【正文】 源基質、用藥后的時間）色譜圖。應考察方法的每一步驟，確定從樣品采集到分析測試的全過程中，環(huán)境、基質、材料或操作上的可能改變對測定結果的影響。對于首次建立的生物樣品分析方法、新的藥物或新增代謝產物定量分析，應進行全面方法驗證。2. 生物樣品分析方法的建立和驗證由于生物樣品取樣量少、藥物濃度低、內源性物質（如無機鹽、脂質、蛋白質、代謝產物）及個體差異等多種因素影響生物樣品測定，所以必須根據待測物的結構、生物基質和預期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品分析方法，并對方法進行驗證。標準樣品：在生物基質中加入已知量分析物配制的樣品，用于建立標準曲線，計算質控樣品和未知樣品中分析物濃度。分析批：包括待測樣品、適當數目的標準樣品和質控樣品的完整系列。例如全血、血漿、血清、尿、糞、各種組織等。定量范圍：包括定量上限（ULOQ）和定量下限（LLOQ）的濃度范圍，在此范圍內采用濃度響應關系能進行可靠的、可重復的定量，其準確度和精密度可以接受。標準曲線應是連續(xù)的和可重現的，應以回歸計算結果的百分偏差最小為基礎。標準曲線：試驗響應值與分析物濃度間的關系。重現性：不同試驗室間測定結果的分散程度，以及相同條件下分析方法在間隔一段短時間后測定結果的分散程度。這些共存組分可能包括代謝產物、雜質、分解產物、基質組分等。精密度：在確定的分析條件下，相同基質中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。六、附錄（一）生物樣品分析方法的基本要求1. 基本概念生物樣品分析方法的基本參數包括：（1）準確度，（2）精密度，（3）特異性，（4）靈敏度，（5）重現性，（6）穩(wěn)定性。五、試驗結果與評價對所獲取的數據應進行科學和全面的分析與評價，綜合論述藥物在動物體內的藥代動力學特點，包括藥物吸收、分布和消除的特點；經尿、糞和膽汁的排泄情況；與血漿蛋白結合的情況；藥物在體內蓄積的程度及主要蓄積的器官或組織；如為創(chuàng)新性的藥物，還應闡明其在體內的生物轉化、消除過程及物質平衡情況。四、數據處理與分析應有效整合各項試驗數據，選擇科學合理的數據處理及統計方法。有關試驗方法的介紹及相關考慮見附錄（二）。同時，組織分布研究和動物膽管插管收集的膽汁能夠提供藥物的組織分布數據和明確膽汁清除特點。這些研究能夠獲得化合物的排泄途徑和排泄速率等信息，而且有助于代謝產物的性質鑒定，并通過有限的數據比較它們的體內吸收和分布特點。創(chuàng)新藥物非臨床ADME研究還應該考慮到代謝酶與轉運體之間的相互影響及潛在的相互作用、人特異性代謝產物的評估等。具有重要臨床意義的外排和攝入轉運體主要包括Pgp、BCRP、OATP1BOATP1BOATOAT3和OCT2等，建議針對這些轉運體進行研究。藥物對P450酶的誘導應該重點對人CYP3A4以及CYP1ACYP2B6進行評估。Km（米氏常數），抑制強弱通過IC50或Ki判斷。對細胞色素P450同工酶（CYP1ACYP2BCYP2CCYP2CCYP2C1CYP2DCYP3A4等）抑制的考察可以通過使用類藥性探針底物（Druglike Probe Substrate）完成。非臨床ADME研究應主要采用人源化材料（如：人肝微粒體、肝S原代肝細胞及P450重組酶等），鑒定藥物是否是代謝酶的底物或抑制劑。因此，創(chuàng)新性藥物的研究開發(fā)應該重點關注藥物吸收和主要消除途徑的確定、代謝酶和轉運體對藥物處置相對貢獻的描述、基于代謝酶或轉運體的藥物藥物相互作用的評估等。