實(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)ppt課件-文庫(kù)吧資料
2025-05-05 00:22本頁(yè)面
【正文】 細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果以細(xì)胞數(shù) /毫升表示。 細(xì)胞計(jì)數(shù) 一、原理 ★ 取 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 的細(xì)胞（ 2～ 5 1O 5cells／ ml）， 收集細(xì)胞前 24h換液； ★ 吸出培養(yǎng)液，用 PBS洗細(xì)胞一次，除去，加入消化液 胰蛋白酶 － EDTANa2（ 消化時(shí)間根據(jù)細(xì)胞而定），去掉消化液，加入培養(yǎng)液充分混勻， 1000rp離心 1min ,去掉上清液； ★ 重懸浮于凍存液中，大約 1～ 5 10 6cells／ ml； ★ 每個(gè)凍存管中加入 lml細(xì)胞懸浮液，擰緊蓋子。獲得細(xì)胞懸液種入 接種入瓶中培養(yǎng)培養(yǎng)瓶中培養(yǎng) 37℃ 培養(yǎng)箱（或 5%CO2培養(yǎng)箱）中培養(yǎng)24小時(shí)后換液去處對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有毒物質(zhì)，如 DMSO、 細(xì)胞組織殘?jiān)?、?xì)胞代謝產(chǎn)物 貼壁細(xì)胞 懸浮細(xì)胞直接去掉上清液 離心去掉上清液，必要時(shí)做細(xì)胞飼養(yǎng)層以凈化細(xì)胞 傳代 細(xì)胞生長(zhǎng) 80％ 以上覆蓋培養(yǎng)瓶底，根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)周期不同而異， 2－ 3天或 1周左右一代 貼壁細(xì)胞 懸浮細(xì)胞 .消化法，用胰酶－ EDTANa2消化， 直接吹打或離心法、自然沉淀法， 時(shí)間根據(jù)細(xì)胞而定 吸一半液到另一瓶 分離 復(fù)蘇組織切成 1cm3小塊，方法根據(jù)樣本而異。動(dòng)物組織原代培養(yǎng) 細(xì)胞株的體外培養(yǎng)血管、骨髓、羊水、胸水、腹水內(nèi) 細(xì)胞株貯存在液氮灌或－80℃細(xì)胞及皮膚、粘膜、神經(jīng)、胚胎、 以下的低溫冰箱中 腫瘤等組織（ 14） MEM培養(yǎng)液 :其是配方： 63%MEM液 20％的乳蛋白水解物 10％的小牛血清 1％的雙抗（ P、 S） 用 ％ NaHCO3溶液調(diào) pH至 ～ 。其是配方：基礎(chǔ)培養(yǎng)基 80％～ 90％ 血清 10％～ 20％ 雙抗 100u/ml （ 12） 細(xì)胞維持液： 用以維持細(xì)胞緩慢生長(zhǎng)或不死的培養(yǎng)液。（ 10）抗生素： 最終濃度為青霉素 100 U／ ml， 鏈霉素 100U／ ml（ 青霉素為 80萬(wàn) U／ 瓶，將其溶解于 4ml三蒸水中，每升培養(yǎng)液中加入 ； 鏈霉素為 100萬(wàn) U／ 瓶，將其溶解 在5ml三蒸水中，每升培養(yǎng)液加 ）。但其在溶液中極不穩(wěn)定，需重新加入。使用濃度可根據(jù)緩沖要求而定。(4)培養(yǎng)基（液）過(guò)濾除菌 常用 0． 22pm微孔濾膜。 但膠原酶價(jià)格較高，大量使用將增加實(shí)驗(yàn)成本?！? 膠原酶： 適于消化分離纖維性組織、上皮及癌組織，可使上皮細(xì)胞與膠原成分分離而不受損害?！? 胰蛋白酶 EDTA－ Na2:需過(guò)濾除菌。需過(guò)濾除菌。 （ 2）平衡鹽溶液（ PBS)： PH為 － ，不含鈣鎂離子 ，可高壓除菌?！?過(guò)濾除菌消毒： 適用于組織細(xì)胞培養(yǎng)使用的液體 如血清、合成培養(yǎng)液、酶及含有蛋白質(zhì)具有生物活性的液體等?！?紫外線消毒： 主要用于實(shí)驗(yàn)室房間里的空氣、操作 臺(tái)表面及桌椅等消毒。 ◆ 一般物品：布類、金屬器械、玻璃器皿等消毒的要求是 15磅 20 min； 常規(guī)使用液體：消毒 15磅 15 min 。
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