動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)hxyppt課件(已修改)
2025-05-16 22:01 本頁(yè)面
【正文】 第四章 動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng) 1 ? 動(dòng)物的細(xì)胞和組織培養(yǎng) ：從動(dòng)物體內(nèi)取出組織或細(xì)胞，模擬機(jī)體內(nèi)生理?xiàng)l件，在體外建立無(wú)菌、適溫和一定營(yíng)養(yǎng)條件等，使之生長(zhǎng)和生存，并維持其結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù)。 2 培養(yǎng)細(xì)胞的生物學(xué)特征 ? 體外培養(yǎng)細(xì)胞的分型 ? 按生長(zhǎng)方式分為 3型： ? 貼壁型 細(xì)胞 :附著在某一固相支持物表面才能生長(zhǎng)的細(xì)胞。 ? 懸浮型 細(xì)胞 :不必附著于固相支持物表面，在懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)的細(xì)胞。 ? 半貼壁型 細(xì)胞 3 （一）貼附型細(xì)胞： 大多數(shù)培養(yǎng)細(xì)胞貼附生長(zhǎng)，屬于貼壁依賴性細(xì)胞 貼附 :是大多數(shù)有機(jī)體細(xì)胞在體內(nèi)生存和生長(zhǎng)發(fā)育的基本存在方式 結(jié)果 : 基于貼附特性，使細(xì)胞與細(xì)胞之間相互結(jié)合形成組織，有機(jī)體的絕大多數(shù)細(xì)胞必須 貼附 于一 固相表面 才能 生存 和 生長(zhǎng) 。 培養(yǎng)時(shí)： 這些細(xì)胞被放到體外環(huán)境中以后 ,同樣需要貼附于某一固相表面才能生存和生長(zhǎng)，因而 屬于貼附型細(xì)胞 貼附 (錨定或錨著 )依賴型 (性 )細(xì)胞 細(xì)胞在體內(nèi)、外的貼附方式存在差異 體內(nèi)： 貼附是全方位 ,外形具有復(fù)雜的立體特征 體外： 多數(shù)情況，細(xì)胞只有一個(gè)附著平面，外 形一般與體內(nèi)時(shí)明顯不同 貼附的固相表面： 玻璃、聚苯乙烯塑料 按照培養(yǎng)細(xì)胞的主要形態(tài)，可分為 四大類型 成纖維細(xì)胞型： 名稱： 成纖維細(xì)胞 來(lái)源： 由中胚層間充質(zhì)組織起源的組織 真正的成纖維細(xì)胞：心肌 ， 平滑肌 ， 成骨細(xì)胞 ， 血管內(nèi)皮 形態(tài)： 似體內(nèi)成纖維細(xì)胞的形態(tài) ， 胞體梭形或不規(guī)則 三角形 ， 胞質(zhì)向外伸出 2— 3個(gè)長(zhǎng)短不等的突起 ， 中有卵圓形核 生長(zhǎng)特點(diǎn)： 排列成放射狀，漩渦狀，并不緊靠連成片， 細(xì)胞 細(xì)胞接觸易斷開而單獨(dú)行動(dòng)，游離的單獨(dú)的成纖維樣細(xì)胞，常有幾個(gè)伸長(zhǎng)的細(xì)胞突起 上皮細(xì)胞型 名稱： 僅形態(tài)上似體內(nèi)，實(shí)際上不完全相同 來(lái)源： 來(lái)源于外胚層、內(nèi)胚層細(xì)胞 , 如：皮膚及其衍生物 ,消化道，乳腺，肺泡 , 上皮性腫瘤 形態(tài)： 類似體內(nèi)的上皮細(xì)胞，扁平，不規(guī)則多角形，中有圓形核 生長(zhǎng)特點(diǎn)： 易相連成片 ， 相靠 — 緊密相連成薄層 — 鋪石狀生長(zhǎng)時(shí)呈膜狀移動(dòng) ， 很少脫離細(xì)胞群而單個(gè)活動(dòng) 游走細(xì)胞型： 呈散在生長(zhǎng)，一般不連成片，胞質(zhì)常突起，呈活躍游走或變形運(yùn)動(dòng)，方向不規(guī)則。此型細(xì)胞不穩(wěn)定，有時(shí)難以和其他細(xì)胞相區(qū)別。 多形型細(xì)胞： 有一些細(xì)胞，如神經(jīng)細(xì)胞難以確定其規(guī)律和穩(wěn)定的形態(tài)，可統(tǒng)歸于此類。 （二）懸浮型細(xì)胞： 見于少數(shù)特殊的細(xì)胞，如某些類型的癌細(xì)胞及白血病細(xì)胞。