【文章內(nèi)容簡介】 空 氣 靜 壓 箱工 藝 操 作 功 能 房 間圖 6 靜 態(tài) 測試應在凈化空氣調(diào)節(jié)系統(tǒng)正常運行時間不少于 30min 后開始，具體嚴格遵循不同狀態(tài)的湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 16 頁 共 91 頁 測試要求。 采樣點數(shù)目 采樣點 數(shù)目需通過如下公式計算得來： NL= √175。 A NL：最少采樣點數(shù)目（四舍五入取整） A：潔凈區(qū)的面積，以 m2 計 (單向流時，該面積可視為氣流截面的面積 ) 具體數(shù)值見下表： 潔凈區(qū)面積／ m2 采樣點數(shù)目 ＜ 10 13 1020 34 2040 46 40100 610 100200 1014 200400 1420 4001000 2032 10002020 3245 2020 45 采樣量的設置 ? 關于采樣量的設置，通過如下公式計算得來： VS =20/ Cn， m 1000。 VS： 每個采樣點每次的最少采樣量，單位為升。 Cn， m ：采樣點區(qū)域潔凈級別的塵埃粒子限度值 (個 /m3)。 另外，采樣量的設置還需滿足以下三個條件： —— 采樣量要足夠大，保證能檢測出至少 20 個粒子； —— 每個采樣點每次的最少采樣量至少為 2 升； —— 采樣時間最少為 1 分鐘。 ? A 級、 B 級采樣量每個點不少于 1000L。實際每個點采樣量為 35min1次。 ? C 級、 D 級采樣量每個點 V≥20/C1000， V 指的是單個點的最小采樣量， C 指的是相對應級別最 大粒子的限度。實際每個點采樣量為 C 級、 D 級 1min3 次。 對應各潔凈級別的至少采樣量為： 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 17 頁 共 91 頁 潔凈級別 至少采樣量（ L） ≥ m ≥ 5μ m B(靜態(tài) ) 690L B( 動態(tài) )/ C(靜態(tài) ) 2L C( 動態(tài) )/ D(靜態(tài) ) 2L 2L 備注：關于 A 級潔凈區(qū)，中國新版 GMP 明確規(guī)定“每個采樣點的采樣量不得少于 1m3”。 采樣點的布置 ? 采樣點一般在離地面 高度的水平面上均勻布置。 ? 采樣點多于 5點時，也可以在離地面 — 高度的區(qū)域內(nèi)分層布置，但每層不少于 5 點。 ? 采樣點的布置還可根據(jù)需要在生產(chǎn)及工藝關鍵操作區(qū)增加采樣點。 ? 采樣注意事項 采樣管口宜向上。布置采樣點時，應避開回風口。采樣時，測試人員應在采樣口的下風側。 結果計算 ? 采樣點的平均粒子濃度 N CCCA n????? 21 式中： A——— 某一采樣點的平均粒子濃度，粒 /m3； Ci——— 某一采樣點的粒子濃度（ i=1， 2，?， n），粒 /m3； N——— 某一采樣點上的采樣次數(shù)，次。 平均值的均值 L AAAM L????? 21 式中： M——— 平均值的均值，即潔凈室（區(qū)）的平均粒子濃度，粒 /m3； Ai——— 某一采樣點的平均粒子濃度（ i=1， 2，?， L），粒 /m3； L——— 某一潔凈室（區(qū)）內(nèi)的總采樣點數(shù)，個。 ? 計算采樣點平均值的標準偏差 (S) S=√175。 [（ MA1） 2 +(MA2)2 +? ]/（ L1），粒 /m3 計算 95%置信上限 (UCL) 95%置信上限 (UCL)=M+ (S/√175。 L) ，粒 /m3 L：采樣點的總數(shù) 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 18 頁 共 91 頁 t0。 95： 95%置信上限的 t 分布系數(shù)，見下表， L 2 3 4 5 6 7 8 9 9 t ??? 需要注意的是，當采樣點數(shù)只有 1 個或多于 9 個時，則不用計算 95%置信上限。 結果判斷 潔凈室達到規(guī)定的潔凈級別的判定條件： ? 各采樣點測得的粒子濃度平均值不超過相應潔凈級別規(guī)定的限度； ? 95%置信上限不超過相應潔凈級別規(guī)定的限度。 測定結果見附表 38。 房間浮游菌 的測試（靜態(tài)） 儀器： JYQⅡ 浮游菌采樣器（采樣流量 100L/min）。 浮游菌檢測培養(yǎng)皿的準備 培養(yǎng)皿的直徑為 90mm 15 mm 的凹碟，其中所使用的培養(yǎng)基為 大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（ TSA） 。 測試狀態(tài) ? 靜態(tài)測試。 