植物細(xì)胞培養(yǎng)ppt課件-在線瀏覽
2025-06-18 02:17本頁面
【正文】 進(jìn)行動(dòng)態(tài)的測(cè)定，以掌握其生長(zhǎng)的基本規(guī)律，為繼代培養(yǎng)或其他研究提供依據(jù)。可用 5%~8%鉻酸或 %的果膠酶對(duì)細(xì)胞團(tuán)進(jìn)行處理 生長(zhǎng)速率 p P=（ lnxlnX0） /t X為 t時(shí)間的細(xì)胞密度， X0為起始細(xì)胞密度 B、細(xì)胞大小的測(cè)定技術(shù)（用顯微測(cè)微計(jì)） C、細(xì)胞體積：將一定量的細(xì)胞懸浮液放入放入 15ml刻度離心管中于 2022g離心 5min。 D、細(xì)胞的干重和鮮重。干重一般是將離心收集的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到預(yù)先稱重的濾紙片上，然后在 60℃ 烘 12h，在干燥器中冷卻后稱重。 E、有絲分裂指數(shù) 在一個(gè)細(xì)胞群體中，處于有絲分裂的細(xì)胞占總細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)稱為有絲分裂指數(shù)，指數(shù)越高，分裂進(jìn)行的速度越快。 一個(gè)成功的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)體系必須滿足三個(gè)條件： 懸浮培養(yǎng)物分散性良好，細(xì)胞團(tuán)較小，一般在30～ 50個(gè)細(xì)胞以下，在實(shí)際培養(yǎng)中很少有完全由單細(xì)胞組成的植物細(xì)胞懸浮系。懸浮系外觀為大小均一的小顆粒，培養(yǎng)基清澈透亮，細(xì)胞色澤呈鮮艷的乳白或淡黃色。 影響懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)的因素： 起始愈傷組織的質(zhì)量：松散性好、增殖快、再生能力強(qiáng)。 接種細(xì)胞密度：接種初期的細(xì)胞密度過低往往使延遲期加長(zhǎng)，懸浮細(xì)胞的起始密度一般在～ 105個(gè)細(xì)胞 /毫升，低于這一密度則會(huì)使細(xì)胞生長(zhǎng)延遲。 同一培養(yǎng)體系中，細(xì)胞不同步使懸浮細(xì)胞的分裂、代謝以及生理、生化狀態(tài)等更趨復(fù)雜化，所以人們一直希望通過一定的技術(shù)途徑，使同一培養(yǎng)體系中的細(xì)胞能保持相對(duì)一致的細(xì)胞學(xué)和生理學(xué)狀態(tài)，工作中常用的處理方法： 物理方法 1）分選法：通過細(xì)胞體積大小分級(jí)，直接將處于相同周期的細(xì)胞進(jìn)行分選，然后將同一狀態(tài)的細(xì)胞繼代培養(yǎng)于同一培養(yǎng)體系中。低溫處理可以提高培養(yǎng)體系中細(xì)胞同步化的程度。 2）抑制劑法 通過一些 DNA 合成抑制劑處理細(xì)胞，使細(xì)胞停留在 DNA 合成前期，當(dāng)解除抑制后，即可獲得處于同一細(xì)胞周期的細(xì)胞。 3）有絲分裂阻抑 用秋水仙素處理指數(shù)生長(zhǎng)的懸浮培養(yǎng)物，濃度一般控制在 %，處理時(shí)間以 46小時(shí)為宜。如果處理的細(xì)胞沒有足夠的生活力，不僅不能獲得理想的同步化效果，還可能造成細(xì)胞的大量死亡，因此在進(jìn)行同步化處理之前，細(xì)胞必須進(jìn)行充分的活化培養(yǎng)。 167。如果能將高抗、高產(chǎn)、高品質(zhì)的細(xì)胞株篩選出來，無疑會(huì)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益。 單細(xì)胞懸浮液的制備：分離的單細(xì)胞經(jīng)培養(yǎng)基洗滌 2次以后，調(diào)整密度為 5 105/ml 植板：將 1份已調(diào)整好密度的單細(xì)胞懸浮液與 4份 35℃ 的固體培養(yǎng)基充分混合均勻，然后均勻的平鋪在培養(yǎng)皿中，其厚度為 12mm。 植板率評(píng)估：它以能長(zhǎng)出細(xì)胞團(tuán)的單細(xì)胞在接種單細(xì)胞中所占的比例來表示。二是感光法，在暗室的紅光下將一印相紙放于欲計(jì)數(shù)的培養(yǎng)皿下，其上放一光源使培養(yǎng)皿中細(xì)胞團(tuán)印到相紙上，沖洗照片計(jì)數(shù)。 特點(diǎn)： （ 1）能在顯微鏡下追蹤單細(xì)胞分裂增殖形成細(xì)胞團(tuán)的全過程 （ 2）培養(yǎng)基少，營養(yǎng)和水分難以保持，pH值變動(dòng)幅度大，培養(yǎng)細(xì)胞僅能短期分裂。 一 . 概述 二 . 培養(yǎng)系統(tǒng) 三 . 植物細(xì)胞規(guī)模培養(yǎng)技術(shù)要點(diǎn)技術(shù)要點(diǎn) 四 .提高細(xì)胞次生代謝產(chǎn)物的途徑 五 . 細(xì)胞規(guī)?；囵B(yǎng)中的有關(guān)技術(shù)問題 植物細(xì)胞培養(yǎng)的特性 植物細(xì)胞較微生物細(xì)胞大得多，有纖維素細(xì)胞．細(xì)胞耐拉不耐扭，抵抗剪切力差； 培養(yǎng)過程生長(zhǎng)速度緩慢，易受微生物污染，需用抗生素； 細(xì)胞生長(zhǎng)的中期及對(duì)數(shù)期．易凝聚為直徑達(dá) 350JJm一 400Pm的團(tuán)塊，懸浮培養(yǎng)較難； 培養(yǎng)時(shí)需供氧，培養(yǎng)液粘度大； 具有群體效應(yīng)； 因?yàn)橛屑?xì)胞壁 , 培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)物滯留于細(xì)胞內(nèi)，產(chǎn)量較低； 細(xì)胞培養(yǎng)過程具有結(jié)構(gòu)與功能全能性 ,因而易分化 ,從而導(dǎo)致目的產(chǎn)物低于原植物體內(nèi)的濃度； 懸浮培養(yǎng)中要求有一定的細(xì)胞濃度，否則不生長(zhǎng)（ 25000~50000個(gè) /ML）。 機(jī)械攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 氣壓攪拌式培養(yǎng)系統(tǒng) 考慮到機(jī)械攪拌式反應(yīng)器的剪切作用難以避免，同時(shí)攪拌器轉(zhuǎn)動(dòng)的中軸往往是容易使培養(yǎng)物污染的部位，因此，發(fā)展出空氣提升式生物反應(yīng)器，但其缺點(diǎn)是攪拌不均勻 旋轉(zhuǎn)式培養(yǎng)系統(tǒng)： 一般用于產(chǎn)品中試或某些必需裂解細(xì)胞才能獲得目的產(chǎn)物的培養(yǎng)，其優(yōu)點(diǎn)是控制精確，處理靈活，缺點(diǎn)是培養(yǎng)體積較小。 （ 1） 平床培養(yǎng)系統(tǒng)。新鮮的細(xì)胞被固定在床底部由聚丙烯酰胺等材料編織成的無菌平墊上。培養(yǎng)床上的營養(yǎng)液再通過動(dòng)泵循環(huán)送回中，本系統(tǒng)設(shè)備較簡(jiǎn)單，比懸
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