動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的生物學(xué)知識(編輯修改稿)
2025-02-14 04:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 來細(xì)胞能夠轉(zhuǎn)化，獲得永生，成為 無限細(xì)胞系 。 ? 細(xì)胞系 ? 原代細(xì)胞經(jīng)第一次傳代后形成的能夠繼續(xù)進(jìn)行傳代培養(yǎng)的細(xì)胞群體稱為細(xì)胞系，一般為有限細(xì)胞系。 ? 原代培養(yǎng)后得到細(xì)胞系，再經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，一部分細(xì)胞死亡，一部分細(xì)胞繼續(xù)生長并轉(zhuǎn)化為 連續(xù)細(xì)胞系 或 無限細(xì)胞系 。 ? 細(xì)胞株 ? 從一個(gè)經(jīng)生物學(xué)鑒定的細(xì)胞系 經(jīng)過 克隆化或其他篩選方法 獲得的 單一類型的細(xì)胞群體 被稱為細(xì)胞株。 重要概念：細(xì)胞系 與 細(xì)胞株 ? 在體外培養(yǎng)的細(xì)胞的生長過程中，當(dāng)細(xì)胞繁殖到一定密度后，將之分開并轉(zhuǎn)移至新的培養(yǎng)皿中的（稱之為 接種 ），使之繼續(xù)繁殖生長，即為 傳代 。 ? 細(xì)胞自接種至新的培養(yǎng)皿中至其下一次再傳代接種的時(shí)間稱為細(xì)胞的一代，每代細(xì)胞的生長過程可分為四個(gè)階段： ? （ 24~96h） ? （ 3~5天） ? （傳代時(shí)機(jī)） ? 第四節(jié) 體外培養(yǎng)細(xì)胞 的 生長條件 ? 體外培養(yǎng)的細(xì)胞需要合適的生長環(huán)境和必需的條件才能生存、繁殖。 ? 1. 無污染環(huán)境 ? ? 3. pH ? ? ? ? ? ? 在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，離體細(xì)胞對任何毒性物質(zhì)都非常敏感。因此，培養(yǎng)環(huán)境的無污染是保證細(xì)胞生存的首要條件 ，培養(yǎng)環(huán)境的無污染主要包括： 無毒性物質(zhì)污染 、 無微生物污染 和 無其他細(xì)胞污染 。 ? 保證無污染的措施有 ： ? 所有培養(yǎng)材料、器具要嚴(yán)格按照一定程序嚴(yán)格清洗，絕對保證無毒和潔凈，使用前必須進(jìn)行消毒處理； ? 細(xì)胞培養(yǎng)過程中所需的氣體、液體，均應(yīng)去除細(xì)菌、病毒和支原體等各類污染物； ? 所有操作過程都必須在潔凈條件下進(jìn)行。 ? 維持細(xì)胞增殖生長，必須有適宜的溫度。人和哺乳動(dòng)物培養(yǎng)細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)溫度為 ℃ 177。 ℃ ，若偏離這一溫度范圍，細(xì)胞的正常代謝會(huì)受到影響，甚至死亡。 ? 總的說來， 培養(yǎng)細(xì)胞對低溫的耐受力比對高溫強(qiáng) 。 ? 高溫 會(huì)使細(xì)胞內(nèi)酶失活并破壞細(xì)胞膜上的脂類結(jié)構(gòu)， 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡 。溫度不超過 39 ℃ 時(shí)，細(xì)胞代謝強(qiáng)度與溫度成正比；超過 41 ℃ 時(shí)，細(xì)胞受損；超過 43 ℃ 時(shí)，細(xì)胞死亡。 ? 低溫 會(huì)降低細(xì)胞內(nèi)酶的活性， 對細(xì)胞傷害不大 ； ? 溫度降至冰點(diǎn)以下時(shí)，細(xì)胞可因胞質(zhì)結(jié)冰受損而死亡。但如果向培養(yǎng)液中加一定量的 保護(hù)劑（如 DMSO、甘油 ），改變冰晶的性質(zhì)， 裝入 凍存管 保存于液氮（溫度可達(dá) 196 ℃ ）中 ，能長期貯存，細(xì)胞解凍復(fù)蘇后，仍能繼續(xù)增殖生長，細(xì)胞的生物學(xué)性狀不受任何影響，這是保存細(xì)胞的最主要手段。 ? 合適的 pH也是細(xì)胞生存的必要條件之一，不同細(xì)胞對 pH的要求不同，哺乳動(dòng)物細(xì)胞一般為 ~ 。 ? 一般來說，原代細(xì)胞對 pH變動(dòng)的耐受差，而傳代細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞對 pH變動(dòng)的耐受較強(qiáng)。當(dāng) pH超出合適的范圍，如低于 6或高于 胞產(chǎn)生不利的影響，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞蛻變或死亡。 ? 一般來說，細(xì)胞對堿性不如對酸性的變化耐受。 ? 為保持培養(yǎng)環(huán)境的適宜的 pH條件，可采用的措施： ? 在培養(yǎng)液中加入緩沖劑以穩(wěn)定培養(yǎng)液的 pH； ? 在開放式培養(yǎng)環(huán)境中，通入約 5%的 CO2，平衡培養(yǎng)過程中的 CO2流失。 ? 氣體是細(xì)胞生存的必須條件之一，其主要包括 O2和 CO2 。 ? O2參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生能量供給細(xì)胞生長、增殖和合成各種所需成分。不同的細(xì)胞和同一細(xì)胞的不同生長時(shí)期，對氧的需求各不相同。細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中的溶氧要適度，溶氧過低會(huì)影響細(xì)胞的能力代謝，從而影響細(xì)胞的生長；反之， 溶氧過高是也會(huì)對細(xì)胞產(chǎn)生毒性 ，影響細(xì)胞的能量代謝。在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過程中溶解氧一般控制在 5%~80%。 ? CO2可以參與調(diào)節(jié)維持培養(yǎng)環(huán)境的 pH。 ? 滲透壓對動(dòng)物細(xì)胞也有影響。多數(shù)傳代細(xì)胞，對滲透壓有較強(qiáng)的耐受性，而原代
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