【正文】 于以預(yù)先確定的等效標(biāo)準(zhǔn)和限度進(jìn)行的比較，是保證含同一藥物活性成分的不同制劑體內(nèi)行為一致性的依據(jù)，是判斷后研發(fā)產(chǎn)品是否可替換已上市藥品使用的依據(jù)。 在仿制生產(chǎn)已有國家標(biāo)準(zhǔn)藥品時，可通過 BE 研究來證明仿制產(chǎn)品與原創(chuàng)藥是否具有生物等效性，是否可與原創(chuàng)藥替換使用。以提高生物利用度為目的研發(fā)的新制劑，需要進(jìn)行 BA 研究，了解變更前后生物利用度的變化。 目前推薦的生物等效性研究方法包括體內(nèi)和體外的方法。具體如下： 藥代動力學(xué)研究 即采用人體生物利用度比較研究的方法。并經(jīng)過適當(dāng)?shù)臄?shù)據(jù)，得出與吸收程度和速度有關(guān)的藥代動力學(xué)參數(shù)如 曲線下面積（ AUC）、達(dá)峰濃度（ Cmax）、達(dá)峰時間（ Tmax）等，通過統(tǒng)計學(xué) 比較以 上參數(shù)，判斷兩制劑是否生物等效。 臨床比較試驗 當(dāng)無適宜的藥物濃度檢測方法，也缺乏明確的藥效學(xué)指標(biāo)時，也可以通過以參比制劑為對照的臨床比較試驗，以綜合的療效終點指標(biāo)來驗證兩制劑的等效性。通過增加樣本量或嚴(yán)格的臨床研究實施在一定程度上可以克服以上局限。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類證明屬于高溶解度，高滲透性，快速溶出的口服制劑可以采用體外溶出度比較研究的方法驗證生物等效，因為該類藥物的溶出、吸收已經(jīng)不是藥物進(jìn)入體內(nèi)的限速步驟。 四、 BA和 BE研究具體要求 以藥代動力學(xué)參數(shù)為終點指標(biāo)的研究方法是目前普遍采用的生物等效性研究方法。 （一）生物樣本分析方法的建立和確證 生物樣品一般來自全血、血清、血漿、尿液或其他組織，具有取樣量少、 藥物濃度低、干擾物質(zhì)多以及個體的差異大等特點，因此必須根據(jù)待測物的結(jié)構(gòu)、生物介質(zhì)和預(yù)期的濃度范圍，建立適宜的生物樣品定量分析方法，并對方法進(jìn)行確證。 生物樣本分析方法的選擇宜盡量選擇可行的靈敏度高的方法。為了保證分析方法 可靠，必須進(jìn)行充分的方法確證，一般應(yīng)進(jìn)行以下幾方面的考察： 特異性 (Specificity) 特異性是指樣品中存在干擾成分的情況下，分析方法能夠準(zhǔn)確、專一地測定分析物的能力。應(yīng)確定保證分析方法特異性的最佳檢測條件。對于以軟電離質(zhì)譜為基礎(chǔ)的檢測法（ LC－MS、 LCMSMS）應(yīng)注意考察分析過程中的介質(zhì)效應(yīng)，如離子抑制等。應(yīng)提供標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程和相關(guān)系數(shù)，說明其線性相關(guān)程度。 配制標(biāo)準(zhǔn)樣品應(yīng)使用與待測樣品相同生物介質(zhì)，不同生 物樣品應(yīng)制備各自的標(biāo)準(zhǔn)曲線，用于建立標(biāo)準(zhǔn)曲線的標(biāo)準(zhǔn)濃度個數(shù)取決于分析物可能的濃度范圍和分析物 /響應(yīng)值關(guān)系的性質(zhì)。定量范圍要能覆蓋全部待測的生物樣品濃度范圍，不得用定量范圍外推的方法求算未知樣品的濃度。 標(biāo)準(zhǔn)曲線各濃度點的實測值與標(biāo)示值之間的偏差 *在可接受的范圍之內(nèi)時，可判定標(biāo)準(zhǔn)曲線合格。20%以內(nèi)，其余濃度點的偏差在 177。只有合 格的標(biāo)準(zhǔn)曲線才能對臨床待測樣品進(jìn)行定量計算。 定量下限（ Lower Limit of quantitation， LLOQ） 定量下限是標(biāo)準(zhǔn)曲線上的最低濃度點，表示測定樣品中符合準(zhǔn)確度和精密度要求的最低藥物濃度。其準(zhǔn)確度應(yīng)在真實濃度的 80%～ 120%范圍內(nèi)，相對標(biāo)準(zhǔn)差 (RSD)應(yīng)小于 20%。 * ：偏差 =【（實測值－標(biāo)示值） /標(biāo)示值】 X100% 精密度與準(zhǔn)確度 (Prcision and Accuracy) 精密度是指在確定的分析條件下，相同介質(zhì)中相同濃度樣品的一系列測量值的分散程度。