動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)-文庫(kù)吧資料
2024-08-17 15:15本頁(yè)面
【正文】 0目濾器上研磨，并吸取2mlHanks液沖洗至濾器的燒杯中。將眼科鑷彎頭端向上(第Ⅲ套器械)，將肝脾腎一齊取出，移入已加Hanks液的培養(yǎng)皿內(nèi)。酒精消毒后，沿著膈膜剪斷胸廓，并將胸骨兩側(cè)肋骨剪斷(第Ⅱ套器械)。小鼠仰位固定在培養(yǎng)皿上。本實(shí)驗(yàn)主要采用胰蛋白酶消化法，對(duì)初生乳鼠肺組織進(jìn)行原代培養(yǎng)。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹⒉煌膶?shí)驗(yàn)材料，解離或分離細(xì)胞的方法和條件各有不同。實(shí)驗(yàn)二 細(xì)胞的原代培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)?zāi)康模簩?shí)驗(yàn)原理：從供體獲取組織細(xì)胞的首次培養(yǎng)叫原代培養(yǎng)或初代細(xì)胞培養(yǎng)。，分裝瓶?jī)?nèi)液體量要小于瓶容積的2／3。按一次用量或一周內(nèi)用量挑選小包裝瓶。，分裝瓶規(guī)格、數(shù)量應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要準(zhǔn)備。 注意事項(xiàng)：。Ca2+ Mg2+和血清的存在都會(huì)降低其活力。一般來(lái)說(shuō)，濃度越大、溫度越高、作用時(shí)間越長(zhǎng)，對(duì)細(xì)胞的分離能力也越大，但超過(guò)一定限度就會(huì)損傷細(xì)胞。胰蛋白酶的活力是用解離酪蛋白的能力表示的，常用的有1：125和1:250兩種,即1份胰蛋白酶能解離125份或250份酪蛋白。三．溶液配制：（一）DMEM培養(yǎng)液取一包DMEM試劑（）溶于800ml雙蒸水中，,雙蒸水定容至1L，攪拌均勻，等待過(guò)濾除菌。消毒后，調(diào)節(jié)活塞使壓力在7分鐘左右均勻地下降到零。一般蒸氣消毒30分鐘。（二）器皿的消毒濕熱消毒即高壓蒸汽消毒：布類、膠塞、金屬器械、玻璃器皿以及某些培養(yǎng)用液等都可用此方法消毒滅菌。 帶蓋的瓶子或塑料離心管等物品
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