【正文】 胞系的演化）? 每代細胞的生長過程216。（ 2）在體外細胞培養(yǎng)時，除癌細胞和血細胞外，正常的動物細胞都有貼附于支持物上生長的特性，并且會因發(fā)生 接觸抑制 而停止分裂和增殖。是區(qū)分正常細胞和癌細胞的標志之一? 密度抑制 (density inhibition)非貼壁依賴型 (懸浮生長型細胞 suspend cell)： 來源于血液、淋巴組織的細胞、雜交瘤細胞、腫瘤細胞和轉(zhuǎn)化細胞小鼠 T細胞 生長特點? 貼附： 貼附并伸展是貼壁型細胞體外培養(yǎng)時的基本生長特點? 接觸抑制 (contact inhibition) 細 胞株： lovo呈梭形，表面有 許 多微 絨 毛，并伸出 許 多 偽 足 (4080) 人肝腫瘤細胞游走 細 胞型： 胞 質(zhì) 常突起，呈活 躍 游走或 變 形運 動 ，方向不 規(guī)則 ，貼在支持物表面 呈散在生 長 ，一般不 連 成片。216。（體外條件下同樣）?上皮細胞型?成纖維細胞型?游走細胞型?多形型細胞按照培養(yǎng)細胞的主要形態(tài)，可分為上皮細胞型：成 纖維細 胞型：216。）二、動物細胞的特點 類型 特點 特性體外培養(yǎng)動物細胞類型216。?2022年，英國成功培育出世界首批轉(zhuǎn)基因克隆豬 ,適用于人體移植手術(shù)使用的動物器官 。 英國組裝成功了綿羊和山羊的嵌合體—— 綿山羊。2. 大發(fā)展時期 細胞融合技術(shù)使得人們可以在細胞水平上進行生命組合。v70年代至 80年代，利用動物細胞培養(yǎng)獲得蛋白等生物制品迅速發(fā)展，在醫(yī)學(xué)中發(fā)揮巨大作用。 v1958年 , Okada發(fā)現(xiàn)紫外滅活仙臺病毒可引起艾氏腹水瘤細胞彼此融合。1975年，免疫學(xué)家 Kohler和 Milstein利用仙臺病毒誘導(dǎo)綿羊紅細胞免疫的小鼠脾細胞與小鼠骨髓瘤細胞融合，選擇到能分泌單一抗體的雜種細胞。60年代， Harris(1965)誘導(dǎo)不同動物體細胞融合獲得成功并培養(yǎng)存活。如 ATCC美國標準細胞庫 ,1985年成立了中國典型培養(yǎng)物保藏中心 :1990年中科院建立了細胞庫。v Hayflick(1961)首建人二倍體細胞系 25種。v1951年， Earle等人開發(fā)了供動物細胞體外培養(yǎng)的培養(yǎng)基?？ㄊ狡靠梢暂^好地保證無菌環(huán)境，為細胞提供生長空間。v1923年 ,卡雷爾在懸滴培養(yǎng)的基礎(chǔ)上，設(shè)計了用 卡氏瓶 培養(yǎng)離體的動物組織 ，使組織培養(yǎng)進入一個迅速發(fā)展的階段。v 1907年，美國的 Harrison(哈里森 )采用蓋玻片懸滴培養(yǎng)蛙胚神經(jīng)組織，觀察到了細胞生長現(xiàn)象，開創(chuàng)了動物細胞培養(yǎng)先河。（維持其結(jié)構(gòu)和功能不變，維持細胞的分化狀態(tài)）動物細胞培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用：A、 生產(chǎn)蛋白質(zhì)生物制品 病毒疫苗、干擾素、單克隆抗體等B、 大面積燒傷病人皮膚移植C、 檢測有毒物質(zhì)D、 利用培養(yǎng)的 正常 或 病變細胞 為治療疾病提供理論依據(jù) 生理研究 病理、藥理研究一、動物細胞工程史二、動物細胞的特點三、 動物細胞培養(yǎng)方法四、影響動物細胞生長的環(huán)境因素五、動物細胞大規(guī)模培養(yǎng)六、組織工程七、器官培養(yǎng)八、干細胞一、動物細胞工程史第四章 動物細胞與組織培養(yǎng)動物細胞培養(yǎng)、組織培養(yǎng)和器官培養(yǎng)? 動物細胞培養(yǎng) 指將動物的某一組織取出，分散成單細胞，在人工培養(yǎng)條件下使之存活、生長和增殖的技術(shù)；? 動物組織培養(yǎng) 指從動物體內(nèi)取出組織并模擬體內(nèi)生理環(huán)境，使之在體外人工條件下生存和生長，并維持其結(jié)構(gòu)和功能不變的技術(shù)；（ 生長暈， outgrowth， 組織周圍形成的單層貼壁生長細胞）? 器官培養(yǎng) ： 模擬體內(nèi)生理環(huán)境，將整個器官、器官的部分或器官的原基進行培養(yǎng)，使之在體外存活、生長和保持一定功能的技術(shù)。v1911年， Carrel發(fā)現(xiàn)了雞胚浸出液對于培養(yǎng)細胞的生長促進作用，并首次把無菌技術(shù)引入組織培養(yǎng)技術(shù)中。 培養(yǎng)瓶的形狀主要是適合細胞貼壁生長和顯微鏡觀察的扁平形狀。