細(xì)胞工程第4章動物細(xì)胞培養(yǎng)工程-資料下載頁
2025-08-23 17:34本頁面
【正文】 產(chǎn)品制備 A、初級分離 —— 離心、過濾、吸附 B、 純化 —— 色譜法 C、 制劑與冷凍干燥 4． 7． 2 動物細(xì)胞工程產(chǎn)品的質(zhì)量控制 PAGE 純度 SDSPAGE 液相色譜 A、物化指標(biāo)測定 含量 B、安全性評介 分子量 C、穩(wěn)定性 4． 8 動物細(xì)胞工程表達(dá)產(chǎn)品的應(yīng)用 4． 8． 1 重組蛋白藥物 A、 組織型纖溶酶原活化劑 （ tPA） 突變體 Tenecteplase， 商品名 TNKaseTM， 急性心肌梗死病人溶栓治療 ， 人 tPA基因位于 8號染色體 ， 全長 36594bp， 14個外顯子 ， 13個內(nèi)含子 ， tPA由 527個氨基酸 ， 單鏈糖蛋白 ， 開始 酵母表達(dá) ， 不能分離純化 tPA突變體，由雙鏈糖蛋白， 現(xiàn)用 CHO細(xì)胞高效表達(dá)成功（參見下圖） B、 β干擾素（ IFNβ） 最早 ， 為一種在同種細(xì)胞上具有廣譜抗病 毒活性的蛋白質(zhì) ， 普遍存在于個體脾 、 肝 、 腎 、 淋巴細(xì)胞 、 骨髓 ， 被多因素誘發(fā) ， 現(xiàn)為 一組多功能細(xì)胞因子 ， 具有抗病毒 、 腫瘤活 性 ， 調(diào)節(jié)免疫反應(yīng) ， 控制細(xì)胞生長與分化 ， 天然 IFNβ—— 刺激體外培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞 ， 大腸桿菌表達(dá) ， 活性低 ， 不穩(wěn)定 ， Cys17形成二硫鍵 ， 缺少 NMet， 無糖基化 重組 IFNβ 點(diǎn)突變改造 ， 使 Cys17變?yōu)橹行园被?， 如：絲 、 酪氨酸 ， 商品名為： IFNβ1b CHO細(xì)胞表達(dá)，與天然一樣，天然糖基化， 分離簡單。 C、新型紅細(xì)胞生成刺激蛋白（ NESP） D、血友病 —— 缺少凝血因子 Ⅶ （ FⅦ ）或含量過低疾病 4． 8． 2 MAb藥物（參見下圖） —— 因?yàn)轶w內(nèi)同一抗原具多個表位 ， 刺 激機(jī)體產(chǎn)生不同抗體 （ 多克隆抗體 ） 雜交瘤技術(shù)能將多克隆抗體純化為具 有高度均一性，抗原識別專一性的 MAb， 降低抗原識別交叉反應(yīng)； 4． 8． 3基因工程與亞單位疫苗 A、乙肝疫苗（參見下圖） 衣殼 —— 衣殼表面抗原（ HBsAg）， 核心抗原 —— 核心抗原（ HBcAg）、 e抗原（ HBeAg）和核酸 第一代疫苗 ， 血中提取 ， 弱反應(yīng) ， 10%不產(chǎn)生反應(yīng) ， 8182年 ， 美法 ， 85年 ， 中國 第二代疫苗 ， 在哺乳細(xì)胞或 CHO細(xì)胞表達(dá) ， 81年 ， 法美 ， 9 92年 ， 中國 第三代疫苗， PreS抗原（重要作用）， CHO細(xì)胞表達(dá) B、艾滋病疫苗（參見下圖） CHO表達(dá)疫苗 —— 理論上 ， 有致瘤性 昆蟲細(xì)胞表達(dá)疫苗 —— 昆蟲細(xì)胞 桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng) （安全性好，容量大，表達(dá)效率高） C、腫瘤疫苗 滅活自體腫瘤細(xì)胞 對細(xì)胞因子基因修飾， 主動 加強(qiáng)疫苗免疫原性 免疫 同種異體的腫瘤細(xì)胞 樹突狀細(xì)胞（抗原提呈細(xì)胞） 體內(nèi)外誘導(dǎo) CTL生成 激發(fā)特異性抗腫瘤免疫功能 4． 8． 4 基因治療產(chǎn)品 基因治療（ gene therapy） — — 是指把外界 的正?；蚧蛑委熁蛲ㄟ^載體轉(zhuǎn)入特定靶 細(xì)胞，以最終預(yù)防或改變特殊疾病狀態(tài)的治 療方法?；虻霓D(zhuǎn)移可通過物理或化學(xué)的方 法，也可通過各種病毒或非病毒載體的介導(dǎo)， 還可通過改造細(xì)胞（造血干細(xì)胞、成纖維細(xì) 胞、骨髓肌細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞）進(jìn)行 細(xì)胞治療。 A、神經(jīng)系統(tǒng)疾病的基因或細(xì)胞治療： B、造血干細(xì)胞治療癌癥 HSC基因（參見下圖） 胰島素依賴型 （ I） C、 細(xì)胞 、 基因 代謝 治療糖尿病 紊亂 非胰島素依賴型（ II） 【 習(xí)題 】 名詞解釋，并簡要說明它們間關(guān)系： 單抗與疫苗 CHO、 BHK與 Vero tPA與 EPO 艾滋病疫苗與腫瘤疫苗 從多個方面比較動植物細(xì)胞與微生物細(xì)胞培 養(yǎng)特性、條件與方式？ 簡述生產(chǎn)用動物細(xì)胞系的來源及特點(diǎn)？ 概述肝癌單抗片段 HAB18F(ab’)2無血清流 加培養(yǎng)工藝技術(shù)流程？
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