動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)hxyppt課件-文庫吧資料
2025-05-10 22:01本頁面
【正文】 。 ? 胰蛋白酶消化法有熱 (37℃) 和冷 (4 ℃) 兩種處理。使用濃度一般為%%，用不含鈣、鎂離子的 BSS配制，PH89。 61 ? （二）組織細(xì)胞的分離 ? ：可使組織疏松，細(xì)胞分開，細(xì)胞容易生長(zhǎng)，成活率高。 ? 切割分離法： 用剪刀剪切成 1mm3左右的小塊。 59 60 ? （二）組織細(xì)胞的分離 ? 有 機(jī)械法 和 消化法 兩大類 ? ： ? 離心分離法： 適用于細(xì)胞懸液組織。加肝素 抗凝劑防止凝血。 57 ⑥ ① ② ③ ④ ⑤ 機(jī)械法分離胚胎 ? 3. 皮膚和粘膜：多來源于手術(shù)，需嚴(yán)格消毒以消滅細(xì)菌霉菌。 ? 原代細(xì)胞通常由多種細(xì)胞組成（異質(zhì)性），細(xì)胞獨(dú)立生存性差 53 過程 組織 取材 組織細(xì)胞的 分離 培養(yǎng) 機(jī)械法 消化法 動(dòng)物胚胎或幼齡動(dòng)物的組織、器官 細(xì)胞懸液 胰蛋白酶 1代細(xì)胞 原代培養(yǎng) 50代細(xì)胞 傳代培養(yǎng) 無限傳代 單個(gè)細(xì)胞 加培養(yǎng)液 動(dòng)物組織細(xì)胞間隙中含有一定量的彈性纖維等蛋白質(zhì)，將細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)起來形成具有一定彈性和韌性的組織和器官。 ? 原代培養(yǎng) ? 原代培養(yǎng)： 從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞為原代細(xì)胞。 ③ 對(duì)培養(yǎng)環(huán)境極其敏感，包括 pH、溶解氧、溫度、剪切力等都需嚴(yán)格監(jiān)控。 49 動(dòng)物細(xì)胞體外培養(yǎng)的特點(diǎn) : ① 大多數(shù)須附著在固體或半固體的表面才能生長(zhǎng)。 48 細(xì)胞的基本培養(yǎng)技術(shù) ? 定義 ? 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) ：就是將動(dòng)物組織或細(xì)胞從機(jī)體中取出，分散成單個(gè)細(xì)胞，給予必要的生長(zhǎng)條件，模擬體內(nèi)的生長(zhǎng)環(huán)境，使其在體外繼續(xù)生長(zhǎng)和增殖的技術(shù)。 ? （ 3）氣體 ： O2； CO2，還可調(diào)節(jié) pH。低于 生長(zhǎng)受到影響， 甚至死亡。 ℃ ；對(duì)低溫耐受性比高溫強(qiáng)。 ⑤ 酶抑制劑 ：常用大豆胰酶抑制劑。如纖黏蛋白、血清鋪展因子、膠原等。 ② 結(jié)合蛋白 和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白 ：主要是轉(zhuǎn)鐵蛋白（增強(qiáng)細(xì)胞攝取培養(yǎng)基中鐵的能力，可螯合痕量有害金屬離子）和白蛋白（參與運(yùn)載一些脂類、金屬離子等，也有螯合過量微量元素的作用）兩種蛋白。 44 （ 2）補(bǔ)充成分 ① 激素和生長(zhǎng)因子 ：激素有胰島素、生長(zhǎng)激素和多種生長(zhǎng)因子如表皮生長(zhǎng)因子、成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、增殖刺激因子、類胰島素生長(zhǎng)因子等。 ? 主要用于：研究細(xì)胞生長(zhǎng)因子、單克隆抗體的制備、以及細(xì)胞分泌產(chǎn)物研究 43 ? （ 1）基礎(chǔ)培養(yǎng) 液 ? 根據(jù)不同培養(yǎng)細(xì)胞選擇合適的合成培養(yǎng)基作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。 ? 可保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和穩(wěn)定性。另外高質(zhì)量的動(dòng)物血清來源有限，成本高，限制了它的大量使用。 ? （ 5）其他：嘌呤、嘧啶、輔酶及抗氧化劑等。 ? （ 3）無機(jī)離子：包括大量和微量無機(jī)離子，通常也可由血清提供。 ? （ 2）維生素：包括水溶性和脂溶性兩類。 40 ? 合成培養(yǎng)基的組成： ? （ 1）氨基酸：氨基酸是細(xì)胞合成蛋白質(zhì)的基本成分， 12種必須氨基酸必須由培養(yǎng)液提供。最普遍的作法是 加入小牛血清，稱為完全培養(yǎng)基 。合成培養(yǎng)基成分已知，便于對(duì)實(shí)驗(yàn)條件的控制。 ? （ 4）膠原 ： 膠原是從動(dòng)物真皮或大鼠尾腱中提取的，具改善細(xì)胞表面特性促使其附著生長(zhǎng)的作用。用 Hanks液配制成 %溶液，與合成培養(yǎng)基按比例混合使用。不常用。 38 ? （ 2）胚胎提取液 ： 雞胚、牛胚提取液，能促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。缺點(diǎn)是組成復(fù)雜，使培養(yǎng)結(jié)果不穩(wěn)定。 營(yíng)養(yǎng)豐富，其中溶有多種物質(zhì)，如無機(jī)鹽離子、蛋白質(zhì)及氨基酸、糖類（如葡萄糖等）、脂類、激素、固醇、抗體、維生素等。 36 ? 培養(yǎng)基 ? 按照來源分： – 天然培養(yǎng)基 – 合成培養(yǎng)基 – 無血清培養(yǎng)基 37 1. 天然培養(yǎng)基 ?天然培養(yǎng)基： 直接取自動(dòng)物體液或從組織中提取的天然成分作培養(yǎng)液，但成分復(fù)雜，來源有限。 33 34 ? – 胰蛋白酶 – EDTANa溶液 – 膠原酶 ? ： 用于終止消化酶的作用 – 血清 – 大豆胰酶抑制劑 35 ? pH調(diào)整液 ： 常用的有： ％、 ％、％的 NaHCO3溶液和 HEPES溶液（二羥乙基哌嗪乙烷磺酸）等。主要用于合成培養(yǎng)基的基礎(chǔ)液和洗滌組織、細(xì)胞等。 細(xì)胞培養(yǎng)液 ? 細(xì)胞培養(yǎng)常用液體 ? 三蒸水、純水 ? （ BSS） – 由生理鹽水發(fā)展而來，由無機(jī)鹽和葡萄糖配制而成。此時(shí)需做分離培養(yǎng)即傳代，否則細(xì)胞會(huì)中毒，發(fā)生形態(tài)改變，重則從底物脫落死亡 潛伏期 指數(shù)生長(zhǎng)期 停止期 培養(yǎng)細(xì)胞的遺傳學(xué)特征 （一）染色質(zhì)與染色體： ? 正常細(xì)胞：二倍體 ? 細(xì)胞發(fā)生轉(zhuǎn)化：多倍體或異倍體 （二）細(xì)胞性別 ? 女性： Barr小體 ? 男性： Y小體 體內(nèi)外細(xì)胞的差
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