植物細胞培養(yǎng)ppt課件-文庫吧資料
2025-05-07 02:17本頁面
【正文】 培養(yǎng)系統(tǒng)：支持物采用尼龍網(wǎng)、聚氨酯泡沫、中空纖維等材料。 植物細胞培養(yǎng)需要解決的問題 （ 1）氧和二氧化碳的控制，過多氧過少氧均不利于生長； （ 2）營養(yǎng)物的供應(yīng)； （ 3）細胞密度過高引起細胞團聚甚至分化 （ 4）培養(yǎng)過程中細胞的分化的防止， （ 5）細胞取得中微生物的去除； （ 6）細胞壁脆性的存在要求培養(yǎng)體系剪切力要??； 二 .培養(yǎng)系統(tǒng) 懸浮培養(yǎng)系統(tǒng) 機械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 機械攪拌式生物反應(yīng)器通常是根據(jù)植物細胞的特性在微生物發(fā)酵罐的基礎(chǔ)上作如下改進： 攪拌裝置要減少剪切，一般改葉輪式為螺旋式 因為植物細胞生長周期長，需要隨時補充水分和營養(yǎng)，因此必須設(shè)計加液裝置； 由于植物細胞的生理活動需要新鮮空氣，且細胞代謝也可能產(chǎn)生有害氣體，所以必須設(shè)計通氣裝置； 為便于取樣觀察，一般還設(shè)計有取樣口 。 167。 看護培養(yǎng) 概念：用一塊愈傷組織或植物離體組織看護單細胞使其生長增殖的一種單細胞培養(yǎng)方法 微室培養(yǎng) 概念：人工制造一個小室，將單細胞培養(yǎng)在小室中的少量培養(yǎng)基上，使其分裂增殖形成細胞團的方法，稱微室培養(yǎng)。 植板率 (％ )＝ (形成的細胞團數(shù) /接種的細胞數(shù) ) 100％ 計算式中每個平板新形成的細胞團數(shù)的計數(shù)方法有兩種：一是直接計數(shù)法，注意計量時要掌握合適的時間，即細胞團肉眼已能分辨，但尚未長合到一起的時候。 待植板后的培養(yǎng)基完全凝固后，用石蠟或parafilm封口膜將培養(yǎng)皿封嚴以防污染 在 25℃ 黑暗條件下培養(yǎng) 3周即可長出肉眼可見的愈傷組織。 排除體細胞的干擾 利于對細胞活動跟蹤觀察 二、單細胞培養(yǎng)的方法 細胞平板培養(yǎng) 概念：將制備好的單細胞懸浮液，按照一定的細胞密度，接種在 1mm左右的薄層固體培養(yǎng)基上進行培養(yǎng)，稱之為平板培養(yǎng) 主要技術(shù)要點： 單細胞的分離：一般采用酶分離法，小細胞團不能超過 6個細胞，因此過濾時網(wǎng)篩的網(wǎng)眼要選擇合適。 一、植物單細胞培養(yǎng)的意義 建立單細胞無性系 懸浮培養(yǎng)細胞間細胞間在遺傳、生理和生化上存在差異，這些差異反映在它們的產(chǎn)量、品質(zhì)、抗病蟲性和抗逆性等方面。用于處理 的細胞系最好處于對數(shù)生長期。 無論何種細胞同步化處理，對細胞本身或多或少都有一定的傷害。 常用的抑制劑有 5氟脫氧尿苷， 5氨基尿嘧啶、羥基尿等。 化學(xué)方法 1）饑餓法 懸浮培養(yǎng)細胞中，若斷絕供應(yīng)一種細胞分裂所必需的營養(yǎng)成分或激素，使細胞停滯在 G1或 G2期，經(jīng)過一段時間的饑餓之后，當(dāng)在培養(yǎng)基中重新加入這種限制因子時，靜止細胞就會同步進入分裂。 Fujimura分離胡蘿卜懸浮液 懸浮液 47μm膜過濾 濾液 31 μm膜過濾 收集 加入到 10%~18%的 Ficoll 加入等體積的培養(yǎng)基 網(wǎng)上細胞 180g離心 5min 收集各細胞層的細胞 用培養(yǎng)基洗滌 分別接種 2）冷處理法。 培養(yǎng)條件：方式、溫度、繼代周期 四、懸浮細胞的同步化 細胞同步化是指同一懸浮培養(yǎng)體系的所有細胞都同時通過細胞周期的某一特定時期。其外觀一般是色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色，呈細小顆粒狀，疏松易碎。 細胞生長迅速，懸浮細胞的生長量一般 2～ 3天甚至更短時間便可增加一倍。 均一性好，細胞形狀和細胞團大小大致相同。 一般用孚爾根染色法，先將組織用1molHCl在 60℃ 水解后染色，常規(guī)鏡檢，統(tǒng)計 500個細胞，計算。細胞的干重和鮮重一般以每毫升懸浮培養(yǎng)物的重量表示。 將一定量的細胞懸浮液加到預(yù)先稱重的尼龍布上，用水沖洗并抽濾除去細胞粘著的多余水滴，然后稱重，兩者差就是細胞的鮮重。以每毫升培養(yǎng)液中細胞體積的毫升數(shù)來表示。 A、細胞記數(shù) 注意：由于懸浮培養(yǎng)的細胞并不會呈游離單細胞，因此 通過培養(yǎng)瓶中直接取樣很難進行可靠的細胞記數(shù)。 依此，多次，可建立良好的細胞懸浮培養(yǎng)物。 D、如果使處在靜止期的細胞懸浮液保持時間太長，則會引起細胞的大量死亡和解體 操作注意事項： 對懸浮培養(yǎng)細胞繼代時，進液口的孔徑要小，只能通過單
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