動物細(xì)胞培養(yǎng)hxyppt課件(已修改)
2025-05-16 22:01 本頁面
【正文】 第四章 動物細(xì)胞培養(yǎng) 1 ? 動物的細(xì)胞和組織培養(yǎng) ：從動物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，模擬機體內(nèi)生理條件，在體外建立無菌、適溫和一定營養(yǎng)條件等，使之生長和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。 2 培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征 ? 體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型 ? 按生長方式分為 3型： ? 貼壁型 細(xì)胞 :附著在某一固相支持物表面才能生長的細(xì)胞。 ? 懸浮型 細(xì)胞 :不必附著于固相支持物表面，在懸浮狀態(tài)下即可生長的細(xì)胞。 ? 半貼壁型 細(xì)胞 3 （一）貼附型細(xì)胞： 大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長，屬于貼壁依賴性細(xì)胞 貼附 :是大多數(shù)有機體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長發(fā)育的基本存在方式 結(jié)果 : 基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須 貼附 于一 固相表面 才能 生存 和 生長 。 培養(yǎng)時： 這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后 ,同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長，因而 屬于貼附型細(xì)胞 貼附 (錨定或錨著 )依賴型 (性 )細(xì)胞 細(xì)胞在體內(nèi)、外的貼附方式存在差異 體內(nèi)： 貼附是全方位 ,外形具有復(fù)雜的立體特征 體外： 多數(shù)情況，細(xì)胞只有一個附著平面，外 形一般與體內(nèi)時明顯不同 貼附的固相表面： 玻璃、聚苯乙烯塑料 按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為 四大類型 成纖維細(xì)胞型： 名稱： 成纖維細(xì)胞 來源： 由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織 真正的成纖維細(xì)胞：心肌 ， 平滑肌 ， 成骨細(xì)胞 ， 血管內(nèi)皮 形態(tài)： 似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài) ， 胞體梭形或不規(guī)則 三角形 ， 胞質(zhì)向外伸出 2— 3個長短不等的突起 ， 中有卵圓形核 生長特點： 排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片， 細(xì)胞 細(xì)胞接觸易斷開而單獨行動，游離的單獨的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個伸長的細(xì)胞突起 上皮細(xì)胞型 名稱： 僅形態(tài)上似體內(nèi)，實際上不完全相同 來源： 來源于外胚層、內(nèi)胚層細(xì)胞 , 如：皮膚及其衍生物 ,消化道，乳腺，肺泡 , 上皮性腫瘤 形態(tài)： 類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核 生長特點： 易相連成片 ， 相靠 — 緊密相連成薄層 — 鋪石狀生長時呈膜狀移動 ， 很少脫離細(xì)胞群而單個活動 游走細(xì)胞型： 呈散在生長，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運動，方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定，有時難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。 多形型細(xì)胞： 有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。 （二）懸浮型細(xì)胞： 見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長。這類細(xì)胞容易大量繁殖。 來源： 血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞 特點： 在懸浮中生長良好，細(xì)胞圓形、單個或小細(xì)胞團 優(yōu)點： 生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便 (不需消化 )，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài) 缺點： 純化不方便，不能通過離心將死、活細(xì)胞分離 ? 培養(yǎng)細(xì)胞的生長特點 ? ? 貼壁 → 伸展 ? 影響因素： – 鈣離子 – 機械、物理因素 – 生物因素 13 細(xì)胞貼壁過程 15 ? ? 細(xì)胞接觸 → 停止移動 ? 正常細(xì)胞成單層生長 ? 腫瘤細(xì)胞無接觸抑制 ，可以堆積生長。 ? 接觸抑制可作為區(qū)分正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的標(biāo)志之一 16 ? ? 細(xì)胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液營養(yǎng)成分消耗，細(xì)胞代謝物增多，導(dǎo)致發(fā)生密度抑制，細(xì)胞分裂停止 培養(yǎng)細(xì)胞的生長和增殖過程 （一）單個細(xì)胞的生長過程 （二）細(xì)胞系的生長過程 （三）每代細(xì)胞的生長過程 （一）單個細(xì)胞的生長過程 ? 細(xì)胞周期 ：一個母細(xì)胞分裂結(jié)束后形成的細(xì)胞到下一次再分裂結(jié)束形成兩個子細(xì)胞的時期。 （二）細(xì)胞系的生長過程 培養(yǎng)細(xì)胞的生命期： 是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長的時間。包括 原代培養(yǎng)期、傳代期及衰退期。 細(xì)胞的生長曲線 1．原代培養(yǎng)期： 從體內(nèi)取出組織 ,接種培養(yǎng)到第一次傳代階段（初代培養(yǎng)） 特點 ： 14周、細(xì)胞呈活躍的移動、可見細(xì)胞分裂、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動上與體內(nèi)原組織相似性大、多呈 二倍體核型 細(xì)胞群是異質(zhì)的，細(xì)胞克隆形成率很低，即細(xì)胞獨立生存性差。 2．傳代期： 初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱做 細(xì)胞系 。在全生命期中此期的持續(xù)時間最長。在培養(yǎng)條件較好情況下，細(xì)胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型，呈二倍體核型的細(xì)胞稱 二倍體細(xì)胞系 。為保持二倍體細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。一般情況下當(dāng)傳代 10～ 50次左右，細(xì)胞增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細(xì)胞進入第三期。 3．衰退期： 此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強，最后衰退凋亡。 在細(xì)胞生命期階段，少數(shù)情況下，在以上三期任何一點，由于某種因素的影響，細(xì)胞可能發(fā)生自
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