合金屬離子存在方式的檢測 對于分子中含有順磁性金屬離子的藥物，常用的核磁共振（ NMR）方法不能得到金屬離子在藥物中存在方式的確切信息，可采用單晶 X衍射等方法進行檢測。 原子發(fā)射光譜法和原子吸收分光光度法（ Atomic emission spectrophotometry、 Atomic absorption spectrophotometry， AES 、 AAS） 可用于含有多種金屬離子的藥物中無機微量元素的含量分析。 以上分析方法均有各自 的優(yōu)、缺點，在藥物的結(jié)構(gòu)確證研究中應根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)特征，選擇適宜的方法，同時也可利用不同方法所得結(jié)果進行相互補充、佐證，以確定存在藥物中水或溶劑的種類、數(shù)量和形式。 單晶 X衍射（ XRSD） 單晶 X衍射在提供藥物元素組成、分子量及結(jié)構(gòu)的同時，還可提供藥物中以結(jié)晶形式存在的水或溶劑的信息，包括結(jié)晶水或溶劑的種類、數(shù)量、存在方式等。 干燥失重 該方法可以獲得藥物中的結(jié)晶水或溶劑、吸附水或溶劑的含量。結(jié)合差熱分析的結(jié)果，還可判斷測試藥物在熔融時分解情況。 常用分析方法為熱重、差熱分析、干燥失重、水分測定、核磁共振以及單晶 X衍射（ XRSD）。 其他方法 光學顯微鏡法等。 熱分析 用于藥物的物理常數(shù)、熔點和沸點的確定，并作為鑒別和純度檢查的方法。 紅外光譜（ IR） 結(jié)構(gòu)相同但晶型不同的藥物其紅外光譜在某些區(qū)域可能存在一定的差異，因此比較藥物的 IR 可以用于區(qū)分藥物的晶型，但應注 意在研磨、壓片時可能會發(fā)生藥物晶型的改變。 藥物晶型測定方法通常有粉末 X衍射、紅外光譜、熱分析、熔點、光學顯微鏡法等。 對于仿制已上市的藥物，應進行自制藥物的晶型與已上市藥物晶型比較的研究，以保證自制品晶型的正確性。 藥物晶型的研究 在藥物研發(fā)過程中，多晶型現(xiàn)象是普遍存在的，其中有 部分藥物因晶型不同具有不同的生物利用度和 /或生物活性，特別是水溶性差的口服固體藥物。 NOESY 或 NOE 譜 通過對具有剛性結(jié)構(gòu)（或優(yōu)勢構(gòu)象）藥物官能團上質(zhì)子的選擇性照射，致使與其相關(guān)質(zhì)子峰強度的增減和相互間偶合作用的消失，從而推測出鄰近官能團的空間構(gòu)象，進而可獲得藥物構(gòu)型的信息。如能得知藥物旋光的可測范圍，則在一系 列反應后，藥物絕對構(gòu)型可 從用于制備該藥物的底物構(gòu)型推導得到。 此外對于一般具有剛性結(jié)構(gòu)的環(huán)體系的羰基藥物，通過比較其 Cotton 效應的符號并結(jié)合經(jīng)驗規(guī)律 “八區(qū)律 ”，亦可能預測某些羰基藥物的絕對構(gòu)型。 普通的單晶 X衍射不能區(qū)分對映體，僅能推導出在空間的相對位置和藥物的相對構(gòu)型。 單晶 X衍射（ XRSD） 可獲得有關(guān)藥物晶型的相關(guān)信息、藥物的相對或絕對構(gòu)型以及與藥物以結(jié)晶形式存在的水 /溶劑及含量等一系列信息。常用方法有單晶 X衍射（ XRSD）、核磁共振譜（ NMR）、圓二色譜（ CD）、旋光光譜（ ORD）以及前述的 NOESY 或 NOE 譜（主要適用于具有剛性結(jié)構(gòu)的藥物）等。 