細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件-文庫(kù)吧在線文庫(kù)
【正文】 分鐘一 4小時(shí)貼壁。凈化空氣徐 徐通過工作臺(tái)面，使工作臺(tái)內(nèi)構(gòu)成無菌環(huán)境。 ? 胰蛋白酶是一種黃白色 粉末 ， 用無 Ca2+、 Mg2+的PBS緩沖液配制常用的胰蛋白酶液濃度是 ％ 。目前已設(shè)計(jì)出許多種培養(yǎng)基，如TC19 MEM、 RPMI16 DMEM等。 ?無血清培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充成分組成 。 ?常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、馬血清等，其中以 胎牛血清 質(zhì)量最好。 直接傳代法：懸浮細(xì)胞沉淀在瓶壁時(shí)，將上清培養(yǎng)液去除 l／ 2一 2／3，然后用吸管直接吹打形成細(xì)胞懸液再傳代。 6 加適量新鮮培養(yǎng)液于接種于細(xì)胞懸液的新培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)。 （ 3）吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液后，加入 DMSO液（ 150微升／孔），將培養(yǎng)板置于微孔板扳蕩器上振蕩 10分鐘，使結(jié)晶物溶解。 慢凍程序 ? 標(biāo)準(zhǔn)程序 ： ? 當(dāng)溫度在 25 ℃ 以上時(shí)， 1～ 2 ℃ /min ? 當(dāng)溫度達(dá) 25 ℃ 以下時(shí)， 5～ 10 ℃ /min ? 當(dāng)溫度達(dá) 100℃ 時(shí)，可迅速放入液氮中（ 196度） ? 細(xì)胞凍存器 ? 簡(jiǎn)易程序 ： ? 將冷凍管 （ 管口要朝上 ） 放入紗布袋內(nèi) ， 紗布袋系以 線繩 ，通過線繩將 紗布袋固定于液氮罐罐口 ， 按每分鐘溫度下降 1～ 2 ℃ 的速度 ， 在 40分鐘內(nèi)降至液氮表面 ， 停 30分鐘后 ， 直接投人液氮中 。 （ 3） 低速離心 10分鐘 。 4. 1年后，存活率可達(dá) 80％ — 90％。細(xì)胞凍存與細(xì)胞傳代保存相比可以減少入力、經(jīng)費(fèi)，減少污染，減少細(xì)胞生物學(xué)特性變化。 臺(tái)盼藍(lán)法 活細(xì)胞不被染色 ， 死細(xì)胞染成藍(lán)色 ， 用活細(xì)胞占 細(xì)胞中的百分比表示細(xì)胞活力 已淘汰 四唑鹽（ MTT）比色法 ? 四唑鹽 （ MTT） 商品名為噻唑藍(lán) ， ? 四吐鹽比色法的原理：活細(xì)胞中脫氫酶能將四 唑 鹽還原成不溶干水的藍(lán)紫色產(chǎn)物（ formazan)，并沉淀在細(xì)胞中，而死細(xì)胞沒有這種功能。 貼壁生長(zhǎng)細(xì)胞傳代方法 1 吸光培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液 2 加入 12 ml ％的胰蛋白酶液 (以消化液能覆蓋整個(gè)瓶底為準(zhǔn)） 靜置 210 min（顯微鏡下動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)）。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 100單位。 適用于某種細(xì)胞株的培養(yǎng)液 ， 很可能不適合另一種細(xì)胞株的生長(zhǎng) 。 ? 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存 ，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖 ， 還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基 （ 如血清 ） 。 ? 天然培養(yǎng)基 ： ? 天然培養(yǎng)基有血清、血漿、和組織提取液（如雞胚和牛胚浸液）。定期消毒 (90 ℃ ，14 h)。 對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期 ： 細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間變化成倍增長(zhǎng)，活力最佳，最適合進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。見于各種實(shí)體瘤細(xì)胞 懸浮生長(zhǎng) ： 于懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)，不需要貼附于支持物表面。見于各種 造血系統(tǒng) 腫瘤細(xì)胞 每代貼附生長(zhǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)過程 ?游離期
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