胞體圓形，不貼于支持物上，呈懸浮生長(zhǎng)。這類細(xì)胞容易大量繁殖。 來(lái)源： 血，脾或骨髓，血中白細(xì)胞癌腫細(xì)胞 特點(diǎn)： 在懸浮中生長(zhǎng)良好，細(xì)胞圓形、單個(gè)或小細(xì)胞團(tuán) 優(yōu)點(diǎn)： 生存空間大，提供數(shù)量大，傳代方便 (不需消化 )，易于收獲，可獲得穩(wěn)定狀態(tài) 缺點(diǎn)： 純化不方便，不能通過(guò)離心將死、活細(xì)胞分離 ? 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn) ? ? 貼壁 → 伸展 ? 影響因素： – 鈣離子 – 機(jī)械、物理因素 – 生物因素 13 細(xì)胞貼壁過(guò)程 15 ? ? 細(xì)胞接觸 → 停止移動(dòng) ? 正常細(xì)胞成單層生長(zhǎng) ? 腫瘤細(xì)胞無(wú)接觸抑制 ，可以堆積生長(zhǎng)。 ? 接觸抑制可作為區(qū)分正常細(xì)胞與癌細(xì)胞的標(biāo)志之一 16 ? ? 細(xì)胞增殖，密度加大，培養(yǎng)液營(yíng)養(yǎng)成分消耗，細(xì)胞代謝物增多，導(dǎo)致發(fā)生密度抑制，細(xì)胞分裂停止 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)和增殖過(guò)程 （一）單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 （二）細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程 （三）每代細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 （一）單個(gè)細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程 ? 細(xì)胞周期 ：一個(gè)母細(xì)胞分裂結(jié)束后形成的細(xì)胞到下一次再分裂結(jié)束形成兩個(gè)子細(xì)胞的時(shí)期。 （二）細(xì)胞系的生長(zhǎng)過(guò)程 培養(yǎng)細(xì)胞的生命期： 是指細(xì)胞在培養(yǎng)中持續(xù)增殖和生長(zhǎng)的時(shí)間。包括 原代培養(yǎng)期、傳代期及衰退期。 細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線 1．原代培養(yǎng)期： 從體內(nèi)取出組織 ,接種培養(yǎng)到第一次傳代階段（初代培養(yǎng)） 特點(diǎn) ： 14周、細(xì)胞呈活躍的移動(dòng)、可見細(xì)胞分裂、形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能活動(dòng)上與體內(nèi)原組織相似性大、多呈 二倍體核型 細(xì)胞群是異質(zhì)的，細(xì)胞克隆形成率很低，即細(xì)胞獨(dú)立生存性差。 2．傳代期： 初代培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)傳代后便改稱做 細(xì)胞系 。在全生命期中此期的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)。在培養(yǎng)條件較好情況下，細(xì)胞增殖旺盛，并能維持二倍體核型，呈二倍體核型的細(xì)胞稱 二倍體細(xì)胞系 。為保持二倍體細(xì)胞性質(zhì)，細(xì)胞應(yīng)在初代培養(yǎng)期或傳代后早期凍存。一般情況下當(dāng)傳代 10～ 50次左右，細(xì)胞增殖逐漸緩慢，以至完全停止，細(xì)胞進(jìn)入第三期。 3．衰退期： 此期細(xì)胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖；細(xì)胞形態(tài)輪廓增強(qiáng)，最后衰退凋亡。 在細(xì)胞生命期階段，少數(shù)情況下，在以上三期任何一點(diǎn)，由于某種因素的影響，細(xì)胞可能發(fā)生自
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