7. 藥物代謝酶及轉運體研究藥物的有效性及毒性與血藥濃度或靶器官濃度密切相關。這種差異有兩種情況，其一是量的差異，動物與人的代謝產物是一致的，但各代謝產物的量不同或所占的比例不同；其二是質的差異，即動物與人的代謝產物是不一致的，這時應考慮這種代謝的種屬差異是否會影響到其藥效和毒性，并以此作為藥效和毒性試驗動物選擇的依據。體內藥物生物轉化可考慮與血藥濃度時間曲線和排泄試驗同時進行，應用這些試驗采集的樣品進行代謝產物的鑒定及濃度測定。如果臨床研究提示其在有效性和安全性方面有開發(fā)前景，需進一步研究并闡明主要代謝產物的代謝途徑、結構及酶催化機制。對于新的前體藥物, 除對其代謝途徑和主要活性代謝產物結構進行研究外, 尚應對原形藥和活性代謝產物進行系統的藥代動力學研究。對血漿蛋白結合率高，且安全范圍窄的藥物，建議開展體外藥物競爭結合試驗，即選擇臨床上有可能合并使用的高蛋白結合率藥物，考察對所研究藥物蛋白結合率的影響。研究藥物與血漿蛋白結合可采用多種方法，如平衡透析法、超過濾法、分配平衡法、凝膠過濾法、色譜法等。5. 與血漿蛋白的結合一般情況下，只有游離型藥物才能通過脂膜向組織擴散，被腎小管濾過或被肝臟代謝，因此藥物與蛋白的結合會明顯影響藥物分布與消除的動力學過程，并降低藥物在靶部位的濃度。 膽汁排泄：一般在動物麻醉下作膽管插管引流，待動物清醒且手術完全恢復后給藥，并以合適的時間間隔分段收集膽汁，進行藥物和主要代謝產物測定。糞樣品收集后按一定比例制成勻漿，記錄總重量或體積，取部分尿或糞樣品進行藥物和主要代謝產物濃度測定或代謝產物譜（Metabolite profile）分析，計算藥物和主要代謝產物經此途徑排泄的速率及排泄量。根據藥物特性，也可選擇單一性別動物，但需說明。進行組織分布試驗，必須注意取樣的代表性和一致性。每個時間點，一般應有6個動物（雌雄各半）的數據。參考血藥濃度時間曲線的變化趨勢，選擇至少3個時間點分別代表吸收相、平衡相和消除相的藥物分布。特別注意藥物濃度高、蓄積時間長的組織和器官，以及在藥效靶組織或毒性靶組織的分布（如對造血系統有影響的藥物，應考察在骨髓的分布）。3. 分布一般選用大鼠或小鼠進行組織分布試驗，但必要時也可在非嚙齒類動物（如犬）中進行。對于其他血管外給藥的藥物及某些改變劑型的藥物，應根據立題目的，提供絕對生物利用度或相對生物利用度。2. 吸收對于經口給藥的新藥，進行整體動物試驗時應盡可能同時進行血管內給藥的試驗，提供絕對生物利用度。比較首次與末次給藥的血藥濃度時間曲線和有關參數。各個受試動物的3次穩(wěn)態(tài)谷濃度數據及各組平均值、標準差。對受試物單次給藥非臨床藥代動力學的規(guī)律和特點進行討論和評價。 應提供的數據 單次給藥各個受試動物的血藥濃度時間數據及曲線和各組平均值、標準差及曲線。靜脈注射給藥，應提供消除半衰期（t1/2）、表觀分布容積（Vd）、血藥濃度時間曲線下面積（AUC）、清除率（CL）等參數值；血管外給藥，除提供上述參數外，還應提供峰濃度（Cmax）和達峰時間（Tmax）等參數，以反映藥物吸收、消除的規(guī)律。生物樣品的處理應與分析方法驗證中的處理方法一致。 根據單次給藥藥代動力學試驗結果求得的消除半衰期，并參考藥效學數據, 確定藥物劑量、給藥間隔和連續(xù)給藥的天（次）數。 多次（重復）給藥對于臨床需長期給藥或有蓄積傾向的藥物，應考慮進行多次（重復）給藥的藥代動力學研究。 口服給藥：一般在給藥前應禁食12小時以上，以排除食物對藥物吸收的影響。h內采血總量不宜超過2 mL。同時應注意采血途徑和整個試驗周期的采血總量不影響動物的正常生理功能和血液動力學