粉末 X衍射（ XRPD） 可用于固態(tài)單一化合物的鑒別與晶型確定，晶態(tài)與非晶態(tài)物質(zhì)的判斷，多種化合物組成的多相（組分）體系中的組分（物相）分析（定性或定量），原料藥（晶型）的穩(wěn)定性研究等。 高分辨質(zhì)譜是通過精確測定分子量確定藥物分子式，但它不能反映藥物的純度和結(jié)晶水、結(jié)晶溶劑、殘留溶劑等情況。 分子離子峰是確證藥物分子式的有力證據(jù)，應根據(jù)藥物自身結(jié)構(gòu)特性選擇適宜的離子源和強度，同時盡可能地獲得分子離子峰和較多的、可反映出藥物結(jié)構(gòu)特征的碎片峰。 其它核磁共振譜 分子式中含 F、 P 等元素的藥物，進行相應的F、 P 譜測試，除可提供相應元素的種類、在分子中所處的化學環(huán)境等信息外，對藥物元素組成測試亦有佐證作用。 DEPT（ Distortionless enhancement by polarization transfer）譜可進一步明確區(qū)分碳原子的類型，對于結(jié)構(gòu)復雜的藥物， DEPT 譜對結(jié)構(gòu)解析可給予更加有力的支持。 對含有活潑氫的藥物必需進行氘代實驗，以提供活潑氫的存在以及位置的信息。 氫核磁共振譜（ 1HNMR） 該項測試可提供供試品結(jié)構(gòu)中氫原子的數(shù)目、周圍化學環(huán)境、相互間關(guān)系、空間排列等信息。 核磁共振測試的重要參數(shù)有化學位移（ δ）、偶合常數(shù)（ J 值）、峰形 、積分面積等。 核磁共振（ NMR） 本項測試可獲得藥物組成的某些元素在分子中的類型、數(shù)目、相互連接方式、周圍化學環(huán)境、甚至空間排列等信息，進而推測出化合物相應官能團的連接狀況及其初步的結(jié)構(gòu)。 部分含多晶型藥物在研磨和壓片過程中，其晶型可能發(fā)生變化，可改用糊法測 定，同時應根據(jù)藥物的結(jié)構(gòu)特點對糊劑的種類進行選擇。 紅外吸收光譜（ IR） 通過對藥物進行紅外吸收光譜測試，可推測 出藥物中可能存在的化學鍵、所含的官能團及其初步的連接方式，亦可給出藥物的幾何構(gòu)型、晶型、立體構(gòu)象等信息。 紫外吸收光譜（ UV） 通過對藥物溶液在可見 紫外區(qū)域內(nèi)在不同波長處吸收度的測定和吸收系數(shù)（尤其是摩爾吸收系數(shù)）的計算，以及對主要吸收譜帶進行歸屬（如 K帶、 R 帶、 E 帶、 B 帶），可獲得藥物結(jié)構(gòu)中可能含有的發(fā)色團、助色團種類以及初步的連接方式等信息，同時對藥物的鑒別亦有指導意義。這種方法可獲得組成藥物的元素種類及含量，經(jīng)比較測試結(jié)果與理論結(jié)果差值的大?。ㄒ话阋笳`差不 超過 ％），即可初步判定供試品與目標物的分子組成是否一致。 一般情況下，應采用原料藥制備工藝中產(chǎn)品的精制方法對樣品進行精制，并采用質(zhì)量標準中的方法測其純度和雜質(zhì)，供試樣品的純度應大于 %，雜質(zhì)含量應小于 %。 其它 上述未提及的具有特殊結(jié)構(gòu)，需特殊方法進行說明、確證的 藥物，可根據(jù)其結(jié)構(gòu)特征，制訂能反映藥物自身結(jié)構(gòu)特征的方法進行 結(jié)構(gòu)研究。紅外光譜、核磁共振、化學反應后產(chǎn)物的分析等實驗，可幫助確定糖苷鍵的連接方式及糖苷鍵的位置。單糖的分離和鑒定可采用紙色譜、薄層色譜、高效液相色譜、色－質(zhì)聯(lián)用等技術(shù)。 對于多肽藥物，應對目標物的化學純度和對映體或非對映體純度進行研究。 如各步中間體均進行了質(zhì)譜測定，可根據(jù)相關(guān)中間體的結(jié)構(gòu)信息，推測出進行反應的氨基酸的種類。 