細(xì)胞培養(yǎng)基礎(chǔ)知識(shí)ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-30 03:43 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 易發(fā)生支原體污染 培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基 合成培養(yǎng)基是根據(jù)細(xì)胞生存所需物質(zhì)的種類和數(shù)量，用人工方法模擬合成的。目前已設(shè)計(jì)出許多種培養(yǎng)基，如TC19 MEM、 RPMI16 DMEM等。 合成培養(yǎng)基主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無機(jī)鹽和其它一些輔助物質(zhì)。 優(yōu)點(diǎn) ：標(biāo)準(zhǔn)化生產(chǎn)，組分和含量相對固定。 成本低 缺點(diǎn) ： 缺少某些成分，不能完全滿足體外細(xì)胞生長需要。 ? 人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存 ，要想使細(xì)胞生長和繁殖 ， 還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基 （ 如血清 ） 。 血清中含有 ： ① 多種蛋白質(zhì) （ 白蛋白 、 球蛋白 、 鐵蛋白等 ） ② 多種金屬離子； ③ 激素； ④ 促貼附物質(zhì) ， 如纖粘蛋白 、 冷析球蛋白 、 膠原等 。 ⑤ 各種生長因子 ⑥ 轉(zhuǎn)移蛋白 ⑦ 不明成分 ? 一般說來．含 5％小牛血清的培養(yǎng)基對大多數(shù)細(xì)胞可以維持細(xì)胞不死．但支持細(xì)胞生長一般需加 10％血清． ? 對于血清支持細(xì)胞生長的生物學(xué)效應(yīng)已得到證明，但對血清中的復(fù)雜成分至今尚未完全清楚． ? 血清中不僅存在促細(xì)胞生長因子，同對也存在細(xì)胞生長抑制因子或毒性因子，因此在含血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)的細(xì)胞所反映的生物學(xué)特性是細(xì)胞和復(fù)雜血清因子的綜合反應(yīng)。 ? 在生長因子、蛋白質(zhì)工程、基因表達(dá)調(diào)控等研究領(lǐng)域，迫切需要用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞． ?無血清培養(yǎng)基的主要研制策略：在基礎(chǔ)培養(yǎng)基中補(bǔ)充各種必需因子，如 激素、生長因子 、 結(jié)合蛋白 、 貼壁和擴(kuò)展因子 等。 ?無血清培養(yǎng)基由基礎(chǔ)培養(yǎng)基和替代血清的補(bǔ)充成分組成 。 ?1975年 ， Sato首次成功地用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)了垂體細(xì)胞株 ， 近 20多年來已報(bào)道了幾十種細(xì)胞系在無血清培養(yǎng)基中成功地生長和增殖 。 ?無血清細(xì)胞培養(yǎng)基的使用保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性 、 可重復(fù)性和穩(wěn)定性 ， 減少了細(xì)胞污染 ， 簡化了提純和鑒定各種細(xì)胞產(chǎn)物的程序 。 ? 向無清培養(yǎng)液中能促進(jìn)細(xì)胞系生長的補(bǔ)加物都是獨(dú)特的 。 適用于某種細(xì)胞株的培養(yǎng)液 ， 很可能不適合另一種細(xì)胞株的生長 。 即使同源組織的不同細(xì)胞株 ， 所需 補(bǔ)加物 也不同 。 無血清培養(yǎng)基尚處于研究階段，難以推廣。 目前，絕大多數(shù)人工合成培養(yǎng)基使用時(shí)還需添加血清 ?血清質(zhì)量好壞是實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。 ?常用血清有胎牛血清、新生牛血清、小牛血清、兔血清、馬血清等，其中以 胎牛血清 質(zhì)量最好。 ?優(yōu)質(zhì)血清的標(biāo)準(zhǔn)：透明，淡黃色，無沉淀物，無細(xì)菌、支原體、病毒污染。 ?血清的滅活（消除補(bǔ)體活性）： 56 ℃ ， 30 分鐘 ?血清的消毒：過濾除菌 抗生素的使用 ： 在培養(yǎng)液配制后，培養(yǎng)液內(nèi)常加適量抗生素，以抑制可能存在的細(xì)菌的生長。 通常是 青霉素和鏈霉素 聯(lián)合使用。培養(yǎng)基內(nèi)青霉素、鏈霉素最終使用濃度為每毫升 10
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