一般RSD應(yīng)小于 15％，在 LLOQ附近 RSD應(yīng)小于 20％。一般應(yīng) 85％～ 115％范圍內(nèi)，在 LLOQ附近應(yīng)在 80％～ 120％范圍內(nèi)。低濃度選擇在 LLOQ的 3倍以內(nèi)，高濃度接近于標(biāo)準(zhǔn)曲線的上限，中間選一個濃度。為獲得批間精密度應(yīng)至少在不同天連續(xù)制備并測定 3 個合格的分析批(Analytical run/Analytical batch)，至少 45 個樣品。還應(yīng) 注意考察儲備液的穩(wěn)定性以及樣品處理后的溶液中分析物的穩(wěn)定性，以保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性。也可以說是將供試生物樣品中分析物提取出來供分析的比例。 微生物學(xué)和免疫學(xué)方法確證 上述分析方法確證主要針對色譜法，很多參數(shù)和原則也適用于微生物學(xué)或免疫學(xué)分析，但在方法確證中應(yīng)考慮到它們的一些特殊之處。結(jié)果的準(zhǔn)確度是關(guān)鍵的因素，如果重復(fù)測定能夠改善準(zhǔn)確度，則應(yīng)在方法確證和未知樣品測定中采用同樣的步驟。在測定生物樣品中的藥物濃度時應(yīng)進(jìn)行質(zhì)量控制，以保證所建立的方法在實際應(yīng)用中的可靠性。 每個未知樣品一般測定一次，必要時可進(jìn)行復(fù)測。每個分析批生物樣品測 定時應(yīng)建立新的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并隨行測定高、中、低三個濃度的質(zhì)控樣品。當(dāng)一個分析批中未知樣品數(shù)目較多時，應(yīng)增加各濃度質(zhì)控樣品數(shù)，使質(zhì)控樣品數(shù)大于未知樣品總數(shù)的 5%。如質(zhì)控樣品測定結(jié)果不符合上述要求，則該分析批樣品測試結(jié)果作廢。對于濃度低于定量下限的樣品，在進(jìn) 行藥代動力學(xué)分析時，在達(dá)到 Cmax以前取樣的樣品應(yīng)以零值計算，在達(dá)到 Cmax 以后取樣的樣品應(yīng)以無法定量（ Not detectable, ND）計算，以減小零值對 AUC 計算的影響。在臨床報告中，應(yīng)提供完成這些實驗工作的相關(guān)的詳細(xì)資料。生物分析方法建立中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)和質(zhì)控樣品測試結(jié)果應(yīng)全部記錄并妥善保存，并提供足夠的可供評價的方法學(xué)建立和樣品分析的數(shù)據(jù)。 樣品分析的數(shù)據(jù) 樣品處理和保存的情況；分析樣品時標(biāo)準(zhǔn)曲線列表；用于計算結(jié)果的回歸方程；各分析批質(zhì)控樣品測定結(jié)果綜合列表并計算批內(nèi)和批間精密度、準(zhǔn)確度；各分析批包括的未知 樣品濃度計算結(jié)果。 注明缺失樣品的原因，重復(fù)測試的結(jié)果。 其他相關(guān)信息 項目編號、分析方法編號、分析方法類型、分析方法確證進(jìn)行簡化的理由、以及相應(yīng)的項目計劃編號、標(biāo)題等。把受試對象隨機分為幾組，按一定順序處理，一組受試者先服用受試制劑，后服用參比制劑；另一組受試者先服用參比制劑，后服用受試制劑。這樣，對每位受試者都連續(xù)接受兩次或更多次的處理，相當(dāng)于自身對照，可以將制劑因素對藥物吸收的影響與其他因素區(qū)分開來，減少了不同試驗周期和個體間差異對試驗結(jié)果的影響。如果是兩種制劑比較，雙處理、雙周期，兩序列的交叉設(shè)計是較好的選擇。各周期間也應(yīng)有足夠的清洗期。清洗期一般不應(yīng)短于 7個消除半衰期。 而對于某些高變異性藥物（ Highly Variable Drug），根據(jù)具體情況，除 采用增加例數(shù)的辦法外， 可采用重復(fù)交叉設(shè) 計 ,對同一受試者兩次接受同 一制劑時可能存在的個體內(nèi)差異進(jìn)行測定。試驗方案中應(yīng)明確入選和剔除條件。特殊作用的藥品，則應(yīng)根據(jù)具體情況選擇適當(dāng)受試者。如待測藥物存在已知的不良反應(yīng)，可能帶來安全性擔(dān)憂，也可考慮選擇患者作為受試者。 體重：正常受試者的體重一般不應(yīng)低于 50kg。