合成多肽藥物和多糖類藥物 合成多肽藥物 通過氨基酸分析、質(zhì)譜測定、序列分析以及肽圖測繪（含有 20 個以上的氨基酸殘基藥物） 等實驗可基本獲得合成多肽藥物的結(jié)構(gòu)信息。對于因晶型影響藥物的溶解性、穩(wěn)定性、生 物利用度和活性的藥物，在無相應藥理毒理等研究證明該晶型的安全和有效性時，應確證自制品與國外上市藥品晶型的一致性。 已有文獻報道存在多晶型的藥物 應明確藥物晶型的類型和純度。藥物晶型測定常用方法為粉末 X衍射（ XRPD）、紅外吸收光譜、熔點、熱分析、光學顯微鏡等。 半合成藥物 分子中母核的結(jié)構(gòu)為已知并在可提供明確證據(jù)證明原分子母核結(jié)構(gòu)在半合成全過程中未發(fā)生改變的前提下，適當簡化對母核部分結(jié)構(gòu)的確證工作，僅對新引入的基團結(jié) 構(gòu)進行確證。 金屬鹽類和絡合物 在進行一般要求的各項測試基礎(chǔ)上，考慮以適當手段反映藥物中金屬元素的種類、存在形式和含量的確證試驗。 不含金屬元素的有機鹽類或復合物 根據(jù)結(jié)構(gòu)確證的需要，可提供成鹽前后的兩套波譜和試驗數(shù)據(jù)。對于已有實驗證據(jù)或文獻報道立體異構(gòu)體在藥效、藥代動力學或毒理等方面有明顯不同或有相互作用的藥物，更有必要測定混合物中各組分的構(gòu)型和比例。 藥物分子中含有多個不對稱因素 應對其絕對構(gòu)型、對映體純度（非對映體純度） 進行相關(guān)的研究，并盡可能提供更多的構(gòu)型確證信息。其中單晶 X衍射為直接方法，可提供最直接的信息。 手性藥物 除進行上述各項化學結(jié)構(gòu)確證和比旋度測定外，還應采用其它有效的方法進行研究。 對于結(jié) 構(gòu)比較特殊的藥物，也可采用制備衍生物的方法間接證明藥物的結(jié)構(gòu)。 結(jié)構(gòu)確證的方案應根據(jù)藥物自身的結(jié)構(gòu)特點制訂 ， 以下對不同類型藥物的測試方案作一簡要概述。 常用的分析測試方法有紫外可見吸收光譜（簡稱：紫外光譜）（ Ultravioletvisible spectrophotometry， UV）、紅外吸收光譜（簡稱 “紅外光譜 ”）（ Infrared spectrophotometry， IR）、核磁共振譜（ Nuclear magic resonance，NMR）、質(zhì)譜（ Mass spectrum， MS）、比旋度（［ α］ D）、 X射線單晶衍射（簡稱：單晶 X衍射）（ Xray single crystal diffraction， XRSD）或 /和 X射線粉末衍射（簡稱：粉末 X衍射）（ Xray powder diffraction， XRPD）、 差示掃描量熱法（ Differential scanning calorimetry， DSC）、熱重（ Thermo－ gravimetry， TG）等。 結(jié)構(gòu)確證的一般過程：根據(jù)化合物（藥物）的結(jié)構(gòu)特征制訂科學、合理、可行的研究方案，制備符合結(jié)構(gòu)確證研究要求的樣品，進行有關(guān)的研究，對研究結(jié)果進行綜合分析，確證測試品的結(jié)構(gòu)。 本指導原則僅為基本的技術(shù)要求，隨著科學技術(shù)的發(fā)展，必然會出現(xiàn)新方法和新手段，因此，在藥物結(jié)構(gòu)確證研究中，不應機械地照搬指導原則的方法，應結(jié)合藥物的結(jié)構(gòu)特征，采用有效的手段與方法，以達到對藥物結(jié)構(gòu)準確確證的目的。