測試報告中應標明測試時所采用的狀態(tài)和室內(nèi)測試人員數(shù)，室內(nèi)測試人員不得多于 2 人。 ? 測試時間 —— 靜態(tài)測試，空調(diào)凈化系統(tǒng)正常運行時間不少于 30min 后開始。 檢測程序 ? 儀器經(jīng)消毒后先不放入培養(yǎng)基平皿，開動儀器使真空 泵抽氣，使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時間不少于 5min。然后放入培養(yǎng)基平皿，蓋上蓋子后調(diào)節(jié)采集器。設定好需采集的升數(shù)和延遲的時間參數(shù)后，置采樣口于采樣點后（一般 A 級潔凈區(qū)，可在離藥物敞口處 30cm 處設測點），按 “YES”，儀器開始抽空氣采樣。 ? A 級、 B 級采樣量每個點不少于 1000L。每個點采樣量為 100L/min10min1 次。 ? C 級采樣量每個點 500L，每個點采樣量為 100L/min5min1 次。 ? D 級采樣量每個點 100L，每個點采樣量為 100L/min1min1 次。 ? 取樣點選取根據(jù)房間的面積， 具體參照 N≥ S ， N 表示取樣點的數(shù)量， S 表示檢測房間的面積。具體采樣點位置和數(shù)量見下表。 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 19 頁 共 91 頁 房間名稱 潔凈等級 面積（㎡） 取樣點數(shù)量（ N） D 級 3 D 級 3 D 級 2 D 級 4 D 級 7 2 D 級 1 D 級 3 D 級 3 D 級 9 D 級 3 D 級 7 D 級 4 D 級 4 D 級 2 D 級 2 D 級 7 D 級 1 D 級 3 D 級 6 D 級 3 D 級 6 D 級 6 D 級 1 D 級 1 D 級 3 D 級 2 D 級 7 D 級 4 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 20 頁 共 91 頁 D 級 4 D 級 2 D 級 2 D 級 62 7 D 級 4 D 級 6 D 級 14 3 D 級 6 D 級 6 D 級 1 D 級 1 D 級 9 D 級 1 D 級 63 7 D 級 1 D 級 57 7 ? 培養(yǎng) —— 全部采樣結束后，將培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 —— 在 30～ 35℃培養(yǎng)，時間不少于 2天。 —— 每批培養(yǎng)基應有對照試驗，檢查培養(yǎng)基本身是否污染，可每批選定 3只培養(yǎng)皿作對照培養(yǎng)。 ? 菌落計數(shù) —— 用肉眼直接計數(shù)，然后用 5～ 10 倍放大鏡檢查，是否有遺漏。 —— 若培養(yǎng)皿上有 2 個或 2 個以上菌落重疊，可分辨時仍以 2個或 2 個以上的菌落計數(shù) ? 注意事項 —— 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。 —— 采取一切措施防止人為對樣本的污染。 —— 對培養(yǎng)基、培養(yǎng)條件及其他參數(shù)作詳細的記錄。 —— 由于細菌種類繁多，差別甚大，計數(shù)時一般用透射光于培養(yǎng)皿背面或正面仔細觀察，湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 21 頁 共 91 頁 不要漏計培養(yǎng)皿邊緣生長的菌落，必要時用顯微鏡鑒別。 —— 采樣前應仔細檢查每個培養(yǎng)皿的質量，如發(fā)現(xiàn)變質、破損或污染的應剔除。 ? 采樣點數(shù)量及其布置 —— 最少采樣點數(shù)如下表 最少采樣點數(shù)目： 面積（㎡） 潔凈度級別 A 、 B級 C 級 D 級 10 23 2 2 ≥ 1020 4 2 2 ≥ 2040 8 2 2 ≥ 40100 16 4 2 ≥ 100200 40 10 3 注：表中的面積，對于單向流潔凈室，指的是送風面積，對于非單向流潔凈室，指的是房間面積。 ? 采樣點的位置 —— 工作區(qū)測點位置離地 m左右（略高于工作面）； —— 送風口測點位置離開送風面 30ｃｍ 左右； —— 可在關鍵設備或關鍵工作活動范圍處增加測點。 采樣點布置的規(guī)則見下圖（圖 7）。 圖 7 平 面 采 樣 點 布 置 圖 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 22 頁 共 91 頁 ? 最小采樣量 浮游菌每次最小采樣量見下表。 