同一批受試者體重（ kg）不宜懸殊過大，因為受試者服用的藥物劑量是相同的。根據(jù)藥物類別和安全性情況，還應(yīng)在試驗前、試驗期間、試驗后進(jìn)行特殊項目檢查，如降糖藥應(yīng)檢查血糖水平。實驗期間禁煙、酒及含咖啡因的飲料，或某些可能影響代謝的果汁等，以免干擾藥物體內(nèi)代謝。如有吸煙史，在討論結(jié)果時應(yīng)考慮可能的影響。 受試者例數(shù) 受試者例數(shù)應(yīng)當(dāng)符合統(tǒng)計學(xué)要求，對于目前的統(tǒng)計方法 ,1824 例可滿足大多數(shù)藥物對樣本量的要求，但對某些變異性大的藥物可能需要適當(dāng)增加例數(shù)。在試驗前并不知道 θ和 CV%，只能根據(jù)已有的參比制劑的上述參數(shù)來估算或進(jìn)行預(yù)試驗。 受試者分組 必須采用隨機方法分組，各組間應(yīng)具有可比性。在無法獲得原創(chuàng)藥時，可考慮選用上市主導(dǎo)產(chǎn)品作為參比制劑，但須提供相關(guān)質(zhì)量證明（如含量、溶出度等檢查結(jié)果）及選擇理由。 參比制劑和受試制劑含量差別不能超過 5%。應(yīng)提供該制劑的體外溶出度、穩(wěn)定性、含量或效價測定、批間一致性報告等，供試驗單位參考。 參比制劑和受試制劑均應(yīng)注明研制單位、批號、規(guī)格、保存條件、有效期。 4. 給藥劑量 進(jìn)行藥物制劑生物利用度和生物等效性研究時，給藥劑量一般應(yīng)與臨床單次用藥劑量一致，不得超過臨床推薦的單次最大劑量或已經(jīng)證明的安全劑量。 一般情況下普通制劑僅進(jìn)行單劑量給藥研究即可 ,但在某些情況下可能需要考慮進(jìn)行多次給藥研究，如：（ 1）受試藥單次服用后原形藥或活性代謝物濃度很低，難以用相應(yīng)分析方法精密測定血藥濃度時；（ 2）受試藥的生物利用度有較大個體差異；（ 3）藥物吸收程度相差不大，但吸收速度有較大差異；（ 4）緩控釋制劑。 5. 取樣 取樣點的設(shè)計對保證試驗結(jié)果可靠性及藥代動力學(xué)參數(shù)計算的合理性，均有十分重要的意義。應(yīng)用血藥濃度測定法時，一般應(yīng)兼顧到吸收相、平衡相（峰濃度）和消除相。服藥前應(yīng)先取空白血樣。盡量避免第一個點即為 Cmax，預(yù)試驗將有助于避免這個問題。對于長半衰期藥物，應(yīng)盡可能取樣持續(xù)到足夠比較完整的吸收過程，因為末端消除項對該類制劑吸 收過程的評價影響不大。 當(dāng)受試藥不能用血藥濃度測定方法進(jìn)行生物利用度檢測時，若該藥原形或活性代謝物主要由尿排泄（大于給藥劑量的 70%），可以考慮尿藥法測定，以尿樣中藥物的累積排泄量來反映藥物攝入量。尿樣的收集采用分段收集法 ,其采集頻度、間隔時間應(yīng)滿足估算受試藥原形藥或活性代謝物經(jīng)尿的排泄程度。 某些藥物在體內(nèi)迅速代謝無法測定生物樣品中原形藥物，也可采用測定生物樣品中主要代謝物濃度的方法，進(jìn)行生物利用度和生物等效性試驗。用房室模型方法估算藥代參數(shù)時，采用不同的方法或軟件其值可能有較大差異。在生物等效性研究中，其主要測量參數(shù) Cmax 和 Tmax 均以實測值表示。 7. 研究過程標(biāo)準(zhǔn)化 整個研究過程應(yīng)當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)化，以使得除制劑因素外，其他各種因素導(dǎo)致的體內(nèi)藥物釋放吸收差異減少到最小，包括受試者的飲食、活動都應(yīng)控制。受試者應(yīng)得到醫(yī)護人員的監(jiān)護。 （三）數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計分析 1. 數(shù)據(jù)表達(dá) BA 和 BE 研究必須提供所有受試者 各個時間點受試制劑和參比制劑的藥物濃度測定數(shù)據(jù)、每一時間點的平均濃度（ Mean）及其標(biāo)準(zhǔn)差（ SD）和相對標(biāo)準(zhǔn)差（ RSD），提供每個受試者的濃度 — 時間曲線（ CT曲線）和平均 CT曲線以及 CT曲線各個時間點的標(biāo)準(zhǔn)差。脫落者的數(shù)據(jù)一般不可用其他數(shù)據(jù)替代。 Cmax和 Tmax均以實測值表示。 以各個受試者受試制劑（ T）和參比制劑（ R）的 AUC0→t 按下式分別計算其相對生物利用度（ F）值： 當(dāng)受試制劑和參比制劑劑量相同時： F＝ AUCT／ A