【文章內(nèi)容簡介】 鑒別培養(yǎng)基中，置于３７℃恒溫箱；培養(yǎng)１８～２４小 時。 五、生化試驗及血清學檢驗 １．沙門氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基中，如不發(fā)酵乳糖，葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣或只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，一般產(chǎn)生硫化氫。有動力者，先與沙門氏菌Ａ～Ｆ群Ｏ多價血清作玻璃片凝集，凡與多價Ｏ血清凝集者，再與Ｏ因子血清凝集，以確定其所屬群別，然后用Ｈ因子血清，確定血清型。雙相菌株應證實兩相的Ｈ抗原，有Ｖｉ抗原的菌型（傷寒和丙型副傷寒沙門氏菌）應用Ｖｉ因子血清檢查。 生化試驗：應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖、蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。沙門氏菌屬中除傷寒沙門氏菌和雞沙門氏菌不產(chǎn)氣外，通常發(fā)酵葡萄糖 、產(chǎn)氣、均發(fā)酵甘露醇和麥芽糖（但豬傷寒沙門氏菌、雛沙門氏菌不發(fā)酵麥芽糖），不分解乳糖、蔗糖，尿素酶和靛基質(zhì)為陰性，通常產(chǎn)生硫代氫。除雞、雛沙門氏菌和傷寒沙門氏菌的Ｏ型菌株無動力外，通常均有動力。 如遇多價Ｏ血清不凝集而一般生化反應符合上述情況時，可加做側(cè)金盞花醇、水楊素和氰化鉀試驗，沙門氏菌均為陰性。 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 11 頁 共 26 頁 ２．志賀氏菌屬：在三糖鐵培養(yǎng)基上，葡萄糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，無動力，不產(chǎn)生硫化氫，上層斜面乳糖不分解。 生化試驗：應進行葡萄糖、甘露醇、麥芽糖、乳糖，蔗糖、靛基質(zhì)、硫化氫、動力、尿素試驗。志賀氏菌屬能分解葡萄糖，但不 產(chǎn)氣（福氏志賀氏菌６型有時產(chǎn)生少量氣體），一般不能分解乳糖及蔗糖，宋內(nèi)氏志賀氏菌對乳糖及蔗糖遲緩發(fā)酵產(chǎn)酸。志賀氏菌屬均不產(chǎn)生硫化氫，不分解尿素，無動力。對甘露醇、麥芽糖的發(fā)酵及靛基質(zhì)的產(chǎn)生，則因菌株不同而異。 如遇多價血清玻璃片凝集試驗為陰性，而生化反應符合上述情況時，可加做肌醇、水楊素、Ｖ — Ｐ、枸櫞酸鹽、氰化鉀等試驗。志賀氏菌屬均為陰性反應。 血清學檢查：志賀氏菌屬分為４個群，先與多價血清作玻璃片凝集試驗，如為陽性，再分別與Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ群血清凝集，并進一步與分型血清做玻璃片凝集，最后確定其血清型。 乙、 污泥 一、樣品處理 用滅菌匙稱取污泥３０克，放入滅菌容器內(nèi)，加入３００毫升滅菌水，充分混勻制成１∶１０混懸液。 二、增菌培養(yǎng) １．沙門氏菌屬：吸取上述１∶１０混懸液１００毫升，加于１００毫升雙料亞硒酸鹽（ＳＦ）增菌液內(nèi)，也可加于亞硒酸鹽甘露醇（ＳＦＭ）或氯化鎂孔雀綠（ＭＭ）增菌液內(nèi)。置于３７℃或４１℃恒溫箱，培養(yǎng)２４小時。 ２．志賀氏菌屬：吸取上述１∶１０混懸液１００毫升，加于雙料革蘭氏陰性（ＧＮ）１００毫升增菌液內(nèi)。置于３７℃恒溫箱，培養(yǎng)６小時。 三、平板分離、挑選菌落、生化試驗及血清學檢查均與污水樣品檢 驗方法相同。 四污泥糞大腸菌值的檢驗方法 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 12 頁 共 26 頁 一、初發(fā)酵試驗：按圖１所示將污泥稀釋，分別將污泥樣品接種于裝有１０毫升乳糖膽鹽培養(yǎng)液的內(nèi)有倒管的試管中。再將已接種的四支試管置于４４℃恒溫箱，培養(yǎng)２４小時。 二、平板分離：經(jīng)培養(yǎng)２４小時后產(chǎn)酸產(chǎn)氣及只產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的發(fā)酵管，分別劃線接種于伊紅美蘭培養(yǎng)基或品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上。置于３７℃恒溫箱培養(yǎng)１８～２４小時。