【正文】 果培育出衣袖、后襟和領(lǐng)子一應(yīng)俱全的皮大衣。? “ 繁殖 ” 肉 ? “ 消除種族區(qū)別 ” 皮膚替代物美國(guó) FDA批準(zhǔn)美國(guó)加利福尼亞州一家公司生產(chǎn)的商品名為 TransCyte的皮膚替代物進(jìn)入市場(chǎng)。它由取自皮膚真皮或表皮層的細(xì)胞在一個(gè)生物可降解的聚合物上生長(zhǎng)而成。TransCyte能作為創(chuàng)口的臨時(shí)覆蓋物，可用于 2度或 3度燒傷的病人。BodyPartShack肢體臟器量販店四、實(shí)例： 哈佛醫(yī)學(xué)院 獵犬膀胱首先，從獵犬膀胱的外表面獲取平滑肌細(xì)胞，在膀胱內(nèi)表面獲取尿上皮細(xì)胞，在體外培養(yǎng)。其次，應(yīng)用多分支的、多孔滲水的聚羥基乙酸聚合體，塑造了一個(gè)膀胱形狀的模子，再在其表面涂上聚乳酸類物質(zhì)。第三步，將尿上皮細(xì)胞加到聚合體膀胱的內(nèi)表面，平滑肌細(xì)胞加到外表面，然后進(jìn)行無菌培養(yǎng)。7天后，通過外科手術(shù)，用新生長(zhǎng)成的膀胱分別替代 6只小獵犬的正常膀胱。3個(gè)月后，聚合體在新膀胱組織中消失，小獵犬的機(jī)體開始用自身的血管供應(yīng)新膀胱，新膀胱和正常的膀胱一樣能容納尿液，并維持正常的膀胱形態(tài)，甚至還接受機(jī)體神經(jīng)支配?？椆こ堂媾R的挑戰(zhàn) ? 零部件工廠? 欲求之特性? 面向患者小結(jié)七、器官培養(yǎng)? 定義和特點(diǎn)? 培養(yǎng)技術(shù)? 實(shí)例? 研究進(jìn)展 特點(diǎn)? 器官培養(yǎng) 主要采用類似于組織培養(yǎng)中植塊培養(yǎng)的方式培養(yǎng)器官型植塊。? 特點(diǎn)：培養(yǎng)對(duì)象為胚胎組織的某一器官或非胚胎組織器官的一部分；被培養(yǎng)物浸泡在培養(yǎng)液中，細(xì)胞增殖，器官保持正常功能；被培養(yǎng)組織器官的細(xì)胞靠簡(jiǎn)單的深透擴(kuò)散方式從培養(yǎng)液中獲得氧氣和其他營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，并排泄廢物。胚胎器官培養(yǎng) ：可整體培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)不需要補(bǔ)充氧，細(xì)胞生長(zhǎng)活躍，遷移能力強(qiáng)。成年器官培養(yǎng)： 對(duì)氧的要求高，細(xì)胞高度分化，內(nèi)部細(xì)胞的遷移不明顯。培養(yǎng)時(shí)注意兩個(gè)基本原則：? 提供充足的營(yíng)養(yǎng)和氧，及時(shí)排除代謝廢物；? 要抑制細(xì)胞從植塊向外遷移。血管的培養(yǎng)材料：成年哺乳動(dòng)物的胸動(dòng)脈，固定后剖開胸部，取出胸動(dòng)脈，用培養(yǎng)液沖洗動(dòng)脈內(nèi)壁，剪成 左右的動(dòng)脈管。，加入 10ml左右的培養(yǎng)液，并向培養(yǎng)瓶中通入 95％氧和 5％ CO2的混合氣體，加塞。 37度培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。? 最早是由 Leob在 1897年對(duì)成年兔的一些器官進(jìn)行了嘗試性培養(yǎng)， 3天內(nèi)保持正常。? 20世紀(jì)初，利用胚胎器官培養(yǎng)的研究活躍； 20世紀(jì) 50年代，器官培養(yǎng)進(jìn)入蓬勃發(fā)展階段。? 西南醫(yī)院利用裸鼠培養(yǎng)出的小鼠的腎臟。? 目前，培養(yǎng)的人體器官已達(dá) 18種以上。