動物細胞培養(yǎng)的生物學知識(編輯修改稿)
2025-02-14 04:20 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 來細胞能夠轉化，獲得永生，成為 無限細胞系 。 ? 細胞系 ? 原代細胞經(jīng)第一次傳代后形成的能夠繼續(xù)進行傳代培養(yǎng)的細胞群體稱為細胞系，一般為有限細胞系。 ? 原代培養(yǎng)后得到細胞系，再經(jīng)多次傳代培養(yǎng)后，一部分細胞死亡，一部分細胞繼續(xù)生長并轉化為 連續(xù)細胞系 或 無限細胞系 。 ? 細胞株 ? 從一個經(jīng)生物學鑒定的細胞系 經(jīng)過 克隆化或其他篩選方法 獲得的 單一類型的細胞群體 被稱為細胞株。 重要概念：細胞系 與 細胞株 ? 在體外培養(yǎng)的細胞的生長過程中，當細胞繁殖到一定密度后，將之分開并轉移至新的培養(yǎng)皿中的（稱之為 接種 ），使之繼續(xù)繁殖生長，即為 傳代 。 ? 細胞自接種至新的培養(yǎng)皿中至其下一次再傳代接種的時間稱為細胞的一代，每代細胞的生長過程可分為四個階段： ? （ 24~96h） ? （ 3~5天） ? （傳代時機） ? 第四節(jié) 體外培養(yǎng)細胞 的 生長條件 ? 體外培養(yǎng)的細胞需要合適的生長環(huán)境和必需的條件才能生存、繁殖。 ? 1. 無污染環(huán)境 ? ? 3. pH ? ? ? ? ? ? 在細胞培養(yǎng)過程中，離體細胞對任何毒性物質(zhì)都非常敏感。因此，培養(yǎng)環(huán)境的無污染是保證細胞生存的首要條件 ，培養(yǎng)環(huán)境的無污染主要包括： 無毒性物質(zhì)污染 、 無微生物污染 和 無其他細胞污染 。 ? 保證無污染的措施有 ： ? 所有培養(yǎng)材料、器具要嚴格按照一定程序嚴格清洗，絕對保證無毒和潔凈，使用前必須進行消毒處理； ? 細胞培養(yǎng)過程中所需的氣體、液體，均應去除細菌、病毒和支原體等各類污染物； ? 所有操作過程都必須在潔凈條件下進行。 ? 維持細胞增殖生長，必須有適宜的溫度。人和哺乳動物培養(yǎng)細胞的標準溫度為 ℃ 177。 ℃ ，若偏離這一溫度范圍，細胞的正常代謝會受到影響，甚至死亡。 ? 總的說來， 培養(yǎng)細胞對低溫的耐受力比對高溫強 。 ? 高溫 會使細胞內(nèi)酶失活并破壞細胞膜上的脂類結構， 誘導細胞凋亡 。溫度不超過 39 ℃ 時，細胞代謝強度與溫度成正比；超過 41 ℃ 時，細胞受損；超過 43 ℃ 時，細胞死亡。 ? 低溫 會降低細胞內(nèi)酶的活性， 對細胞傷害不大 ； ? 溫度降至冰點以下時，細胞可因胞質(zhì)結冰受損而死亡。但如果向培養(yǎng)液中加一定量的 保護劑（如 DMSO、甘油 ），改變冰晶的性質(zhì)， 裝入 凍存管 保存于液氮（溫度可達 196 ℃ ）中 ，能長期貯存，細胞解凍復蘇后，仍能繼續(xù)增殖生長，細胞的生物學性狀不受任何影響，這是保存細胞的最主要手段。 ? 合適的 pH也是細胞生存的必要條件之一，不同細胞對 pH的要求不同，哺乳動物細胞一般為 ~ 。 ? 一般來說，原代細胞對 pH變動的耐受差，而傳代細胞或腫瘤細胞對 pH變動的耐受較強。當 pH超出合適的范圍，如低于 6或高于 胞產(chǎn)生不利的影響，嚴重時可導致細胞蛻變或死亡。 ? 一般來說，細胞對堿性不如對酸性的變化耐受。 ? 為保持培養(yǎng)環(huán)境的適宜的 pH條件，可采用的措施： ? 在培養(yǎng)液中加入緩沖劑以穩(wěn)定培養(yǎng)液的 pH； ? 在開放式培養(yǎng)環(huán)境中，通入約 5%的 CO2，平衡培養(yǎng)過程中的 CO2流失。 ? 氣體是細胞生存的必須條件之一，其主要包括 O2和 CO2 。 ? O2參與三羧酸循環(huán)，產(chǎn)生能量供給細胞生長、增殖和合成各種所需成分。不同的細胞和同一細胞的不同生長時期，對氧的需求各不相同。細胞培養(yǎng)環(huán)境中的溶氧要適度，溶氧過低會影響細胞的能力代謝，從而影響細胞的生長；反之， 溶氧過高是也會對細胞產(chǎn)生毒性 ，影響細胞的能量代謝。在動物細胞培養(yǎng)過程中溶解氧一般控制在 5%~80%。 ? CO2可以參與調(diào)節(jié)維持培養(yǎng)環(huán)境的 pH。 ? 滲透壓對動物細胞也有影響。多數(shù)傳代細胞，對滲透壓有較強的耐受性，而原代
黨政相關相關推薦
鄂ICP備17016276號-1