動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)-資料下載頁
2025-08-04 15:15本頁面
【正文】 在培養(yǎng)瓶中長滿后就需要將其稀釋分種成多瓶，細(xì)胞才能繼續(xù)生長。這一過程就叫傳代。傳代培養(yǎng)可獲得大量細(xì)胞供實(shí)驗(yàn)所需。傳代要在嚴(yán)格的無菌條件下進(jìn)行，每一步都需要認(rèn)真仔細(xì)的無菌操作。原代培養(yǎng)細(xì)胞在瓶壁匯合后，需進(jìn)行分離再培養(yǎng)，否則會(huì)因細(xì)胞密度過大，或生存空間不足、營養(yǎng)不夠?qū)е录?xì)胞衰老、停止生長甚至死亡。細(xì)胞的再培養(yǎng)，即將原代培養(yǎng)瓶內(nèi)的細(xì)胞分離、稀釋、接種到新培養(yǎng)瓶|內(nèi)繼續(xù)擴(kuò)增培養(yǎng)。原代培養(yǎng)的首次傳代稱為第二代，是建立細(xì)胞系的關(guān)鍵時(shí)期。首次傳代時(shí)，細(xì)胞接種數(shù)量要多，使細(xì)胞盡快適應(yīng)新環(huán)境，有利于二細(xì)胞的生存和增殖。通常，原代細(xì)胞按l：2分種傳代。生長快的細(xì)胞系(株)按l：4分種傳代。根據(jù)細(xì)胞生長特點(diǎn)，傳代方法有三種：懸浮生長細(xì)胞傳代；半懸浮生長細(xì)胞傳代；貼壁生長細(xì)胞傳代。實(shí)驗(yàn)材料材料原代培養(yǎng)的細(xì)胞（肝或腎或脾細(xì)胞）儀器與用具二氧化碳培養(yǎng)箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺(tái)、移液槍、酒精燈。試劑培養(yǎng)液，Hanks液，胰蛋白酶液實(shí)驗(yàn)步驟，一般經(jīng)過7d左右可形成致密單層細(xì)胞。，用1 ml Hanks液洗一遍(若需收集分裂細(xì)胞，則輕輕振動(dòng)培養(yǎng)瓶。將貼壁疏松的有絲分裂球形細(xì)胞振人培養(yǎng)液內(nèi)，最后移入離心管中）。 ml胰蛋白酶液，翻轉(zhuǎn)培養(yǎng)瓶，使消化液浸泡細(xì)胞面。30s后，立即終止消化。終止消化的方法為：加培養(yǎng)液，用吸管頭輕輕地、有序地吹打瓶壁細(xì)胞(從瓶底到瓶口，從瓶的一側(cè)到另一側(cè)，注意吹打邊角細(xì)胞)，細(xì)胞從支持物上脫落，并彼此分離懸浮于水中，液體混濁。，37℃5% CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
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