細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識ppt課件-文庫吧資料
2025-05-09 03:43本頁面
【正文】 病毒污染。 目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時還需添加血清 ?血清質(zhì)量好壞是實驗成敗的關(guān)鍵。 即使同源組織的不同細胞株 ， 所需 補加物 也不同 。 ? 向無清培養(yǎng)液中能促進細胞系生長的補加物都是獨特的 。 ?1975年 ， Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細胞株 ， 近 20多年來已報道了幾十種細胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長和增殖 。 ? 在生長因子、蛋白質(zhì)工程、基因表達調(diào)控等研究領(lǐng)域，迫切需要用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞． ?無血清培養(yǎng)基的主要研制策略：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中補充各種必需因子，如 激素、生長因子 、 結(jié)合蛋白 、 貼壁和擴展因子 等。 血清中含有 ： ① 多種蛋白質(zhì) （ 白蛋白 、 球蛋白 、 鐵蛋白等 ） ② 多種金屬離子； ③ 激素； ④ 促貼附物質(zhì) ， 如纖粘蛋白 、 冷析球蛋白 、 膠原等 。 成本低 缺點 ： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細胞生長需要。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機鹽和其它一些輔助物質(zhì)。 ? 易發(fā)生支原體污染 培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基是根據(jù)細胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。 ? 優(yōu)點：營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果好 ? 缺點：來源受限。 ? 用含血清培養(yǎng)液終止其對細胞的消化作用 培養(yǎng)基 ? 培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是維持體外細胞生存和生長的溶液，分天然培養(yǎng)基和合成培養(yǎng)基。 用濾器過濾除菌 。 ? 胰蛋白酶液濃度 越高 ， 作用越強 ， 但超過一定限度會損傷細胞 。 ③箱內(nèi)火菌蒸餾水 3000毫升蒸餾水槽中以保持箱內(nèi)濕度，避兔培養(yǎng)液蒸發(fā)。 ②保持培養(yǎng)箱內(nèi)空氣干凈。 三洋滅菌器 濾器 CO2培養(yǎng)箱 ?CO2培養(yǎng)箱設(shè)定的條件為 37 ℃ ， 5％ CO2 。 主要用于培養(yǎng)室空氣、操作臺、塑料 ?培養(yǎng)皿和培養(yǎng)板等表面消毒 超凈臺 ?超凈工作臺的工作原理是利用鼓風機驅(qū)動空氣遁過高效濾器除去空氣中的塵埃顆粒，使空氣得到凈化。 停止期 （平臺期）： 細胞長滿瓶壁后，細胞雖有活力但不再分裂 機制：接觸抑制、密度依賴性 培養(yǎng)細胞生長的條件 1 細胞的營養(yǎng)需要 2 細胞的生存環(huán)境 溫度 : 37 ℃ O2 CO2: 5% CO2 +H2O ← →H 2CO3 ← →H + + HCO3 pH: 滲透壓 3 無污染 4 無毒 實驗準備 實驗用品 ? 超凈工作臺 ， 壓力蒸汽消毒器 ， 電熱干燥箱 ， 濾器 ，酸缸 ? CO2培養(yǎng)箱 ? 倒置顯微鏡 ? 酶標儀 、 微孔板震蕩器 ? 液氮 罐 ? 自動雙重純水蒸餾器 ， 純水儀 ? 耗材：培養(yǎng)瓶 ， 吸管
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