細胞培養(yǎng)基礎知識ppt課件-在線瀏覽
2025-06-20 03:43本頁面
【正文】 養(yǎng) 板 培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿 移液管，移液槍 ? 常用玻璃器皿清洗 ? 浸泡（自來水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（ 24小時）、 ? 流水沖洗、蒸溜水浸泡和沖洗、 50℃ 烘干 清潔液的配制 2 細胞培養(yǎng)用液的配制 水：新鮮配置的三蒸水或去離子水 平衡鹽溶液：無 Ca2+、 Mg2+的緩沖液 PBS： NaCl g KCl g g KH2PO4 加水至 1000 ml ? 消化液 ： ? 胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵 ，除去細胞間粘蛋白及糖蛋白 ， 影響細胞骨架 ， 從而使細胞分離 。 ? 胰蛋白酶是一種黃白色 粉末 ， 用無 Ca2+、 Mg2+的PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是 ％ 。 ? 胰蛋白酶液消化時間： 210分鐘 。 ? 天然培養(yǎng)基 ： ? 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。 ? 成分復雜， 影響對某些實驗產(chǎn)物的提取和實驗結(jié)果的分析 。目前已設計出許多種培養(yǎng)基，如TC19 MEM、 RPMI16 DMEM等。 優(yōu)點 ：標準化生產(chǎn)，組分和含量相對固定。 ? 人工合成培養(yǎng)基只能維持細胞生存 ，要想使細胞生長和繁殖 ， 還需補充一定量的天然培養(yǎng)基 （ 如血清 ） 。 ⑤ 各種生長因子 ⑥ 轉(zhuǎn)移蛋白 ⑦ 不明成分 ? 一般說來．含 5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細胞可以維持細胞不死．但支持細胞生長一般需加 10％血清． ? 對于血清支持細胞生長的生物學效應已得到證明，但對血清中的復雜成分至今尚未完全清楚． ? 血清中不僅存在促細胞生長因子，同對也存在細胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細胞所反映的生物學特性是細胞和復雜血清因子的綜合反應。 ?無血清培養(yǎng)基由基礎培養(yǎng)基和替代血清的補充成分組成 。 ?無血清細胞培養(yǎng)基的使用保證了實驗結(jié)果的準確性 、 可重復性和穩(wěn)定性 ， 減少了細胞污染 ， 簡化了提純和鑒定各種細胞產(chǎn)物的程序 。 適用于某種細胞株的培養(yǎng)液 ， 很可能不適合另一種細胞株的生長 。 無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。 ?常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、馬血清等，其中以 胎牛血清 質(zhì)量最好。 ?血清的滅活（消除補體活性）： 56 ℃ ， 30 分鐘 ?血清的消毒：過濾除菌 抗生素的使用 ： 在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗生素，以抑制可能存在的細菌的生長。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位。 調(diào)節(jié) pH值至 加血清（終濃度 10
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