酸性磷酸酶的ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 20:20 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 物） （ 沉淀 ACP） 緩慢攪拌 緩慢攪拌 4000rpm， 10min離心 約 1/3上清液 III蒸餾水，溶解，洗滌 （溶解 ACP， 沉淀雜蛋白） 4000rpm， 10min離心 上清液 IV 沉淀 （酶粗提物） （ 沉淀 ACP） EDTA9ml，飽和硫酸銨10ml /100ml上清液 IV，2倍體積預(yù)冷甲醇 沉 淀 （酶純化物） 4000rpm， 10min離心 蒸餾水溶解，洗滌 上清液 V （酶液） 緩慢攪拌 上清液中蛋白質(zhì)含量測(cè)定 原理：染料結(jié)合比色法 —— CBBG250，?max=595nm； 步驟：標(biāo)準(zhǔn)曲線制作 各上清液中總蛋白測(cè)定（做平行管，進(jìn) 行重復(fù)實(shí)驗(yàn)，減少隨機(jī)誤差。 二、 ACP的比活性分析 上清液中 ACP活性測(cè)定 酚 4AAP顯色法 :以磷酸苯二鈉為底物，由ACP催化生成苯酚，在堿性條件下苯酚與 4AAP縮合最終生成紅色醌類化合物， ?max = 510 nm； 注意：顯色過(guò)程中兩種緩沖液： 檸檬酸緩沖液 ： ，提供 ACP反應(yīng)條件 碳酸鹽緩沖液 ： ，提供成色反應(yīng)條件 上清液中 ACP比活性分析 ACP活性單位定義：每分鐘每毫升酶液產(chǎn)生1nmol酚即 nmol/min183
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