指骨、動(dòng)脈、腎臟、乳房、人造膀胱、人造角膜都在積極的實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)階段，有待于應(yīng)用。? 定義? 特性和分類? 培養(yǎng)和建系? 應(yīng)用八、干細(xì)胞培養(yǎng)? 干細(xì)胞（ stemcells） 是一種具有多分化潛能和自我復(fù)制功能的早期未分化細(xì)胞。在一定條件下 ， 它可以分化成多種功能細(xì)胞 ， 形成多種組織和器官。? （ 干 細(xì) 胞 :哺乳 動(dòng) 物的 許 多已分化 組織 和器官中都保留了一些能 夠 分裂形成 該組織 或器官的未分化原始 細(xì) 胞， 這 些 細(xì) 胞稱 為 干 細(xì) 胞。 ）? 形態(tài)： 呈圓形或橢圓型、體積小、核質(zhì)比例較大（ 圖 ）；具有較高的端粒酶活性， 因此具有 較 強(qiáng) 增殖能力。? 增殖 ：增殖速度較慢，利于進(jìn)入特定分化程序，避免產(chǎn)生自身突變。自穩(wěn)性，干細(xì)胞會(huì)自我更新維持自身數(shù)目。生長(zhǎng)在培養(yǎng)液中的人胚胎干細(xì)胞(周圍是小鼠“喂養(yǎng)”細(xì)胞)從 分化潛能性 分單能干細(xì)胞：分裂產(chǎn)生的子細(xì)胞只能分化為單一類型的細(xì)胞。如：表皮干細(xì)胞。多能干細(xì)胞：能夠形成兩種或兩種以上類型細(xì)胞的干細(xì)胞。如：骨髓造血干細(xì)胞全能干細(xì)胞：具有無性分化潛能的干細(xì)胞。能專門分化胚胎和胚后期組織、器官。從 來源 分成體干細(xì)胞：成體組織中具有自我更新及分化產(chǎn)生子代細(xì)胞的未成熟細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞（ ESC）： 著床前胚胎內(nèi)細(xì)胞團(tuán)或原始生殖細(xì)胞經(jīng)體外分化抑制培養(yǎng)分離的一種全能性細(xì)胞系，可分化成任何一種組織類型的細(xì)胞。干細(xì)胞分類把小鼠胚胎干細(xì)胞植入小鼠大腦（見左圖的藍(lán)色背景）之后，形成了類似于神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞（見左圖棕色部分及右圖）干細(xì)胞發(fā)育成神經(jīng)細(xì)胞(1).ESC的獲得：桑椹胚、囊胚。小鼠選用 16－ 20細(xì)胞的桑椹胚；牛取 6－ 7天的桑椹胚或 7－ 8天的囊胚；人取 7－ 8天的囊胚。：哺乳動(dòng)物原始生殖細(xì)胞最早出現(xiàn)在靠近尿囊基部的卵黃囊內(nèi)胚層，后期移向生殖脊。大鼠取 － 的生殖脊；人取 5－ 9周齡的胎兒背腸系膜或生殖脊。（ 2） .建系過程 ： ES細(xì)胞體外培養(yǎng)極易分化或喪失正常二倍體核型，必須進(jìn)行分化抑制培養(yǎng)。采用飼養(yǎng)層抑制物 ：選用 STO（ 小鼠胎兒成纖維細(xì)胞） 、 UE（ 子宮上皮細(xì)胞） 等細(xì)胞以絲裂霉素 C阻斷有絲分裂后制備成細(xì)胞單層。使用條件培養(yǎng)基 ：飼養(yǎng)單層細(xì)胞培養(yǎng)一定時(shí)間后，收集細(xì)胞培養(yǎng)液，處理后加入培養(yǎng)基中 ?；蛑苯酉蚧九囵B(yǎng)基中添加細(xì)胞分化抑制因子 LIF(白血病抑制因子 )。 ：內(nèi)細(xì)胞團(tuán)（ ICM)細(xì)胞，經(jīng)消化、分散后，進(jìn)行抑制分化培養(yǎng)，獲得 ES細(xì)胞；擴(kuò)增培養(yǎng)，建立細(xì)胞系， 2天換液一次， 3－ 4天繼代一次。（ 3） .培養(yǎng)和誘導(dǎo)分化? ES細(xì)胞培養(yǎng) 方法和分化抑制培養(yǎng)相似，采用飼養(yǎng)層培養(yǎng)法和無飼養(yǎng)層培養(yǎng)法。? 誘導(dǎo)分化：加入一些無機(jī)物或有機(jī)酸等，使胚胎細(xì)胞滲透壓改變導(dǎo)致輕度損傷，誘導(dǎo)細(xì)胞分化。