【文章內(nèi)容簡介】 四種堿基要隨機分布。 ⑥引物之間不能有連續(xù) 4個堿基的互補。 轉化方法研究（植物） a、農(nóng)桿菌介導 b、聚乙二醇（ PEG）、電激儀 c、基因槍、激光微束 c、子房注射、花粉管導入 d、 nano reagents for geic transformation 目前雙子葉植物基因轉移的常用方法。 根癌農(nóng)桿菌的 Ti (Tumer induce)質粒和發(fā)根農(nóng)桿菌的 Ri (Root induce)質粒上的一段 TDNA區(qū)可以轉移到植物細胞并插入到染色體中。 利用 Ti質粒的這一天然的遺傳轉化特性 ,可將外源基因置換 TDNA中的非必需序列 ,即可使外源基因整合到受體染色體而獲得穩(wěn)定的表達。 迄今所獲得的近 200種轉基因植物 , 80％以上是利用根癌農(nóng)桿菌轉化系統(tǒng)產(chǎn)生的。 農(nóng)桿菌介導法 根癌農(nóng)桿菌（ Agrobacterium tumefaciens） 細菌通過傷口進入植物，在基因水平上轉化植物。細菌 DNA中的編碼基因在植物細胞中表達，刺激植物細胞不受控制的分裂，形成瘤。 根癌農(nóng)桿菌的 Ti質粒 ?200500kb的雙鏈環(huán)狀 DNA分子， ?具有五個主要功能區(qū)域， ?TDNA、質粒轉移、冠癭堿代謝(opine catabolism)、復制原點 (ori)和毒性區(qū)域 (vir)。 ?直接參與轉移并整合的序列僅是 TDNA兩端與其它序列交界處的 25bp不完全直接重復，右端的序列稱為右界(right border, RB), 左端的為左界 (left border,LB)。 TDNA區(qū)域內(nèi)的所有基因與轉移無關，所以將致瘤基因全部缺失后，將其它序列插入到這個區(qū)域，形成的 TDNA仍可將 RB至 LB內(nèi)的序列轉移并整合到植物基因組。 Right border 5’TGNCAGGATATATNNNNNNGTNANN3’ Left border 5’TGGCAGGATATATNNNNNTGTAAAN3’ Right Left The right and left borders of the TDNA of the Ti plasmid are 25 bp direct ―repeats‖ important for mobilization of the TDNA by vir gene products The generation of a transgenic plant through the growth of a cell transformed by TDNA. infection 基因槍法 基因槍法又稱微彈射擊法。 基本原理是將外源 DNA包被在微小的金?；蜴u粒表面，然后在高壓的作用下微粒被高速射入受體細胞或組織。微粒上的 DNA進入細胞后整合到植物染色體上得到表達，從而實現(xiàn)基因轉化。 是繼農(nóng)桿菌介導法之后的第二大基因轉化法。 在禾本科作物上應用較廣泛。 基因槍轉化的操作步驟 靶細胞或組織的預處理 微粒子彈的制備 裝備基因槍 轟擊 過渡培養(yǎng) 進行篩選培養(yǎng)或直接分化再生植株 PDS1000 | He System 便攜式基因槍 基因槍法轉化的優(yōu)點有： 無宿主限制： 農(nóng)桿菌介導法只對雙子葉植物敏感，限制了它的應用范圍。而基因槍沒有物種限制。 靶受體類型廣泛： 可以是原生質體，葉片，懸浮細胞，莖或根切段，種子胚，愈傷組織，花粉等。 載體簡化： 基因序列 操作簡單快速 但該方法轉化率低，外源 DNA整合機理不清楚。 a、 抗病毒病方面 ， 以轉移病毒外殼蛋白（ CP） 基因 b、 抗蟲方面 ， 蘇云金桿菌的 Bt殺蟲晶體蛋白基因 c、 抗除草劑方面 ， 將除草劑甘膦的靶酶（ EPSPS） 的 cDNA轉入油菜 植物轉基因應用研究 根據(jù)育種目標，從供體生物中分離目的基因，經(jīng) DNA重組與遺傳轉化或直接運載進入受體作物，經(jīng)過篩選獲得穩(wěn)定表達的遺傳個體，并經(jīng)過田間試驗與大田選擇育成轉基因新品種或種質資源。 什么是轉基因作物 （ geically modified crops） ? 轉基因育種的程序 基因分離 體外重組 轉化 轉化體 安全性評價 結合常規(guī)育種 轉基因品種 遺傳穩(wěn)定性評價 市場開發(fā) 載體的構建 農(nóng)桿菌介導 基因槍轟擊 篩選 轉基因個體生長快 ， 個體大 ，瘦肉率高 ， 飼料利用率高 轉基因動物 生物發(fā)生器 英國研制成功的轉基因羊，其乳汁中含有 a[1]—抗胰蛋白酶， 可治療肺氣腫病。病人以前只能依賴于注射人的a[1]—抗胰蛋白酶做替代療法， 價格昂貴，而現(xiàn)在用轉基因羊來生產(chǎn)，每升這種羊奶可售 6000美元。 基因工程與藥物 許多藥品的生產(chǎn)是從生物組織中提取的。受材料來源限制產(chǎn)量有限，其價格往往十分昂貴。 微生物生長迅速，容易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。若將生物合成相應藥物成分的基因導入微生物細胞內(nèi)，讓它們產(chǎn)生相應的藥物，不但能解決產(chǎn)量問題，還能大大降低生產(chǎn)成本。 許多藥品的生產(chǎn)是從生物組織中提取的。受材料來源限制產(chǎn)量有限，其價格往往十分昂貴。 微生物生長迅速，容易控制，適于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。若將生物合成相應藥物成分的基因導入微生物細胞內(nèi)，讓它們產(chǎn)生相應的藥物，不但能解決產(chǎn)量問題，還能大大降低生產(chǎn)成本。 基因工程人干擾素 α 2b（安達芬） 美國生物制藥產(chǎn)品種類及數(shù)量 （ PHRAM） 疾病種類 產(chǎn)品數(shù)量 疾病種類 產(chǎn)品數(shù)量 感染性疾病 39 心臟病 26 神經(jīng)系統(tǒng)疾病 28 呼吸系統(tǒng)疾病 22 艾滋病及相關疾病 19 自主免疫系統(tǒng)疾病 19 皮膚病 19 移植 13