名詞解釋對本指導原則涉及的專有名詞進行了解釋。研究的一般過程主要闡述了藥物結(jié)構(gòu)確證研究的基本規(guī)律，使藥物研發(fā)者對此有整體的認識。 本指導原則主要內(nèi)容為概述、研究的一般過程、研究的基本內(nèi)容、名詞解釋、參考文獻等部分。 （六）附件 工藝數(shù)據(jù)報告參考格式： 生產(chǎn)日期： 生產(chǎn)地點： 包 裝： 項 目 批號 投料量 工藝參數(shù) 產(chǎn) 品 重量 收率 質(zhì) 檢 外觀 熔點 沸點 晶型 有關(guān)物質(zhì) 含量 結(jié)晶水（結(jié)晶溶劑） 其它 二、化學藥物原料藥結(jié)構(gòu)確證研究的技術(shù)指導原則 （一）概述 原料藥的結(jié)構(gòu)確證研究是藥物研發(fā)的基礎(chǔ)，其主要任務是確認所制備原料藥的結(jié)構(gòu)是否正確，是保證藥學其它方面研究、藥理毒理和臨床研究能否順利進行的決定性因素。 （五）參考文獻 ICH ： Q3a Impurities In New Drug Substances ， 1996. FDA ： Guidance for Industry Drug Substance Chemistry， Manufacturing，and Controls Information ， 2020. EMEA ： Note For Guidance On Chemistry of The New Active Substance， 2020. 鄭筱萸 . 《化學藥品和治療用生物制品研究指導原則（試行）》 。 雜質(zhì)：是在原料藥的制備過程中，由原 料、試劑、溶劑或副反應引入的與終產(chǎn)品結(jié)構(gòu)不同的任何成分。 已知結(jié)構(gòu)中間體：已有文獻報道的中間體。 中間體：在原料藥制備過程中產(chǎn)生的、通過進一步的化學反應才能生成原料藥的化合物。 藥物研發(fā)者在以上研究的基礎(chǔ)上，經(jīng)對實驗室工藝、中試工藝和工業(yè)化生產(chǎn)工藝這三個階段的深入研究，應對整 個工藝有較全面的認識，從而對原料藥的制備工藝 從工藝路線、反應條件、產(chǎn)品質(zhì)量、經(jīng)濟效益、環(huán)境保護和勞動保護等方面進行綜合評價 。 工藝的綜合分析 在原料藥制備研究的過程中，工藝的綜合分析是重要內(nèi)容之一。 “三廢”的處理 在原料藥制備研究的過程中， “三廢 ”的處理應符合國家對環(huán)境保護的要求。這里所述的雜質(zhì)不包括終產(chǎn)品的降解物。因此，應對重要的變化，如起始原料、試劑的種類或規(guī)格、重要的反應條件、產(chǎn)品的精制方法等發(fā)生改變前 后對產(chǎn)品質(zhì)量的影響，以及可能引入新的雜質(zhì)情況進行說明，并對變化前后產(chǎn)品的質(zhì)量進行比較。藥 物研發(fā)者應特別重視原料藥的中試研究，中試規(guī)模工藝的設備、流程應與工業(yè)化生產(chǎn)一致。 從動、植物中提取的有效單體和通過微生物發(fā)酵獲得原料藥的實驗室研究和中試與合成藥物相關(guān)單元操作要求基本相似。 原料藥制備工藝優(yōu)化與中試的主要任務是：（ 1）考核實驗室提供的工藝在工藝條件、設備、原材料等方面是否有特殊的要求，是否適合工業(yè)化生產(chǎn)；（ 2）確定所用起始原料、試 劑及有機溶劑的規(guī)格或標準；（ 3）驗證實驗室工藝是否成熟合理，主要經(jīng)濟指標是否接近生產(chǎn)要求；（ 4）進一步考核