挑選符合下列特征菌落的一小部分。進行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。 １．伊紅美蘭培養(yǎng)基上的菌落色澤； （１）深紫黑色，具有金屬光澤的菌落； （２）紫黑色，不帶或略帶金屬 光澤的菌落； （３）淡紫紅色，中心色較深的菌落； ２．品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基上的菌落色澤； （１）紫紅色，具有金屬光澤的菌落； （２）深紅色，不帶或略帶金屬光澤菌落； （３）淡紅色，中心色較深的菌落。 三、復發(fā)酵試驗：上述涂片鏡檢的菌落如為革蘭氏陰性無芽孢桿菌，則挑取該菌落的另一部分再接種于內(nèi)有倒管的乳糖發(fā)酵管中每管可接種分離自同一初發(fā)酵管的最典型的菌落１～３個。置于４４℃恒溫箱培養(yǎng)２４小時。有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者即證實有糞大腸菌群存在。按陽性管數(shù)查糞大腸菌值檢索表（附表１．２）即得出每升（１０００克）糞大腸菌值。例如接 種污泥量１克發(fā)酵管陽性（＋），０．１毫升發(fā)酵管陰性（－），０．０１毫升為陽性（＋），０．００１毫升為陰性（－）查附表１．２，當陽性，陰性管數(shù)為＋－＋－時，糞大腸菌值為０．１。 五污泥蛔蟲卵的檢驗方法 一、污泥樣品的采集： 先把泥堆盡量劃為四等份，而后在每份的中間，用鐵鍬或小鏟各采污泥約５００ 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 13 頁 共 26 頁 克。同時，在堆泥的中間也采５００克，一并放在塑料桶或搪瓷桶中。攪拌均勻，并挑去固體夾雜物，再從中取出５００克置于塑料袋或其他容器中，帶回實驗室。 二、污泥樣品的處理： 將現(xiàn)場帶回的樣品，倒于燒杯中，如遇樣品稍干且有結(jié)塊時 ，可將其倒于搪瓷盤中，再行攪拌，同時用大鑷子，一面攪拌，一面將硬塊夾碎，去掉肉眼能看出的夾雜物，如腐爛的布條、草梗、小石塊等。然后，將樣品裝入廣口瓶中，貼上標簽，標明樣品號碼、醫(yī)院名稱、采樣日期和處理前或處理后的情況等。 三、污泥樣品的檢驗 上述樣品處理后，應立即進行檢驗，不能立即進行檢驗時，可適當加入約５ — １０毫升３～５％福爾馬林溶液或３％鹽酸溶液，瓶口上放置一個適宜大小的表面皿。然后放于冰箱內(nèi)，以防微生物的繁殖和抑制蛔蟲卵的發(fā)育。 １．水洗 從已經(jīng)處理過的５００克污泥樣品中，稱取１００克置于５００毫升錐 形量杯中，加水約５００毫升。用玻璃棒攪拌后靜置之。讓其自然沉淀，經(jīng)１～２小時后，倒去污泥上面的水，另換清水攪拌后，再讓其自然沉淀，經(jīng)半小時后，再倒去上面的水，另加清水，如此反復進行３～４次，直到污泥上面的水接近無色為止。 ２．過濾 倒去沉淀上面的清水，用６０孔燉口寸金屬篩子過濾于另一５００毫升錐形量杯中，棄去阻留在篩上的泥渣。沉淀２０～３０分鐘后，倒去沉淀上面的液體、另加清水，如此反復水洗２～３次，最后倒去上清液，將沉淀物倒入１０毫升離心管中。經(jīng)２５００轉(zhuǎn) /分離心３分鐘后，倒去上清液。 ３．離心飄浮 管內(nèi)注 入飽和食鹽水，經(jīng)用玻璃棒攪勻后，離心３分鐘，由于蛔蟲卵比飽和鹽水 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 14 頁 共 26 頁 的比重小，所以管中絕大多數(shù)的蛔蟲卵均浮聚在液面。（注意：加入食鹽水量不得少于沉淀物的２０倍）。 ４．離心沉淀 用毛細吸管反復吸取管中斜面上的浮膜于另一離心管中。加入清水，經(jīng)攪勻后，再行離心，蟲卵比水的比重大，因而下沉于管底。然后小心倒去上清液。 ５．培養(yǎng) 注入２～３毫升清水于管中，加幾滴５％福爾馬林溶液，置于２４～２６℃恒溫箱中，培養(yǎng)１５～２０天。在培養(yǎng)過程中，清水不得少于０．５～１．０毫升。 ６．鏡檢 樣品經(jīng)培養(yǎng)１５～２０天后取出。用毛細吸管 吸去上面的清水，余下含蟲卵的沉淀物。在一張干凈的載玻片的中央滴一滴清水。用毛細吸管吸一小滴沉淀物于水中。涂勻后蓋以蓋玻片，在低倍鏡下檢查，必要時，再換以高倍鏡。記錄５００個以上死、活蟲卵數(shù)。 查完一張片子而卵數(shù)不及５００個時，依同法作第二張涂片檢查。涂片不宜太厚。否則視野模糊不清，影響觀察。一般涂片厚度能以透過涂片尚能辯認報紙上的字跡為宜。而后在適宜的溫度和濕度下。經(jīng)過１５～２０天的培育