動物細胞培養(yǎng)-閱讀頁
2024-08-23 15:15本頁面
【正文】 超凈工作臺、二氧化碳培養(yǎng)箱實驗步驟： 將4周齡新生乳鼠斷髓后，將尾巴提起，鼠身浸入75％酒精的燒杯中旋轉(zhuǎn)3 s左右(默數(shù)5下)，取出放在滅菌的培養(yǎng)皿中，移入工作臺內(nèi)。在胸廓正中線中位處，用兩把眼科彎鑷(第1套器械)夾起皮膚，向左右兩側(cè)頭端撕拉，膈肌部位皮膚向尾端拉，皮膚外翻固定，軀干部肌肉暴露(注意：不要使表皮面接觸胸腹肌)。胸廓暴露后，可見心臟和粉紅色肺。 用Hanks液漂洗肝脾腎表面血污，然后粗剪幾下，再用Hanks液漂洗多次后，吸去多余液體。，配平離心，700rpm離心10min，吸取10ml培養(yǎng)液至培養(yǎng)瓶中。當細胞在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細胞才能繼續(xù)生長。傳代培養(yǎng)可獲得大量細胞供實驗所需。原代培養(yǎng)細胞在瓶壁匯合后，需進行分離再培養(yǎng)，否則會因細胞密度過大，或生存空間不足、營養(yǎng)不夠?qū)е录毎ダ?、停止生長甚至死亡。原代培養(yǎng)的首次傳代稱為第二代，是建立細胞系的關(guān)鍵時期。通常，原代細胞按l：2分種傳代。根據(jù)細胞生長特點，傳代方法有三種：懸浮生長細胞傳代；半懸浮生長細胞傳代；貼壁生長細胞傳代。試劑培養(yǎng)液，Hanks液，胰蛋白酶液實驗步驟，一般經(jīng)過7d左右可形成致密單層細胞。將貼壁疏松的有絲分裂球形細胞振人培養(yǎng)液內(nèi)，最后移入離心管中）。 ml胰蛋白酶液，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使消化液浸泡細胞面。終止消化的方法為：加培養(yǎng)液，用吸管頭輕輕地、有序地吹打瓶壁細胞(從瓶底到瓶口，從瓶的一側(cè)到另一側(cè)，注意吹打邊角細胞)，細胞從支持物上脫落，并彼此分離懸浮于水中，液體混濁。
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