酶的定向催化ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-01 20:18 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 創(chuàng)造新基因，并賦予表達(dá)產(chǎn)物以新功能。 ? 分子育種。 （ a)單個(gè)基因的 DNA改組 ? 從突變體基因庫(kù)中分離出來(lái)的DNA片段用脫氧核糖核酸酶 I隨機(jī)切割得到的隨機(jī)片段經(jīng)過不加引物的多次 PCR循環(huán)。 ? 在 PCR循環(huán)過程中，隨機(jī)片段之間互為模板和引物進(jìn)行擴(kuò)增，直到獲得全長(zhǎng)的基因，這導(dǎo)致來(lái)自不同基因片段之間的重組。 DNA改組與常規(guī)定向進(jìn)化的比較 （ b) 基因家族改組技術(shù) (family shuffling) (c ) DNA改組原理 1. DNaseI 產(chǎn)生隨機(jī)片段； 2. 隨機(jī)片段變性； 3. 隨機(jī)片段復(fù)性； 4. 延伸 反復(fù)重復(fù) 步后，可獲得全長(zhǎng) DNA 片段 24。 （ d）隨機(jī)引物體外重組法 (RPR) ? 單鏈 DNA為模板，隨機(jī)序列引物 PCR， DNA小片段互為模板擴(kuò)增獲得重新排布的突變基因 （ e）交錯(cuò)延伸原理 ? 采用基因家族的改組效果明顯高于單個(gè)基因的改組效果。 ? 特點(diǎn)： 改組基因的效率高；提高基因突變機(jī)率。 五、基因文庫(kù)的構(gòu)建 構(gòu)建理想的基因文庫(kù)要考慮的因素 （ 1）基因文庫(kù)的質(zhì)量 ? (a) 文庫(kù)的代表性（包容性） ? (b) 突變基因片段的序列完整性 （ 2）文庫(kù)篩選可選擇的方法 ? 控制突變庫(kù)的大小與特定的篩選容量相適應(yīng) 突變體基因的構(gòu)建策略 ? DNA隨機(jī)酶切片段拼接 ? 單鏈 DNA隨機(jī)拼接（提高不同親代基因的同源片段重組形成嵌合體基因的效率） ? 限制性酶切片段隨機(jī)拼接（防止 PCR擴(kuò)增產(chǎn)生相同的親
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