【正文】 證試驗 從上述分離平板上挑選 4～ 5個疑似菌落，分別接種于乳糖發(fā)酵管中，培養(yǎng) 24～ 48小時。 膽鹽乳糖發(fā)酵管若無菌生長、或有菌生長但不產(chǎn)酸產(chǎn)氣，判該管未檢出大腸菌群；若產(chǎn)酸產(chǎn)氣，應(yīng)將發(fā)酵管中的培養(yǎng)物分別劃線接種于曙紅亞甲藍(lán)瓊脂培養(yǎng)基的平板上，培養(yǎng) 18～ 24小時。 培養(yǎng)基菌落形態(tài) 培養(yǎng)基菌落形態(tài) 曙紅亞甲藍(lán)瓊脂 呈紫黑色、淺紫色、藍(lán)紫色或粉紅色，菌落中心呈深紫色或無明顯暗色中心，圓形，稍凸起，邊緣整齊，表面光滑，濕潤，常有金屬光澤 麥康凱瓊脂 鮮桃紅色或微紅色，菌落中心呈深桃紅色，圓形，扁平，邊緣整齊，表面光滑，濕潤 表 1 大腸埃希菌菌落形態(tài)特征 （ 5． 4）大腸菌群 取含適量 (不少于 10ml)的膽鹽乳糖培養(yǎng)基管 3支，分別加入 1： 10的供試液 1ml（含供試品 ）、 1： 100的供試液 1ml（含供試品 ）、 1： 1000的供試液 1ml（含供試品 或 ），另取 1支膽鹽乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基管加入稀釋液 1ml作為陰性對照管。 若平板上無菌落生長、或生長的菌落與麥 1所列的菌落形態(tài)特征不符，判供試品未檢出大腸埃希菌。本底對照應(yīng)為 MUG陰性和靛基質(zhì)陰性。若管內(nèi)培養(yǎng)物呈現(xiàn)熒光，為 MUG陽性；不呈現(xiàn)熒光，為 MUG陰性。 （ 1）大腸埃希菌（ CMCC(B) 44102） （ 2）金黃色葡萄球菌 (CMCC(B) 26003) （ 3）乙型付傷寒沙門菌 (CMCC(B) 50094) （ 4）銅綠假單胞菌 (CMCC(B) 10104) （ 5）生孢梭菌 (CMCC(B) 64941) （ 4． 2）菌液制備 （ 4． 3）驗證方法 （ 4． 3． 1）試驗組 （ 4． 3． 2）陰性菌對照組 （ 4． 4）結(jié)果判斷 （ 5）控制菌檢查 （ 5． 1）陽性對照試驗 （ 5． 2）陰性對照試驗 （ 5． 3）大腸埃希菌 取供試液 10ml（相當(dāng)于供試品 1g、 1ml、 10cm2） ,直接或處理后接種至適量（不少于 100ml）的膽鹽乳糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 18～ 24小時，必要時可延長至 48小時。 （ 3， 2． 3）、菌數(shù)報告規(guī)則 以相當(dāng)于 1g或 1m1供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)；若濾膜上無菌數(shù)生長，以＜ 1報告菌數(shù)（每張濾膜過濾 1g或 1m1供試品），或＜ 1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。陰性對照不得有菌生長。每種培養(yǎng)基至少制備一張濾膜。用 蛋白胨緩沖液或其他適宜的沖洗濾膜，沖洗方法和沖洗量同“計數(shù)方法的驗證”。 取相當(dāng)于每張濾膜含 lg或 1m1供試品的供試液，加至適量的稀釋劑中，混勻，過濾。供試液經(jīng)薄膜過濾后，若需要用沖洗液沖洗濾膜，每張濾膜每次沖洗量為 100ml。油類供試品，其濾膜和過濾器在使用前應(yīng)充分干燥。使用時，應(yīng)保證濾膜在過濾前后的完整性。選擇濾膜材質(zhì)時應(yīng)保證供試品及其溶液不影響微生物的充分被截留。 可以在培養(yǎng)基中加 ? 的 TTC 。 操作時間不能太長，一般要求從供試品稀釋到注皿的時間不要超過 1小時，因為有些活力較好的菌體在制備供試液的過程中就可行細(xì)胞分裂，這樣測得的菌數(shù)就不能代表原始的污染程度。 （ 3． 1． 4）、操作的注意事項 制備的供試液力求分散均勻，使之菌體能均勻分散，其次在每次吸取供試液注皿的時候，都要把供試液搖勻，這樣能使兩個平板上生長的菌落數(shù)比較接近。另外，供試液的平皿底部接觸時間太長，會使菌液藥渣附著不宜搖散。 澆注培養(yǎng)基的溫度不能高，澆注好的平板搖勻后即要求冷卻，不要把平板壘起來，這樣不利于冷卻。 如各稀釋級的平板無菌落生長，或僅最低稀釋級的平均菌落數(shù)生長，但平均菌落數(shù)小于 1小時，以＜ 1乘以最低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù) 。若比值不大于 2，以兩稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的均值報告菌數(shù)；若比值大于 2但不超過 5時，以低稀釋級的菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)；當(dāng)出現(xiàn)比值大于 5，或高稀釋級的菌落數(shù)大于或等于低稀釋級的菌數(shù)等異常情況，應(yīng)查明原因再行檢查，必要時，應(yīng)進(jìn)行方法的重新驗證。 當(dāng)僅有 1個稀釋級的菌落數(shù)符合上述規(guī)定，以該級的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。 含蜂蜜、王漿的液體制劑，用玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基測定霉菌數(shù)，用酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基測定酵母菌數(shù)，合并計數(shù)。在特殊情況下，若營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上長有霉菌和酵母菌、玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基上長有細(xì)菌，則應(yīng)分別點計霉菌和酵母菌、細(xì)菌菌落數(shù)。若用稀釋級兩個平板的菌落平均數(shù)不小于 15，則兩個平板的菌落數(shù)不能相差 1倍或以上。 （ 3． 1． 2）、培養(yǎng)和計數(shù) 除另有規(guī)定外，細(xì)菌培養(yǎng) 48小時，逐日點計菌落數(shù)，一般以 48小時的菌落數(shù)報告；霉菌、酵母菌培養(yǎng) 72小時，逐日計點菌落數(shù)，一般以 72小時的菌落數(shù)報告；必要時，可適當(dāng)延長培養(yǎng)時間至5~7進(jìn)行菌落計數(shù)并報告；菌落蔓延生長成片的平板不宜計數(shù)。 （ 3． 1． 1）、 陰性對照試驗 取試驗用的稀釋液 1m1，置無菌平皿中，注入培養(yǎng)基，凝固，倒置培養(yǎng)。 取供試液 1m1，置直徑 90mm的無菌平皿中，注入 15~20 ml溫度不超過 45℃ 的溶化的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基或玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基或酵母浸出粉胨葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（含蜂蜜或王漿的液體制劑時），混勻，凝固，倒置培養(yǎng)。等稀釋級。 取按驗證的方法制備的均勻供試液，用 蛋白胨緩沖液稀釋成 1： 1： 10178。 （ 3）、細(xì)菌、霉菌及酵母菌計數(shù)方法 試驗準(zhǔn)備：（干熱滅菌、濕熱滅菌） 把滅菌好的所有物品搬運至傳遞窗，打開紫外燈殺菌，至少 30分鐘。若試驗菌的回收率符合計數(shù)方