植物細(xì)胞培養(yǎng)ppt課件-展示頁(yè)
2025-05-10 02:17本頁(yè)面
【正文】 細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)（ 2 4細(xì)胞），使用吸管或注射器。 條件培養(yǎng)基：曾培養(yǎng)過(guò)一段時(shí)間組織或細(xì)胞的培養(yǎng)基。 討論 : A、滯后期的長(zhǎng)短主要取決于在繼代時(shí)原種培養(yǎng)細(xì)胞所處的生長(zhǎng)期和轉(zhuǎn)入細(xì)胞數(shù)量的多少。 最低有效密度由于培養(yǎng)材料、原種培養(yǎng)條件，原種保存時(shí)間長(zhǎng)短、培養(yǎng)基的成分不同而有差異，一般為 104~105細(xì)胞 /ml 2）細(xì)胞記數(shù) 要保證細(xì)胞培養(yǎng)的最低有效密度，在細(xì)胞游離后要對(duì)分離的單細(xì)胞進(jìn)行記數(shù)，可用血球記數(shù)板 懸浮培養(yǎng)細(xì)胞數(shù)目的增殖變化 細(xì)胞生長(zhǎng)各個(gè)時(shí)期的特點(diǎn) ： 滯后期（延遲期） :細(xì)胞很少分裂，其長(zhǎng)短與接種量大小和繼代時(shí)原種細(xì)胞所處的生長(zhǎng)期有關(guān) 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 :細(xì)胞分裂活躍，細(xì)胞數(shù)目增加，增長(zhǎng)速率保持不變直線生長(zhǎng)期 :細(xì)胞生長(zhǎng)和發(fā)育最明顯的時(shí)期 緩慢期 :生長(zhǎng)逐漸緩慢 ,培養(yǎng)液消耗將盡，有毒代謝物質(zhì)增多，氧氣減少。為了提高細(xì)胞的分散度，對(duì)于生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素的比例需要進(jìn)行一些調(diào)節(jié)。 Bioreactor for continuous cell suspensions Shaker for suspension culture Culture wheel 細(xì)胞可以不斷增殖，形成高密度的細(xì)胞群體，適于大規(guī)模培養(yǎng)； 能夠提供大量較為均勻的細(xì)胞，為研究細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化創(chuàng)造方法和條件。 167。 選擇適宜的培養(yǎng)基：較高濃度激素濃度，特別是生長(zhǎng)素，必要的附加物質(zhì)，例如水解酪蛋白、 Pro、 Gln。 完整的植物器官分離單細(xì)胞 由培養(yǎng)組織中分離單細(xì)胞 撕去下表皮 露出葉肉細(xì)胞 用解剖刀刮下細(xì)胞 1 機(jī)械法 第一種方法：用刀片刮葉片 第二種方法：葉片研碎、離心 研碎成粉 加研磨介質(zhì) 過(guò)濾、離心 注意 ： 只有薄壁組織排列松散，細(xì)胞間結(jié)觸點(diǎn)很少時(shí)用機(jī)械法分離葉肉細(xì)胞才能取得成功。 167。 167。 第二部分 細(xì)胞培養(yǎng) 定義 ： 植物細(xì)胞培養(yǎng)（ plant cell culture）是指在離體條件下對(duì)植物單個(gè)細(xì)胞或小的細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行培養(yǎng)使其增殖的技術(shù) 根據(jù)培養(yǎng)規(guī)模 :小規(guī)模培養(yǎng)和大批量培養(yǎng)； 根據(jù)培養(yǎng)方式 :懸浮培養(yǎng)、單細(xì)胞培養(yǎng)等； 根據(jù)要求產(chǎn)物 :用于誘變的細(xì)胞培養(yǎng)和生產(chǎn)次生產(chǎn)物的細(xì)胞培養(yǎng) 。 167。 167。 167。 1 酶解法 ： Takebe等（ 1968） 最早報(bào)道：用果膠酶處理可以分離大量的葉肉細(xì)胞 加果膠酶 過(guò)濾、離心 由培養(yǎng)組織分離單細(xì)胞 莖段 步驟： (1) 誘導(dǎo)產(chǎn)生愈傷組織； (2) 愈傷組織反復(fù)繼代，使組織不斷增殖，提高愈傷組織的松散性； 搖床用于振蕩 繼代 懸浮 (3)將愈傷組織在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，建立懸浮培養(yǎng)物 15ml medium/1g 120rpm culture transfer 1time/3d 3 weeks 100130目網(wǎng)過(guò)濾 Centrifuge(離心） isolation 注意： 選擇適宜的外植體：幼胚、胚軸、子葉是最常使用的外植體。 繼代多次，以獲得均勻一致疏松的愈傷組織。 (cell suspension culture) 一、細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的概念和意義 懸浮培養(yǎng)是將單個(gè)游離細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)懸浮在液體培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)增殖的技術(shù)。 細(xì)胞懸浮 植物 人工種子 Secondary products 原生質(zhì)體分離 突變篩選 細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的應(yīng)用 三 .細(xì)胞懸浮培養(yǎng)的方法 培養(yǎng)基 對(duì)于用愈傷組織制備的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基以原愈傷組織繼代時(shí)的培養(yǎng)基除去瓊脂為好。 培養(yǎng)細(xì)胞的起始密度及細(xì)胞記數(shù) （ 1）最低有效密度的概念 在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中，使懸浮培養(yǎng)細(xì)胞能夠增殖的最少接種量稱為最低有效密度或者臨界的起始密度。 靜止期 :生長(zhǎng)幾乎處于停止?fàn)顟B(tài)，細(xì)胞數(shù)目增加極少 ,甚至開(kāi)始死亡。 B、加入條件培養(yǎng)基可以縮短滯后期。 C、縮短兩次繼代時(shí)間間隔，則可使懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞一直保持對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。 繼代前，培養(yǎng)容器靜置短時(shí)間，大細(xì)胞團(tuán)沉降，再吸上層懸浮液。 細(xì)胞生長(zhǎng)的測(cè)定 對(duì)于任何一個(gè)建立的細(xì)胞懸浮系都應(yīng)該
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