酶蛋白的結(jié)構(gòu)ppt課件-wenkub.com
2025-01-02 20:21 本頁面
【正文】 ? 又因?yàn)?His+Glu+Val（ +電荷 ） 故 Glu應(yīng)為 Gln 所以原順序應(yīng)為 AspAlaTyrGluLysHisGlnVal ? 又因?yàn)?（ 1） Asp+Ala+Tyr（ ） 得 Asp為 Asn ? （ 2） Lys+His+2Glu+Val（ +電荷 ） 得 2Glu中只有一個 Glu， 而另一個應(yīng)為 Gln ? 最終結(jié)果為 AsnAlaTyrGluLysHisGlnVal ? 例 3 答案： AlaArgSerLysPheMetTrySerPro ? 解法：（ 2）說明 N末端為 Ala；（ 3）（ 4）說明 Pro要么在 C末端要么在 C末端第二；（ 5）說明溴化氰專一水解 Met的羧基所形成的鍵，故應(yīng)將肽分解成兩段，由于 Ala在 N末端故有 Ala（） （） （） （） Met（） （） （）；（ 6）說明胰凝乳蛋白酶水解芳香族氨基酸羧基所形成的鍵，且芳香族氨基酸羧基連接是Pro的不能水解，故有 Ala（） （） （） PheMetTrySerPro；（ 7）說明胰酶水解堿性氨基酸羧基所形成的鍵，故有 AlaArgSerLysPheMetTrySerPro。 ? 故 Pro為 C末端第二 。 ? 經(jīng)胰凝乳蛋白酶得 （ 1） Asp+Ala+Tyr（ ） ? （ 2） Lys+His+2Glu+Val（ +電荷 ） ? 求順序 。 目前人們對蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究都是借助于一些輻射方法 ， 常見的包括 X射線衍射法 、核磁共振 、 熒光光譜法 、 旋光色散 、 圓二色性 、 拉曼光譜 、 掃描隧道顯微技術(shù) 、 原子力顯微技術(shù) ， 等等 。 探針在水中 ， 熒光很??；在非極性中增大 。 ? 用熒光光譜法可研究蛋白質(zhì)分子的構(gòu)象變化 、 酶活性部位結(jié)構(gòu) 、Try和 Tyr殘基的微環(huán)境 、 蛋白質(zhì)變性 。 極性變化對 λ， ε影響大 ， 氨基酸一定在表面 。 溶液中構(gòu)象的測定 ? a) 紫外吸收法 （ 常用方法 ） ： Try， Tyr， Phe在紫外波長范圍有最大光吸收 ， 產(chǎn)生紫外吸收光譜 。 ? 缺點(diǎn)：只能測晶體 ， 不能測溶液 。 時 ， 蛋白質(zhì)分子成平行的b片層 ? φ= 139176。 第二節(jié) 蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)的研究方法 ? 二級結(jié)構(gòu)： a螺旋 （ ahelix) ； b片層 (βsheet) ； b轉(zhuǎn)角 (βturn) ； 無規(guī)卷曲 (random) ? 維持鍵：氫鍵 、 疏水鍵 、 范德華力 、 離子鍵 、 配位鍵等 ? R基團(tuán)對 a螺旋的影響： a) 構(gòu)成 a螺旋要求 R不太大 ， 不帶電荷 b） 幾個相連的氨基酸的 R帶同種電荷 ， 不形成 a螺旋 c） R帶電荷但間斷 ， 可形成 a螺旋 ? *φ= 57176。 ， 在相同條件下進(jìn)行第二個方向上的電泳 。 ? 9. 多肽鏈中二硫鍵位置的確定 ? 對于含有二硫鍵的蛋白質(zhì) ， 我們在分析多肽鏈氨基酸順序前先將其拆開 ， 然而在測定完多肽鏈氨基酸順序后需要確定鏈內(nèi)和鏈間二硫鍵的位置 ， 常用的方法是 對角線電泳法 。 多肽鏈的氨基酸順序 ? 至此 ， 已經(jīng)得出了多肽鏈被斷裂成的各個肽段的氨基酸順序 ， 但由于沒有這些肽段在多肽鏈中次序的信息 ，還是無法排出整個多肽鏈的氨基酸順序 。 ? 分離肽鏈可用：分子篩；離子交換；等點(diǎn)聚焦 （ 電泳法 ） 7. 測定各個肽段的氨基酸順序 ? 測定肽段的氨基酸順序的方法有： Edman降解法 、 酶解法 、 氣相色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法等 ， 其中最常使用的是Edman降解法 。 所以人們 首先需將肽鏈進(jìn)行適當(dāng)?shù)姆纸?， 將其斷裂成若干長度合適的肽段 ， 再分別測定這些肽段的氨基酸順序 。 不過這是理想的情況 ， 實(shí)際測定中常常有多種因素干擾 ， 很難確定 C末端多個氨基酸的排列順序 。 ? 1） 肼解法 ?原理： ? b） 分離檢測： ?苯甲醛 +酰肼 → 沉淀 → 離心 ?上清液中含游離基酸 ? 2) 還原法 ?用還原劑如硼氫化鋰處理肽鏈 ， 則 C末端殘基的 α羧基
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