植物組織培養(yǎng)第六章植物細(xì)胞培養(yǎng)-在線瀏覽
2024-12-03 12:13本頁面
【正文】 5 ★ 平板培養(yǎng)的操作技術(shù) ： 當(dāng)含 ％ 瓊脂的無菌培養(yǎng)基冷卻到 30～ 35℃ 呈融化狀態(tài)時(shí) ， 把 2ml濃縮的懸浮液接種進(jìn)去 ， 均勻混合倒入 9cm的培養(yǎng)皿中 ， 每培養(yǎng)皿 10ml， 培養(yǎng)皿中培養(yǎng)基固化后用石蠟密封 。 ? 缺點(diǎn) ： 通氣不好 。最早是由米爾（ Muir 1954）創(chuàng)立的。一個(gè)月以后單細(xì)胞可以長成肉眼可見的細(xì)胞團(tuán)， 2～ 3個(gè)月后從濾紙上取出放在新的培養(yǎng)基上直接培養(yǎng)。 陳傳紅 制作 2021 / 5 4）條件培養(yǎng)基培養(yǎng) （ condition medium culture） 在培養(yǎng)基中預(yù)先加入高密度的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，這些細(xì)胞就會向培養(yǎng)基中分泌一些物質(zhì)，使得利于單細(xì)胞或低起始密度的細(xì)胞群體有利于培養(yǎng)。 ★ 優(yōu)點(diǎn)： 明顯提高單細(xì)胞培養(yǎng)的成活率和分裂能力。細(xì)胞懸浮培養(yǎng)為植物細(xì)胞培養(yǎng)的工業(yè)化生產(chǎn)開辟了新的途徑。 ★ 方法類型： 分批培養(yǎng) （ 一次性生產(chǎn)采收提?。? 半連續(xù)培養(yǎng) （ 每隔一定時(shí)間更換培養(yǎng)液） 連續(xù)培養(yǎng) （封閉型與開放型） 陳傳紅 制作 2021 / 5 ★ 小規(guī)模： 利用 培養(yǎng)瓶 培養(yǎng)，震蕩條件下； ★ 大規(guī)模： 利用 生物反應(yīng)器 培養(yǎng)，提供可控制環(huán)境條件，以滿足細(xì)胞正常生長和生物合成的容器，具有攪拌和通氣裝置，使物料均勻混合，各組分和熱量在不同相際間傳遞。不僅節(jié)約能源，減少耕地占用面積，而且不受季節(jié)、地域的限制。 (3)可以通過特定的生物轉(zhuǎn)化途徑獲得勻一的有效成分。 陳傳紅 制作 2021 / 5 2）懸浮細(xì)胞的繼代培養(yǎng) ? 每培養(yǎng) 1~2周繼代 1次。 ? 對數(shù)生長期 （ logarithm phase ） 細(xì)胞數(shù)目迅速增長， ? 直線生長期 (linear phase)單位時(shí)間內(nèi)細(xì)胞數(shù)目增長大致恒定。 ? 靜止期 (stationary phase)細(xì)胞分裂停止，細(xì)胞數(shù)目恒定。 第二節(jié) 植物細(xì)胞生長和活力的測定 陳傳紅 制作 2021 / 5 細(xì)胞培養(yǎng)的同步化方法 使細(xì)胞同步分裂，提高有絲分裂指數(shù) (MI：所觀察的細(xì)胞總數(shù)中，正在進(jìn)行有絲分裂的細(xì)胞的百分率。 ★化學(xué)方法： ? 饑餓法： 控制營養(yǎng)液的供給 ? 抑制法： 添加化學(xué)抑制劑 ? 有絲分裂抑制法： 加入秋水仙素處理。方法簡便，適于現(xiàn)代種質(zhì)庫管理，材料恢復(fù)生長快。 ? (2) 超低溫保存： 陳傳紅 制作 2021 / 5 陳傳紅 制作 2021 / 5 5 單細(xì)胞培養(yǎng)的技術(shù)關(guān)鍵 ? 細(xì)胞的起始密度測定： 血球計(jì)數(shù)板 ★ 細(xì)胞密度 ：單位體積內(nèi)的細(xì)胞數(shù)目。在某一臨界密度以下，細(xì)胞不能分裂，甚至很快解體。 ? 植板率 = 形成細(xì)胞團(tuán)的數(shù)目 /接種的總細(xì)胞數(shù) 100% ? 影響植板率的因素有： 細(xì)胞起始密度、細(xì)胞活力 (對數(shù)期 )。 ? （ 2）熒光素雙醋酸脂（ FDA）染色法 ? （ 3） TTC法： 此法顯示細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的活性。 植物細(xì)胞活力測定 陳傳紅 制作 2021 / 5 第三節(jié)、植物細(xì)胞培養(yǎng)的應(yīng)用
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