最小采 樣量： 潔凈度級別 采樣量（ L／ 次） A、 B 級 1000 C 級 500 D 級 100 ? 采樣注意事項 —— 對于單向流潔凈室或送風口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室，采樣口向上； —— 布置采樣點時，至少應盡量避開塵埃較集中的回風口； —— 采樣時，測試人員應站在采樣口的下風側，并盡量少走動； —— 應采取一切措施防止采樣過程的污染和其他可能對樣本的污染； —— 培養(yǎng)皿在用于檢測時，為避免培養(yǎng)皿運輸或搬動過程造成的影響，宜同時進行陰性對照試驗，每次或每個區(qū)域取 1 個對照皿，與采樣皿同法操作， 但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿（ TSA）一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結果應無菌落生長。 ? 記錄 測試報告應包含以下內(nèi)容： —— 測試者的名稱和地址、測試日期； —— 測試依據(jù)； —— 被測潔凈區(qū)的平面位置； —— 有關測試儀器及其測試方法的描述：包括測試環(huán)境條件，采樣點數(shù)目以及布置圖，測試次數(shù)，采樣流量，還應記錄現(xiàn)場操作人員數(shù)量及位置，現(xiàn)場運轉設備和數(shù)量、位置。 ? 結果計算 —— 用計數(shù)方法得出各個培養(yǎng)皿的菌落數(shù)。 —— 每個測點的浮游菌平均濃度的計算，見下式： 浮游菌平均濃度（個 ／ｍ 3） ＝ 菌落數(shù) ／采樣量 測定結果見附件 39。 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 23 頁 共 91 頁 房間沉降菌的測試（靜態(tài)） 測試方法 本測試方法利用沉降法，即通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養(yǎng)基平皿，經(jīng)若干時間，在適宜的條件下讓其繁殖到可見的菌落數(shù)，以平板培養(yǎng)皿中的菌落數(shù)來評定潔凈環(huán)境內(nèi)的活微生物數(shù)，并以此來評定潔凈區(qū)的潔凈度。 使用的儀器和設備 ? 高壓消毒鍋：使用時應嚴格按照操作規(guī)程進行。 ? 恒溫培養(yǎng)箱：必須定期對培養(yǎng)箱的溫度計進行檢定。 培養(yǎng)皿 ? 一般采用φ 90mm 15mm 硼硅酸玻璃培養(yǎng)皿。 ? 使用前將培養(yǎng)皿置于 121℃濕熱滅菌 30min。 培養(yǎng)基：大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（ TSA）。 ? 將培養(yǎng)基加熱熔化，冷卻至約 45℃在無菌操作條件下將培養(yǎng)基注入培養(yǎng)皿，每皿約15ml。 ? 待瓊脂培養(yǎng)基凝固后，將培養(yǎng)基平皿放入 30～ 35℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng) 48 小時，若培養(yǎng)基平皿上確無菌落生長，即可供采樣用，制備好的培養(yǎng)基平皿應在 2～ 8℃的環(huán)境中存放。 測試步驟 ? 采樣方法：將已制備好的培養(yǎng)皿放置在預先確定取樣點，打開培養(yǎng)皿蓋，使培養(yǎng)基表面暴露 ，再將培養(yǎng)皿蓋上蓋后倒置。 ? 培養(yǎng) —— 全部采樣結束，將 培養(yǎng)皿倒置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 —— 在 30～ 35℃培養(yǎng)，時間不少于 2天。 —— 每批培養(yǎng)基應有對照試驗，可每區(qū)域選定 3只培養(yǎng)皿作對照試驗，與采樣皿同時操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養(yǎng)皿一起放入培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，結果應無菌落生長。 ? 菌落計數(shù) —— 用肉眼直接計數(shù)，然后用 5～ 10 倍放大鏡檢查，是否有遺漏。 —— 若培養(yǎng)皿上有 2 個或 2 個以上菌落重疊，可分辨時仍以 2個或 2 個以上的菌落計數(shù)。 ? 注意事項 —— 測試用具要做滅菌處理，以確保測試的可靠性、正確性。 —— 采取一切措施防止人為對樣本的污染。 湖北明和 藥業(yè)有限公司 固體 制劑車間 廠房設施 、 KS1空調(diào)凈化系統(tǒng) 再 驗證方案 第 24 頁 共 9