加入類固醇激素、多肽因子等誘導(dǎo)物與被誘導(dǎo)細(xì)胞表面受體結(jié)合而誘導(dǎo)分化。誘導(dǎo)分化得到特定的細(xì)胞和組織，在組織、器官修復(fù)和基因治療方面具有重要應(yīng)用。? （ 1）應(yīng)用干細(xì)胞 治療疾病 有著廣泛的前景?！　∧壳?，在干細(xì)胞生物學(xué)上已能在體外鑒別、分離純化、擴(kuò)增和培養(yǎng)人體胚胎干細(xì)胞、原始生殖干細(xì)胞以及多種組織干細(xì)胞。 用干細(xì)胞治療疾病的設(shè)想已進(jìn)入實(shí)踐檢驗(yàn)。造血干細(xì)胞工程 產(chǎn)品如骨髓、擴(kuò)增及定向誘導(dǎo)分化的造血細(xì)胞和免疫細(xì)胞、轉(zhuǎn)基因的基質(zhì)細(xì)胞等，已經(jīng)進(jìn)入臨床應(yīng)用。 造血干細(xì)胞移植已成為治療白血病、各種惡性腫瘤放、化療后引起的造血和免疫系統(tǒng)功能障礙等疾病的重要手段。（ 2）干細(xì)胞為解決 組織工程所需要的細(xì)胞 帶來了希望?！　〗M織工程用來修補(bǔ)由于意外損傷等引起功能喪失的體內(nèi)組織，滿足臨床康復(fù)的需要，并有可能對(duì)一些目前尚無根治辦法的疾病，如惡性腫瘤、帕金森病、中風(fēng)等提供解決方案。 以干細(xì)胞工程為代表的現(xiàn)代組織工程是一個(gè)迅速發(fā)展的新領(lǐng)域 。干細(xì)胞的產(chǎn)生及進(jìn)行組織修復(fù)產(chǎn)生人胚胎干細(xì)胞的胚泡 胚胎干用病人的 體細(xì)胞移植 到 去核的卵母 細(xì)胞內(nèi)，經(jīng)過一定的處理使其發(fā)育成囊胚，再利用囊胚建立細(xì)胞，在體外進(jìn)行誘導(dǎo)分化成特定的組織或器官，再將這些組織或器官移植到病人身上。 利用干細(xì)胞技術(shù)，將從根本上解決同種異體器官移植過程中最難的 免疫排斥反應(yīng) 問題，同時(shí)還較好地解決了 組織器官的來源 問題。（ 3）利用干細(xì)胞技術(shù) 體外克隆人體器官 用于移植治療?！　? （ 4）干細(xì)胞研究將大大 改進(jìn)藥品研制和進(jìn)行安全性實(shí)驗(yàn) 的方法?！　⌒碌乃幬镏委煼椒梢韵扔萌祟惣?xì)胞系進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如癌細(xì)胞系。 胚胎干細(xì)胞提供了新藥的藥理、藥效、毒理及藥物代謝等細(xì)胞水平的研究手段，大大減少了藥物實(shí)驗(yàn)所需動(dòng)物的數(shù)量。 胚胎干細(xì)胞還可用來研究人類疾病的發(fā)生機(jī)制和發(fā)展過程，以便找到持久有效的治療方法。干細(xì)胞技術(shù)治療疾病要解決 4個(gè)問題：一、 來源 ：研究發(fā)現(xiàn)脂肪中一些細(xì)胞可發(fā)育成健康組織，可能代替從胚胎組織或骨髓中提取干細(xì)胞；二、如何把干細(xì)胞轉(zhuǎn)化成病人所需的功能細(xì)胞；三、如何克服免疫排斥；四、如何誘導(dǎo)干細(xì)胞形成一個(gè)具有一定解剖結(jié)構(gòu)的臟器。 此外，還存在一些倫理道德上的爭(zhēng)論。 干細(xì)胞的研究和應(yīng)用的難點(diǎn)第四章 動(dòng)物細(xì)胞與組織培養(yǎng)一、發(fā)展史二、動(dòng)物細(xì)胞的特點(diǎn)三、動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)方法四、影響動(dòng)物細(xì)胞生長(zhǎng)的環(huán)境因素五、動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)六、組織工程七、器官培養(yǎng)八、干細(xì)胞章160