酶的定向催化ppt課件-wenkub.com
2025-01-02 20:18 本頁(yè)面
【正文】 （ 4） pH指示劑顯色高通量篩選 （ 5）產(chǎn)物顯色篩選 ? 巨大芽孢桿菌 P450BM3，最適底物為 C12C18的脂肪酸，對(duì)短鏈烷烴羥化活力較低兩輪易錯(cuò)PCR，最佳突變酶的比活提高了 5倍 Adv. Synth. Catal., 2022, 343: 601606 （ 6）熒光產(chǎn)物篩選 通過(guò)定向進(jìn)化，將 P450cam的萘羥化活力提高 20倍野生型酶以 O2為氧化劑，需要 NADPH，而突變酶以 H2O2為氧化劑，無(wú)須輔酶。 高通量篩選技術(shù) （ 1）突變微生物分離 瓊脂板涂布法在特殊條件下培養(yǎng)突變菌，通過(guò)宿主菌的生長(zhǎng)情況、培養(yǎng)基顏色、特定反應(yīng)的出現(xiàn)等判斷是否具有目的基因。 ? （ 2）質(zhì)粒載體系統(tǒng) ? 載體選擇 ? 基因重組 ? 組裝突變基因文庫(kù)。 DNA改組與常規(guī)定向進(jìn)化的比較 （ b) 基因家族改組技術(shù) (family shuffling) (c ) DNA改組原理 1. DNaseI 產(chǎn)生隨機(jī)片段； 2. 隨機(jī)片段變性； 3. 隨機(jī)片段復(fù)性； 4. 延伸 反復(fù)重復(fù) 步后，可獲得全長(zhǎng) DNA 片段 24。 ? 通過(guò)改變單個(gè)基因（或基因家族）原有的核苷酸序列，創(chuàng)造新基因，并賦予表達(dá)產(chǎn)物以新功能。 ? 不足之處： ? 靶序列長(zhǎng)度一般在 ，應(yīng)用范圍有限； ? 中性突變較多；且較為耗時(shí)、費(fèi)力 ? 獲得的 DNA序列中堿基的轉(zhuǎn)換高于顛換。 定向進(jìn)化 =隨機(jī)突變 +正向重組 +選擇（或篩選） 定向進(jìn)化的過(guò)程 ? （ 1）
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