細胞培養(yǎng)知識-在線瀏覽
2024-09-15 10:10本頁面
【正文】 更多的細胞系生長。如在雜交瘤技術(shù)中常用的DMEM 培養(yǎng)液，使用時還需要補加丙酮酸鈉和2巰基乙醇（2Mercaptoethanol，2Me）。有人認為它相當(dāng)于胎牛血清，有直接刺激細胞增殖作用。同時避免過氧化物對培養(yǎng)細胞的損害。2Me 是一種小分子還原劑，極易氧化。 的儲存液。未加血清液體培養(yǎng)基有效期為12 個月。如果細胞生長不良，可以再添加適量L谷氨酰胺。血清細胞培養(yǎng)液中添加的血清有牛血清、馬血清、人血清等，其中牛血清是最常用的血清，分為胎牛血清和新生小牛血清。新生小牛血清是從剛出生的尚未哺乳的小牛中分離出來的血清，如廠家能做到這一點，新生小牛血清的質(zhì)量與胎牛血清的質(zhì)量相差不大。血清的質(zhì)量，種類及使用的濃度都有可能影響細胞的生長，而不同批次的血清支持細胞生長的能力也不同，尤其是對克隆細胞的生長，某些批次血清可能含有毒性或抑制細胞生長的物質(zhì)。4℃冰箱中保存時間切勿超過1 個月。（2）一般廠商提供的血清為無菌，無需再過濾除菌。（3）瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法：20℃ 至 70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1 天。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻（小心勿造成氣泡），使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。（4）熱滅活是指56℃, 30 分鐘加熱已完全解凍的血清。此熱處理的目的是使血清中的補體成分（plement）滅活。補體參與反應(yīng)有：細胞毒作用, 平滑肌細胞收縮, 肥大細胞和血小板釋放組胺, 增強吞噬作用, 促進淋巴細胞和巨噬細胞發(fā)生化學(xué)趨化和活化。（6）血清中的沉淀物絮狀物：主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成，這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量。顯微鏡下“小黑點”：經(jīng)過熱處理過的血清，沉淀物的形成會顯著增多。一般情況下，此小黑點不會影響細胞生長，但如果懷疑血清質(zhì)量，則應(yīng)立即停止使用，更換另一批號的血清。細胞培養(yǎng)環(huán)境實驗室設(shè)計細胞培養(yǎng)是一種無菌操作技術(shù)，要求工作環(huán)境和條件必須保證無微生物污染和不受其它有害因素的影響。細胞培養(yǎng)室的設(shè)計原則一般是無菌操作區(qū)設(shè)在室內(nèi)較少走動的內(nèi)側(cè)，常規(guī)操作和封閉培養(yǎng)于一室，而洗刷消毒在另一室。（2）無菌操作間：一般由更衣間、緩沖間和操作間三部分組成。緩沖間可放置電冰箱、冷藏器及消毒好的無菌物品等。（5）分析間：顯微鏡、計算機及打印機等。常準(zhǔn)備量是使用量的三倍。常用的器皿有下面幾種。（2）培養(yǎng)瓶：根據(jù)培養(yǎng)細胞種類要求不同培養(yǎng)瓶的形態(tài)各異，用于細胞傳代培養(yǎng)的細胞要求瓶壁厚簿均勻，便于細胞貼壁生長和觀察，瓶口要大小一致，口徑一般不小于1cm，允許吸管伸入瓶內(nèi)任何部位，規(guī)格有200ml、100ml、50ml、25ml、10ml 等幾種。分直徑30mm、60mm、120mm 等幾種。其改良后管上部有球型刻度稱改良吸管，刻度吸管用于移動液體。短吸管也叫滴管，分彎頭和直頭兩種。前者分別為50ml、30ml、15ml；后者則多為10ml 和5ml。細胞培養(yǎng)溫度維持培養(yǎng)細胞旺盛生長，必須有恒定而適宜的溫度?！?77。培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力較對高溫強，溫度上升不超過39℃時，細胞代謝與溫度成正比；人體細胞在3940℃1 小時，即能受到一定損傷，但仍有可能恢復(fù)；在4041℃1 小時，細胞會普遍受到損傷，僅小半數(shù)有可能恢復(fù)；4142℃1 小時，細胞受到嚴重損傷，大部分細胞死亡，個別細胞仍有恢復(fù)可能；當(dāng)溫度在43℃以上1 小時，細胞全部死亡。細胞代謝隨溫度降低而減慢。但是，如果向培養(yǎng)液中加入一定量的冷凍保護劑（二甲亞砜或甘油），可在深低溫下如－80℃或－196℃（液氮）長期保存。氧氣參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生供給細胞生長增殖的能量和合成細胞生長所
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