微生物限度檢查檢驗方法驗證方案(編輯修改稿)
2024-12-01 19:11 本頁面
【文章內容簡介】 定供試品本底菌數(shù)。 4）稀釋劑對照組 若供試液制備需要分散、乳化，中和、離心或薄膜過濾等特殊處理時，應增加稀釋劑對照組，以考察供試液制備過程中微生物受影響的程度。試驗時，可用相應的稀釋液替代供試品，加入試驗菌，使最終菌濃度為每 1ml 供試液含 50～ 100cfu，按試驗組的供試液制備方法和菌落計數(shù)方法測定其菌數(shù)。 5）結果判斷 在 3 次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數(shù)占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）應均不低于 70％。若試驗組的回收率（試驗組的平均菌落數(shù)減去供試品對照組的平均菌落數(shù)的值占菌液組的平均菌落數(shù)的百分率）均不低于 70％，照該供試液制備方法和計數(shù)法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌數(shù)；若任一次試驗中試驗組的菌回收率低于 70％，應采用培養(yǎng)基稀釋法、離心沉淀集菌法、薄膜過濾法、中和法等方法或聯(lián)合使用這些方法消除供試品的抑菌活性 ，并重新進行方法驗證 控制菌檢查方法的驗證 驗證時，依各品種項下微生物限度標準中規(guī)定檢查的控制菌選擇相應驗證的菌株，驗證大腸菌群檢查法時，應采用大腸埃希菌作為驗證菌株。 驗證試驗按供試液的制備和控制菌檢查法的規(guī)定及下列要求進行。 菌種 檢查所用的菌株傳代次數(shù)不得超過 5 代（從菌種保存中心獲得的冷凍干燥菌種為 0 代），并采用適宜的菌種保藏技術，以保證試驗菌株的生物學特性。 大腸埃希菌（ Escherichia coli） [CMCC(B)44102] 金黃色葡萄球菌（ Staphylococcus aureus） [CMCC(B)26003] 銅綠假單胞菌（ Pseudomonas aeruginosa） [CMCC(B)10104] 菌液制備 接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌的新鮮培養(yǎng)物至營養(yǎng) 第 6 頁 共 12 頁 肉湯培養(yǎng)基或營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基中， 30～ 35℃培養(yǎng) 18～ 24 小時。用 ％無菌氯化鈉溶液制成每 1ml 含菌數(shù) 10～ 100cfu 的菌懸液 . 驗證方法 1）試驗組 取規(guī)定供試液及 10～ 100cfu 試驗菌加入增菌培養(yǎng)基 中，依相應控制菌檢查法進行檢查。當采用薄膜過濾法時，取規(guī)定量供試液，過濾，沖洗，試驗菌應加在最后一次沖洗液中，過濾后，注入增菌培養(yǎng)基或取出濾膜接入增菌培養(yǎng)基中。 2）陰性菌對照組 設立陰性菌對照組是為了驗證該控制菌檢查方法的專屬性。方法同試驗組，驗證大腸埃希菌、大腸菌群、沙門菌檢查法時的陰性對照菌采用金黃色葡萄球菌；驗證銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌、梭菌檢查法時的陰性對照采用大腸埃希菌。陰性對照菌不得檢出。 3）結果判斷 陰性菌對照組不得檢出陰性對照菌。若試驗組檢出試驗菌，按此供試液制備法和控制菌檢查法 進行供試品的該控制菌檢查；若試驗中未檢出試
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