【正文】 殼逐漸溶解，使卵內(nèi)的幼蟲一目了然。如遇沉淀物中渣子較多卵數(shù)較少時，可以直接注入幾滴此脫殼液于離心管中，與沉淀物混合并攪勻之，而后吸一滴混合液于載玻片上，蓋以蓋玻片，直接鏡檢即可。 在培養(yǎng)第１５～２０天未查見幼蟲時，應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)到３０天（注意：加過脫殼液的樣品，不能再繼續(xù)培養(yǎng)）。如此檢驗的全過程已告結(jié)束，可從冰箱中取出剩余的樣品，處理之。 １．濾膜集菌法：采用經(jīng)煮沸消毒的醋酸纖維膜（孔徑０．３～０．７微米）和特制的金屬濾器，安裝嚴(yán)密后抽濾，污水樣５００毫升，根據(jù)懸浮物的多少：一份水樣需更換數(shù)張濾膜，將同一份水樣濾膜集中于小燒杯內(nèi)，用４％硫酸溶液反復(fù)沖洗，處置３０分鐘后，收集洗液于離心管中，３０００轉(zhuǎn)３０分鐘離心，棄去上清液，沉淀物中加１ 毫升滅菌生理鹽水混合均勻后，供接種用。 二、接種： 上述集菌液全部接種于改良羅氏培養(yǎng)基或接種于小川氏培基上，每支培養(yǎng)管接種０．１毫升。 分離菌株羅氏培養(yǎng)基上呈淡黃色或無色，粗糙型菌落；作抗酸染色，陽性者作分離傳代。 四、致病力試驗 耐熱觸酶反應(yīng)陰性，２８℃不生長之菌落為可疑結(jié)核桿菌。其耐熱觸酶試驗方法如下： （一）材料 １．ｐＨ＝７．０磷酸緩沖液（Ｍ /１５） ２．１０％吐溫（ＴＷｅｅｎ）８０水溶液加等量３０％Ｈ ２ Ｏ ２ 。 ２．置６８℃水浴中２０分鐘。 （三）結(jié)果 發(fā)生氣泡為陽性，３０分鐘不產(chǎn)生氣泡者為陰性。 人型、牛型結(jié)核桿菌在２８℃培養(yǎng)不生長，胃分枝桿菌和海魚分枝桿菌在２８℃培養(yǎng)能生長。取下濾膜，用４％硫酸３毫升，充分振搖 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 17 頁 共 26 頁 沖洗３０分鐘。 二、集菌： １．濾膜集菌法：取污泥１０克，加１００毫升蒸餾水，混搖均勻，成為１∶１０混懸液。 ２．離心集菌法：取上述１∶１０混懸液，分裝于滅菌離心管中，３０００轉(zhuǎn)燉分，３０分鐘離心，操作步驟同污水。 七培養(yǎng)基的制備 — 、 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 １．成分： 蛋白胨１０克 牛肉膏３克 乳糖５克 氯化鈉５克 １．６％溴甲酚紫乙醇溶液１毫升 蒸餾水１０００毫升 ２．制法： （１）將蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化鈉加熱溶解于１０００毫升蒸餾水中，調(diào)整ｐＨ為７．２～７．４。 （３）置于高壓蒸氣滅菌器中，以１１５℃滅菌２０分鐘。 二、三倍濃縮乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 按上述“乳糖蛋白胨培養(yǎng)液”濃縮３倍配制 三、品紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基 １．成分： 蛋白胨１０克 乳糖１０克 磷酸氫二鉀（Ｋ２ＨＰＯ４）３．５克 瓊脂２０～３０克 蒸餾水１０００毫升 無水亞硫酸鈉５克左右 ５％堿性品紅乙醇溶液２０毫升 ２．儲備培養(yǎng)基的制備： （１）先將瓊脂加到９００毫升蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使溶解，再以蒸餾水補足至１０００毫升，調(diào)整ｐＨ為７．２～７．４。 （３）貯存于冷暗處備用。 （２）根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容量，用滅菌吸管按比例吸取一定量的５％堿性品紅乙醇溶液，置于滅菌空試管中。按比例稱取所需要的無水亞硫酸鈉，置于滅菌空試管內(nèi)，加滅菌水少許，使溶解，再置于水浴中煮沸１０分鐘。 （５）將此亞硫酸鈉與堿性品紅的混合液全部加于已融化的儲備培養(yǎng)基內(nèi)，并充分混勻（防止產(chǎn)生氣泡）。此種已制成 的培養(yǎng)基于冰箱內(nèi)保存亦不宜超過二周。 四、伊紅美蘭培養(yǎng)基 １．成分： 蛋白胨１０克 乳糖１０克 磷酸氫二鉀２克 瓊脂２０～３０克 蒸餾水１０００毫升 ２％伊紅水溶液２０毫升 ０．５％美蘭水溶液１３毫升 ２．儲備培養(yǎng)基的制備 （１）先將瓊脂加至９００毫升蒸餾水中，加熱溶解，然后加入磷酸氫二鉀及蛋白胨，混勻使溶解，再以蒸餾水補足至１０００毫升，調(diào)正ｐＨ為７．２～７．４。 （３）貯存于冷暗處備用。 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 20 頁 共 26 頁 （２）根據(jù)燒瓶內(nèi)培養(yǎng)基的容量，用滅菌吸管按比例分別取一定量已滅菌的２％伊紅水溶液及一定量已滅菌的０．５％美蘭水溶液加入已融化的儲備瓊脂內(nèi)，并充分混勻（防止產(chǎn)生氣泡）。 五、亞硒酸鹽（ＳＦ）增菌液 １．成分： 胰蛋白胨（或多價胨）５克 磷酸氫二鈉（Ｎａ２ＨＰＯ４）１６克 磷酸二氫鈉（ＮａＨ２ＰＯ４）２．５克 乳糖４克 亞硒酸氫鈉４克 蒸餾水５００毫升 ２．制法： （１）除亞硒酸氫鈉外，將以上各成分放于蒸餾水中，加熱溶化。 （３）分裝于阿諾氏器中滅菌１５分鐘備用。 七、氯化鎂孔雀綠（ＭＭ）增菌液 １．成分： 甲液： 胰蛋白胨（或 多價胨）５克 氯化鈉８克 磷酸二氫鉀（ＫＨ２ＰＯ４）１．６克 蒸餾水１０００毫升 乙液： 氯化鎂（ＭｇＣｌ２ 八、革蘭氏陰性（ＧＮ）增菌液 １．成分： 胰蛋白陳（或多價胨）２０克 葡萄糖１克 甘露醇２克 枸櫞酸鈉５克 中國最龐大的下資料庫 (整理 . 版權(quán)歸原作者所有 ) 第 22 頁 共 26 頁 去氧膽酸鈉０．５克 磷酸氫二鉀（Ｋ２ＨＰＯ４）４克 磷酸二氫鉀（ＫＨ２ＰＯ４）１．５克 氯化鈉５克 蒸餾水１０００毫 升 ２．制法： （１）將以上各成分加入蒸餾水中溶化，用磷酸氫二鉀調(diào)整ｐＨ至７．０，煮沸過濾，高壓１１５℃滅菌２０分鐘。 雙料ＧＮ增菌液配制：除蒸餾水改為５００毫升外，其他成分不變?？稍偌樱薄埠辽龤溲趸c液（不同牌號的酸性復(fù)紅，其色素含量相差很大）。 ３．制法 將培養(yǎng)基的ｐＨ調(diào)整至７．４煮沸不完全溶解，然后加入溶液甲與溶液乙各２０毫升，重新調(diào)整ｐＨ至７．５，加入０．４％溴麝香草酚蘭（ＢＥＢ）乙醇溶液１６毫升和安示指示劑２０毫升，此培養(yǎng) 基不需高壓滅菌，經(jīng)煮沸滅菌后即可傾注平板備用。另取枸櫞酸鉍銨２克加入２０毫升水中，使之溶解再將二者混合加熱煮沸３分鐘即成乳白色冷卻備用。溶化后加入瓊脂溶解，再加入硫酸鐵混勻，冷 卻至６０℃。 十二、乳糖 — 膽鹽培養(yǎng)基 １．成分： 乳糖５克 膽白胨２０克 豬膽鹽（或牛膽鹽）５克 １．６％溴甲酚紫酒精溶液０．６毫升蒸餾水１０００毫升 ２．制法： 將蛋白胨，膽鹽及乳糖溶于水中，調(diào)剪ｐＨ至７．４，加入指示劑，分裝于試管，每管１０毫升，并放一個小倒管高壓１１５℃１５分鐘。 十三 、改良羅氏培養(yǎng)基 １．成分： 磷酸二氫鉀２．４克 硫酸鎂０．２４克 枸櫞酸鎂０．６克 味精１．２克 甘油１２毫升 淀粉３０克 蒸餾水６００毫升 雞蛋（包括蛋清和蛋黃）１０００毫升 ２０％孔雀綠２０毫升 ２．制法： （１）將磷酸二氫鉀、枸櫞酸鎂、味精、甘油及蒸餾水混合于燒杯內(nèi)，放在沸水浴中加熱溶解。 （３）置成斜面，保持溫度９０℃一小時滅菌。 （２）置成斜面，保持溫度９０℃一小時滅菌。 ２．表示嚴(yán)格，在正常情況下均應(yīng)這樣作的用詞： 正面詞采用“應(yīng)”； 反面詞采用“不應(yīng)”或“不得”。 二、條文中應(yīng)按其他有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范執(zhí)行的寫法為“應(yīng)按??執(zhí)行”或“應(yīng)符合??的規(guī)定”。