細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件-免費(fèi)閱讀
【正文】 慢 細(xì)胞復(fù)蘇方法 （ l） 從液氮中取出冷凍管 ， 迅速投入 37～ 38 ℃ 水浴中 ， 使其融化 （ 1分鐘左右 ） 。 ? ? 如果緩慢冷凍，可使細(xì)胞 逐步脫水 ，細(xì)胞內(nèi)不致產(chǎn)生大的冰晶；相反．結(jié)晶就大，大結(jié)晶會(huì)造成細(xì)胞膜、細(xì)胞器的損傷和破裂。再用酶標(biāo)儀測(cè)定 OD值 ? MTT法簡單快速、準(zhǔn)確，廣泛應(yīng)用于 新藥篩選、細(xì)胞毒牲試驗(yàn)、腫瘤放射敏感性實(shí)驗(yàn) 等。 4 用吸管吸取瓶內(nèi)培養(yǎng)液，反復(fù)吹打瓶壁細(xì)胞，形成細(xì)胞懸液。 調(diào)節(jié) pH值至 加血清（終濃度 10％） 細(xì)胞傳代方法 根據(jù)細(xì)胞生長的恃點(diǎn)，傳代方法有 3種。 無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。 ⑤ 各種生長因子 ⑥ 轉(zhuǎn)移蛋白 ⑦ 不明成分 ? 一般說來．含 5％小牛血清的培養(yǎng)基對(duì)大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長一般需加 10％血清． ? 對(duì)于血清支持細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對(duì)血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚． ? 血清中不僅存在促細(xì)胞生長因子，同對(duì)也存在細(xì)胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。 ? 成分復(fù)雜， 影響對(duì)某些實(shí)驗(yàn)產(chǎn)物的提取和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的分析 。 自動(dòng)雙重純水蒸餾器 純水儀 微孔板震蕩器 酶標(biāo)儀 培 養(yǎng) 板 培養(yǎng)瓶，培養(yǎng)皿 移液管，移液槍 ? 常用玻璃器皿清洗 ? 浸泡（自來水）、刷洗（洗衣粉）、酸泡（ 24小時(shí)）、 ? 流水沖洗、蒸溜水浸泡和沖洗、 50℃ 烘干 清潔液的配制 2 細(xì)胞培養(yǎng)用液的配制 水：新鮮配置的三蒸水或去離子水 平衡鹽溶液：無 Ca2+、 Mg2+的緩沖液 PBS： NaCl g KCl g g KH2PO4 加水至 1000 ml ? 消化液 ： ? 胰蛋白酶作用于與賴氨酸或精氨酸相連接的肽鍵 ，除去細(xì)胞間粘蛋白及糖蛋白 ， 影響細(xì)胞骨架 ， 從而使細(xì)胞分離 。主要用干玻璃 ?器皿消毒 ?濾器：過濾除菌：大多數(shù)培養(yǎng)用液，如人工合成培養(yǎng)基、血清、 ?酶液等均采用濾過法除菌 ?超凈工作臺(tái)：為細(xì)胞操作提供無菌環(huán)境 ?紫外燈 ：紫外線消毒。此時(shí)細(xì)胞質(zhì)回縮，胞體呈圓球形。 ?細(xì)胞培養(yǎng)：使用單個(gè)細(xì)胞懸液 ?組織培養(yǎng)：使用組織塊（ ～ 1立方毫米）或薄片（厚 毫米） ?器官培養(yǎng)：使用器官原基或器官的一部分或整個(gè)器宮 原代培養(yǎng)細(xì)胞的生命歸宿 ?原代培養(yǎng)期 ?傳代期 ?衰退期 ?有限細(xì)胞
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