實(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)ppt課件-展示頁
2025-05-08 00:22本頁面
【正文】 ◆ 在加熱升壓之前，打開排氣閥門，使加熱后消毒器內(nèi)的殘留冷空氣排出。消毒完畢后不可馬上將烤箱門打開，以免冷空氣突然進(jìn)入，影響消毒效果和損壞玻璃器皿或發(fā)生意外事故。（ 1）消毒滅菌的方法 : ★ 物理方法 : 濕熱（高壓蒸汽）、干熱、紫外線照射線、過濾、離心沉淀等方法殺滅或去除微生物 . ★ 化學(xué)方法 :使用化學(xué)消毒劑、抗菌素等殺滅微生物。 : 在組織細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)中，務(wù)必保證組織細(xì)胞在無微生物的條件下生長(zhǎng)。： 在消毒前必須進(jìn)行嚴(yán)格包裝，以便消毒及儲(chǔ)存，防止落入灰塵及消毒后再次被污染。使用前要包裝，首先要裝好濾膜，安裝時(shí)注意光面朝上 (凹向上 )，然后用注射器回抽注入檢查膜是否破損， 安裝好膜后將螺旋稍微 擰松一些，放入鋁盒內(nèi)（或用牛皮紙包裝）外層用紙包裝備用。 （ 2)塑料器皿 :塑料器皿經(jīng)沖凈后，晾干，用 2％ NaOH浸泡過夜，自來水沖洗， 5％鹽酸浸泡 30min， 流水徹底沖洗 35遍，單蒸餾水漂洗 3遍，三（雙）蒸水漂洗 2遍，烘干備用。首先用自來水初步刷洗， 5％稀鹽酸溶液中浸泡過夜。3. 培養(yǎng)條件 ★ 氣體環(huán)境： 95％空氣加 5％ CO2混和氣體環(huán)境中。根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求，準(zhǔn)備各種所需器材和物品、清點(diǎn)無誤后將其放置到培養(yǎng)室、超凈臺(tái)內(nèi)，然后開始消毒。在工作臺(tái)面消毒時(shí)切勿將培養(yǎng)細(xì)胞和培養(yǎng)用液同時(shí)照射紫外線。一些操作用具如移液器、廢液缸。★ 超凈工作臺(tái) 臺(tái)面每次實(shí)驗(yàn)前要用 75％酒精擦洗，然后紫外線消毒 30 min。因而，每一項(xiàng)工作都必須做到有條不紊和完全可靠，特別是實(shí)驗(yàn)環(huán)境更為重要。 實(shí)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)◆ 在細(xì)胞培養(yǎng)中注意的一些問題◆ 細(xì)胞培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)程序◆ 細(xì)胞的復(fù)蘇 ◆ 細(xì)胞的計(jì)數(shù) ◆ 細(xì)胞 (貼壁 )的 傳代培養(yǎng) ◆ 細(xì)胞的凍存◆ 懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)方法 在細(xì)胞培養(yǎng)中注意的一些問題 環(huán) 境 由于體外培養(yǎng)細(xì)胞沒有抗感染能力，若實(shí)驗(yàn)者粗心大意，技術(shù)操作不規(guī)范，也會(huì)導(dǎo)致污染。 ★ 培養(yǎng)室 無菌培養(yǎng)室每天都要用速消凈或 ％的新潔而滅（苯扎溴銨）拖洗地面一次（拖布要專用），紫外線照射消毒 30～ 50min。 消毒時(shí)工作臺(tái)面上用品不要過多或重疊放置，否則會(huì)遮擋射線，降低消毒效果。污物盒、試管架等用 75％酒精擦洗后置于臺(tái)內(nèi)同時(shí)紫外線照射消毒。2. 培養(yǎng)前準(zhǔn)備 在開始實(shí)驗(yàn)前要制定好詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)計(jì)劃和操作程序，有關(guān)數(shù)據(jù)的計(jì)算要事先做好。這樣可以避免開始實(shí)驗(yàn)后，因物品不全往返拿取而增加污染機(jī)會(huì)。 ★ PH值： ～ ★ 溫度： 37℃ 培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)用品的前期處理 :(1)玻璃器皿 :新的玻璃器皿在生產(chǎn)過程中常使玻璃表面呈堿性，并帶有一些如鉛和砷等對(duì)細(xì)胞有毒的物質(zhì)，使用前必須徹底清洗。然后用流水徹底沖洗 35遍，單蒸餾水漂洗 3遍，三（雙）蒸水漂洗 2遍，烘干備用。針頭式濾器不能泡酸液 ,用 2％ NaOH泡 6～ 12小時(shí) ,或者煮沸 20分鐘 ,常規(guī)沖洗干凈，烘干（ 60℃ 以下）備用。注意在超凈臺(tái)內(nèi)取出使用時(shí)應(yīng)該立即將螺旋旋緊；膠塞的處理：按常規(guī)沖洗干凈烘干后，用 2％氫氧化鈉溶液煮沸30分鐘（用過的膠塞要置入單蒸水中浸泡，再用沸水處理 30鐘），自來水洗凈，烘干然后再泡入 1％稀鹽酸液中 30分鐘，用自來水徹底沖洗 35遍，蒸餾水漂洗 3遍，三（雙）蒸漂洗 2遍，烘干備用。包裝紙（盒）表面用油性記號(hào)筆標(biāo)明物品名稱、消毒日期等。防止培養(yǎng)物污染可通過消毒滅菌（將已存在的微生物去除）和無菌操作技術(shù)（防止已經(jīng)消毒滅菌的用品被污染）來完成。 (2)消毒滅菌的時(shí)間： ★ 干熱消毒：一般在烤箱中進(jìn)行，需加溫到 160℃ ，保持 90～ 120 min方能殺死芽孢。 ★ 濕熱消毒：一般使用高壓蒸汽滅菌器進(jìn)行消毒，要求是： ◆ 不能裝太滿，保持消毒器內(nèi)氣體流
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