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正文內(nèi)容

細(xì)胞培養(yǎng)1培養(yǎng)基制備26相差顯微鏡(編輯修改稿)

2024-09-12 02:18 本頁(yè)面
 

【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 如:成纖維細(xì)胞 、 心肌與平滑肌細(xì)胞 、 表皮細(xì)胞 、 骨與軟骨細(xì)胞 、 腫瘤細(xì)胞 懸浮型細(xì)胞: 不必附著于固相支持物表面 , 而 在懸浮狀態(tài)下即可生長(zhǎng)的細(xì)胞 。 如:血 、 脾及骨髓培養(yǎng)的細(xì)胞及某些癌細(xì)胞 培養(yǎng)細(xì)胞的生長(zhǎng)特點(diǎn) 粘附并伸展 是大多數(shù)體外培養(yǎng)細(xì)胞的基本生長(zhǎng)特點(diǎn)。細(xì)胞在接種后很快便可見(jiàn)到細(xì)胞伸出偽足附著,與支持物形成一些接觸點(diǎn),接著細(xì)胞逐漸呈扁平或放射狀伸展,逐漸形成上皮型或成纖維型或其他類型生長(zhǎng)。 密度依賴性 細(xì)胞接種密度過(guò)高或過(guò)低都會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)、增殖。當(dāng)細(xì)胞粘附生長(zhǎng)、融合成單層時(shí),細(xì)胞變得較為擁擠,而扁平形狀的程度減少,與培養(yǎng)基的接觸面減少,同時(shí),培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物逐漸消耗,細(xì)胞分裂減弱,增殖減慢。 培養(yǎng)細(xì)胞的污染 Amphotericin B (兩性霉素) pen/strep (雙抗) 培養(yǎng)細(xì)胞的污染 Plasmocin Amphotericin B (兩性霉素) 實(shí)驗(yàn)七、細(xì)胞培養(yǎng)基配制與過(guò)濾除菌 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?熟練掌握培養(yǎng)基 (DMEM)的配制及過(guò)濾除菌的方法 實(shí)驗(yàn)原理: 組織培養(yǎng)使用的培養(yǎng)基其主要成分是氨基酸、維生素、碳水化合物、無(wú)機(jī)離子和其他輔助物質(zhì)。 L-谷氨酰胺在細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)是必須的,脫掉氨基后, L-谷氨酰胺可作為培養(yǎng)細(xì)胞的能量來(lái)源、參與蛋白質(zhì)的合成和核酸代謝。 L谷氨酰胺在高壓滅菌后被大幅降解而產(chǎn)生大量毒性氨 ,對(duì)細(xì)胞有毒性。因而含有 L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基不能用高壓滅菌的方式除菌。一般培養(yǎng)基中大都使用HCO3/CO32/H+作為 pH 的緩沖系統(tǒng),由于 NaHCO3容易分解為二氧化碳,很不穩(wěn)定,因而含有 NaCO3的培養(yǎng)基也不能用高壓滅菌的方式除菌。市售培養(yǎng)基可分為兩種:一是可進(jìn)行高壓滅菌的培養(yǎng)基,這類培養(yǎng)基不含 L-谷氨酰胺和 NaCO3,須滅菌后再添加 L-谷氨酰胺和 NaCO3。另一種是含有 L-谷氨酰胺,配制的同時(shí)在添加NaCO3,這類培養(yǎng)基不能用高壓滅菌德的方式除菌,只能采用過(guò)慮除菌的方式。 實(shí)驗(yàn)材料 ? 材料: 1 000 ml、250ml燒杯、 100ml、250 ml藍(lán)蓋瓶,15ml,50ml 塑料離心管、 0. 22 μm的微孔濾膜、 50ml一次性注射器,超純水,小牛
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