為動物細胞體外大量培養(yǎng)發(fā)揮了重要作用。v Gey(1951)首建人腫瘤細胞 —— Hela細胞系。 （世界各國建立統(tǒng)一細胞貯存庫。） v細胞融合技術(shù)的建立和雜交瘤技術(shù)的誕生 1958年 , Okada發(fā)現(xiàn)紫外滅活仙臺病毒可引起艾氏腹水瘤細胞彼此融合。Lifflefield(1964)根據(jù)親本細胞的酶缺陷型，利用 HAT選擇性培養(yǎng)基能使親本細胞死亡而只留下異型融合細胞，并能不斷地增殖，從此形成了細胞融合到雜種細胞選擇、培養(yǎng)的一整套技術(shù)。該雜種細胞具有在小鼠體內(nèi)和體外培養(yǎng)條件下大量繁殖的能力，并能長期地分泌單克隆抗體，從而建立了小鼠淋巴細胞雜交瘤技術(shù)。v1965年，哈里斯和沃特金斯證明了滅活的病毒在控制條件下可誘導(dǎo)細胞融合。 美國耶路大學(xué)組裝出一只黃、白、黑毛的雜毛鼠。? 1977年，英國采用胚胎技術(shù)成功培育出世界上首例試管嬰兒；? 2022年結(jié)婚， 2022年自然分娩一男嬰；? 全球試管嬰兒已超 300萬?1997年，英國首次克隆出了體細胞動物綿羊“ 多莉 ” 。2022年 3月 26日美國科學(xué)家培育出首只人獸羊，有 15％的部分屬于人類（喀邁拉（ Chimera），是古希臘神話中一個長著獅子頭、羊身體、蛇尾巴的吐火怪物。 貼壁依賴型 （ anchroagedependent cell)： 有機體的決大多數(shù)細胞必須貼附在某一固相支持物上才能生長。呈梭型或不 規(guī)則 三角形，胞 質(zhì) 突起，生 長時 呈放射狀。起源于 中胚 層 的 組織 ，如心肌、平滑肌、成骨 細胞、血管內(nèi)皮等常呈本型狀 態(tài) 。此型 細 胞不 穩(wěn) 定，有 時難 以和其他細 胞相區(qū) 別 。人大 腸 癌 掃 描 電鏡圖 多 形 細 胞型： 有一些 細 胞，如神 經(jīng)細 胞 難以確定其 規(guī) 律和 穩(wěn) 定的形 態(tài) ，可 統(tǒng)歸 于此 類 。神經(jīng) 膠 質(zhì) 細 胞 和 神 經(jīng) 元 細 胞216。： 細胞由于接觸而抑制運動的現(xiàn)象。： 培養(yǎng)液中營養(yǎng)減少，細胞密度增大，導(dǎo)致細胞分裂停止；（ 1）與植物細胞不同，動物細胞除卵細胞外，都 只有遺傳上的全能性 而沒有細胞的全能性。（ 3）所有高等動物的正常細胞都是 有壽限的，細胞分裂最多不能超過 50代次；而植物細胞沒有壽限。 原代培養(yǎng)： 直接從機體取出 細胞、組織、器官立即進行培養(yǎng)（制成細胞懸浮液）到 再一次轉(zhuǎn)接重新培養(yǎng)的一段時間。 傳代培養(yǎng)： 原代培養(yǎng)的細胞繼續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)的過程。 細胞系 有限細胞系（ finiteline） ： 細胞系生存有限，傳到一定代數(shù)即停止生長； cell：能維持無限繁殖能力，可以連續(xù)傳代的細胞系；216。216。（個 /平方厘米；個 /立方厘米）相 概 整個細胞群體生長過程 (細胞系的演化） ：原代培養(yǎng)期 傳代期衰退期培養(yǎng)細胞不同時期特點時 期 特點原代培養(yǎng)期(14周）細 胞呈活 躍 移 動 ，可 見細 胞分裂，但不旺盛。 是 進 行疫苗制 備 、 藥 物 檢測 和移植的最好 時 期。傳 代期（ 10代）細 胞分裂旺盛、生 長 活 躍 ；增殖力 強 的 細 胞逐漸 占據(jù) 優(yōu)勢 ，形成主干 細 胞群（ 選擇 性生 長 ）。此期 細 胞仍然生存，但增殖很慢或不增殖； 細胞 輪 廓增 強 ，最后逐 漸 衰退、凋亡。培養(yǎng)細胞生長曲線（單培養(yǎng)周期） ? 指數(shù)增生期 (35天） ：增殖旺盛階段 ,活力最好 ,數(shù)量增多 , 密度增大，發(fā)生接觸抑制 ,運動停止；? 平臺期（停止期）： 細胞量達飽合密度、不增殖 ,進一步發(fā)展細胞脫落、死亡。轉(zhuǎn)化細胞 ： 利用物理 \化學(xué)因子或病毒感染等人工方法獲得的細胞系腫瘤癌細胞 ： 自發(fā)形成的轉(zhuǎn)化細胞 ,又叫永生細胞 平衡鹽水pH值調(diào)整液細胞消化液抗生素溶液? 動物細胞培養(yǎng)過程? 培養(yǎng)方法? 動物細胞組織培養(yǎng)污染的防治 常用： 牛血清（小牛血清、胎牛血清）和馬血清?天然培養(yǎng)基三、動物細胞培養(yǎng)方法? 天然培養(yǎng)基? 合成培養(yǎng)基? 無血清培養(yǎng)基? 其他常用液：? 常用： 19 109培